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大鼠骨髓经ficoll分层后培养。一周换液2次。三周后，可以传代了。然后大约7天可以传代一次。跟das1977网友的方法稍微有点不同。 1. 弃去旧培养液。 2.预热的PBS液轻缓漂洗细胞两遍，尽量洗去残余血清，弃去PBS 3 加0.25%胰酶0.05%EDTA于37度条件下消化，约两到三分钟，倒置相差显微镜下观察，细胞缩成圆形漂浮为准。我还用手轻轻击打培养皿的两侧，希望可以加速其消化。实验室里的 ...

【求助】不同细胞siRNA转染效率，如何检测？ 参与者：SmallDonkey 最近在做RNAi，用的siRNA，然后Real-Time PCR，发现抑制率仅20-30%左右，与说明书说的70-90%相去甚远 咨询一些相关人员后，认为可能是转染效率的问题，如果转染效率仅有20-30%，那抑制20-30%也就不少了。 因此想请教一下，一般不同细胞通常转染效率是多少？ 我用的是MT4（悬浮）、CEM（ ...

HEK 923 subculture method in CELL Biology 1. prepare the devices in the hood such as the pipette and flask(T-75) petri dishes(4undefined10) 2.prewarm the CDMEM DPBSTE(the combination solution by trysine and ...

人胃腺癌细胞MNK-45体内传代及接种实体瘤的详细步骤： 1、收集对数增长期的MNK-45细胞若干瓶制备成瘤细胞悬液undefined10^8个/ml左右接种到裸鼠胁部皮下。 2、待肿瘤生长到0.8g左右时，选择1-2只荷瘤（瘤块必须要求生长良好且无破损）裸鼠，颈椎脱臼处死，置75%酒精浸泡1-2分钟后裸鼠置超净工作台，于无菌条件下，剥取瘤块并将瘤块置200目细胞筛用玻璃棒研磨后用生理盐水或培养液冲洗，并用1容 ...

研制CA125时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）试剂盒。方法 采用双抗体夹心法建立CA125TRFIA试剂盒，对试剂盒各项指标进行评价。结果 该试剂盒的工作范围为10~600U/mL，分析灵敏度为1.07U/mL，批内、批间的精密度分别为4.5%~8.1%，V6.9%~11.5%。与CEA、AFP、CA50、CA15-3、CA19-9无交叉反应。稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年，37℃稳定7d。425份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0~37U/mL。123份血清标本用本试剂盒与国外其他方法的同类试剂盒同时检测其相关系数为0.939。结论 试剂盒各项指标均达到临床检测要求，可替代国外同类产品试剂盒。

Bcap-37和MDA-MB-435细胞都是人乳腺癌细胞，培养液用DMEM或1640均可，小牛血清10％就足够，不过感觉435细胞用DMEM长得更旺一些。 两种细胞都很好养，Bcap-37可称为是最漂亮的乳腺癌细胞，一个个成排列均匀的瓜子状，形态规则，长得也快，一般1：2传代后2－3天即可长满。435长的较慢，需4－5天。 传代常规用0.25％的胰酶消化后用含血清的培养基终止消化，视消化程度而决定 ...

These are basically Tim's procedures and have been used successfully by numerous members of our lab and by others around us。 一、Checking Peptide Thiol Groups Do this before thiol coupling either to K ...

摘要： 流式细胞技术在细胞定量检测方面是最先进检测技术，流式细胞仪在临床和科研领域得到广泛运用。 概述： 分析细胞学是细胞定量分析的学科，流式细胞技术（Flow Cytometer ，FCM）是分析细胞中的一个重要领域，该技术为细胞学研究手段之一，能够对细胞和细胞器及生物大分子进行高达每秒上万个染色体的分析，而且一个细胞多参数分析并可分选细胞。这种以流动的方式（相对静态方式）测量细胞与传统的用荧光 ...

摘要： 简要论述了流式细胞仪（flow cytometry ，FCM）的工作原理，并对其在生物学基础科学研究中的应用进行阐述，包括对细胞凋亡、细胞周期、免疫细胞、细胞受体的研究应用。 流式细胞仪（flow cytometry ，FCM）研制、发展、革新和应用领域的扩展，都是由生物学、生物技术、计算机科学、电子工程学、流体力学、激光技术、分子生物学、有机化学和物理学等多个学科综合发展和应用而实现的。 ...

【求助】不同细胞siRNA转染效率，如何检测？ 参与者：SmallDonkey 最近在做RNAi，用的siRNA，然后Real-Time PCR，发现抑制率仅20-30%左右，与说明书说的70-90%相去甚远 咨询一些相关人员后，认为可能是转染效率的问题，如果转染效率仅有20-30%，那抑制20-30%也就不少了。 因此想请教一下，一般不同细胞通常转染效率是多少？ 我用的是MT4（悬浮）、CEM（ ...

【求助】关于CHO-K1细胞稳定转染和瞬转COS的问题急 参与者：sisars 各位大虾小弟我最近一直在瞬转COS细胞分泌表达上清一直没有表达也浓缩过再做ELISA WB 都没有啊时间挺长了实在等不及了就想稳定转染cho-k1细胞系通过MSX来筛选加压25UM的MSX 结果还不到两个星期CHO全死了不知道怎么回事如果有表达的话应该是分泌表达的怎么我总是做不出来呢很是一个郁闷阿 质粒纯度和浓度都应该 ...

β2为了建立β2微球蛋白（β2-m）时间分辨荧光免疫分析。以羊抗兔抗体包被板条，双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺五乙酸络合Eu3+及标记β2-m，发光增强系统为以β二酮体为主的增强液。采用竞争法建立β2-m时间分辨荧光免疫分析，数据采用双对数法函数和四参数logistic函数数据处理程序处理。结果此法的批内和批间CV分别为2.25%和2.91%平均回收率为101.06%，灵敏度为0.06%mg/L，可测范围为0.06~12mg/L。本方法与白蛋白、肌红蛋白均无交叉反应。溶血对本法无临床初步应用所检测结果与放免法吻合。试验结果表明，β2-m-TRFIA法的敏感度、特异性、准确度等指标符合临床诊断要求。

【求助】如何运输细胞 参与者：fengxue19840112 我要从烟台把干细胞带回北京，路上大约需要20个小时，烟台这边的老师说可以把克隆挑下来悬浮在培养液里，放在一个EP管中带回去.然后再给它接种到新的滋养层细胞上.不知道有没有人这么做过，效果如何?可以的话请将答复发到我的邮箱里，非常感谢. 参与者：zhangzhanli2008 可以用干冰保存快运，一般１０公斤干冰３－４天应该没问题 参与者 ...

为建立抗-HCV的时间分辨免疫荧光分析法IFMA，以HCV抗原包被微孔板，样品中的抗-HCV、Eu3+标记羊抗人IgG形成夹心，以β-二酮体为增强液，数据采用Log-Logit函数和四参数Logistc函数数据处理程序处理。结果表明，方法的批内和批间CV分别为3.64%和4.39%，平均回收率105.58%，可测范围为1.01—17.34NCU/mL，灵敏度为0.03NCU/mL。本法与HB-sAg有0.23%的交叉，与 HBeAg有0.04%的交叉。278例正常对照组血清抗-HCV浓度均小于1NCU/mL。结果提示，高度灵敏、稳定的抗-HCV IFMA方法的建立为临床和科研工作提供了一种非放射性标记定量检测分析的方法。

摘要： 流式细胞仪是分选细胞结构与功能，准确迅速选标记细胞的仪器。本文讲述流式细胞仪的主要组件，工作原理及其实际应用。 流式细胞仪（flow cytometer）是采用流式细胞术的典型仪器，它能迅速的对单个细胞及其群体的化学物质的含量与种类作出分析，对含指定化学物质的细胞进行分选。 《流式细胞仪构成与工作原理》下载 点击这里下载 ...

Accuri 的C6流式细胞仪系统是一种全功能、二激光、六探测器分析流式细胞仪系统，包括：C6流式细胞仪、CFlow 软件、电脑。C6的流式细胞仪系统提供最畅销的流式细胞仪，而且价格少几倍。C6流式细胞仪系统以敏感的探测器捕获和激发前散射光和旁散射光，以及4个荧光探测器的可调光学过滤器。CFlow软件使搜集数据和分析变得简单快速。CFlow软件如此直观，让您启动并运行一个小时内得到您的Accuri ...

目的:合成固相时间分辨荧光免疫分析螯合剂的中间体-4,4'-二溴-6,6'-二甲基2,2'-联吡啶。方法:根据自行设计的合成路线，以2-氨基6-甲基吡啶为原料，经重氮化、乌尔曼偶联合成6,6'-二甲基-2,2-二吡啶，再经氧化、硝化、溴化、脱氧等合成4,4-二溴-6,6'-二甲基2,2-二吡啶。结果：经元素分析、红外光谱 ,核磁共振波谱等方法证明，成功的合成了4,4-二溴-6,6'-二甲基2,2'-二吡啶。结论：通过自行设计路线完成了4,4'-二溴-6,6'-二甲基-2,2'-二吡啶的合成，为固相时间分辨荧光免疫分析的应用提供了有价值的中间体和制备方法。

目录 前言 第1章 综述 第2章 液流系统 第3章 散射光信号及荧光信号 　　3.1 散射光信号 　　3.2 荧光信号 第4章 光电系统 　　4.1 光平台 　　4.2 光学滤片 　　4.3 信号探测器 　　4.4 阀值 第5 章 数据分析 　　5.1 数据采集及显示 　　5.2 设门 　　5.3&nb ...

通过固相时间分辨荧光免疫分析双功能螯合剂4,7-二氯磺基苯-1,10菲罗啉-2,9-二羧酸标记抗-乙型肝炎表面抗体（HBsAb）IgG实验，对于BCPDA标记蛋白质的方法进行了研究。结果表明：BCPDA在相对温和条件下能与蛋白质反应，反应后蛋白质的相对生物活性高于78%，标记比为 23～55，蛋白回收率达60%以上。在一定条件下与铕离子形成稳定的BCPDA-Eu3+-（HBsAb）IgG标记物。利用自建的分析方法，测定了标记过程的有关参数。并对标记物的某些光学特性进行了研究。

目的 　用竞争法建立抗HBc时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）方法。方法 　以基因重组HBcAg包被板，Eu3+.异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸 （Eu3+-DTTA）标记抗 HBc-IgG单克隆抗体，建立抗HBcTRFIA方法。数据采用Log2Logit函数和四参数Logistic函数数据处理程序处理。结果 　方法的批内和批间变异系数分别为2.30%和6.30%，回收率为96.72%，灵敏度为0.2NCU/ml。本方法与抗HBs和抗HBe无交叉反应，Eu3+标记物稳定6个月以上。结论 　TRFIA是一种新的抗HBc免疫检测技术，具有灵敏度高和稳定性好等优点，能够用于定量测定抗HBc-IgG。