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【求助】caspase-3的检测方法 参与者：yansunqin 在本版里有看到过有关caspase-3的检测方法 （1）：免疫细胞化学检测caspase-3蛋白的表达，用悬浮的细胞 （2）：western blot 理想结果：caspase-3有32ＫＤ的条带外，还出现了20ＫＤ和10ＫＤ大小的条带，表明caspase- 3被活花 （3）：RT-PCR检测mRNA的表达，用凝胶成像分析系统处理， ...

培养条件：RPMI-1640培养液，10%（胎牛或小牛）血清，5%CO2，37度饱和湿度孵箱培养。 细胞生长状态：上皮样贴壁生长。 传代： 细胞长满95%->弃培养液->0.25%胰酶消化2min->弃掉胰酶->加入培养液吹打贴壁细胞，将细胞悬液分瓶传代。若一传二，则3天长满；若一传三，则需要4-5天长满。 ...

红血球脆性试验（RBC Fragility test）是血液实验室用以检查贫血疾病的项目之一，特别是针对遗传性球状红血球贫血。本次实验在探讨新鲜检体之立刻反应与经37℃孵育24小时后检体反应结果的相关性及经孵育测试的参考值，并对以不同的转速离心做评估。结果发现经37℃孵育24小时的步骤是不可省略的，因只有如此才可筛检出具轻微症状的病人；我们以25位体检病人求得经37℃孵育24小时结果的参考值，分别 ...

本文探讨了时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）的背景、不同模式优缺点以及新配基设计原则，并讨论了TRFIA的未来研究方向。

我和师兄是从04年初就开始用LLC-PK1细胞系筛选多种类型的、数量极多的各种可能有用的新药，摸索发现消化液的配方为0.25％的胰酶+0.02%EDTA 就行了，要配在PBS中，如果能加Hepes那就更保险了（有一次实验室Hepes用光了，配液时没加Hepes，照样没问题） 消化步骤：吸走培液后最好用PBS过一遍－>50ML培养瓶加2ML在37ºC预热消化液－>37º ...

【求助】如何挑蚀斑？ 参与者：lxwgww 最近需要进行病毒的单克隆化，在论坛看到可进行挑蚀斑，受益很多！因为病毒是细胞结合毒，所以想参考细胞的单克隆化方法！ 看到有用滤纸挑细胞克隆的方法，不知道具体如何操作，是否可行？ 希望做过相关试验的战友能够提供细胞结合毒纯化的方法！？？ 参与者：smh9839 拿微量移液器，安黄枪头的，100μl或200μl的均可。 等蚀斑形成后，先在板子背面 ...

吸出培养瓶中的培养基，用PBS液洗涤1-2次； 加入已经在37度预热的消化液(0。25%胰酶+0。02%EDTA)少量(估计可以平铺培养瓶底部即可）； 在镜下看到细胞退缩变园，立即给予少量培养基终止消化，我一般的消化时间就在1分钟之内很好消化； 再用弯管吹打细胞成单细胞悬液后，按1：2或1：3分瓶即可。 ...

【求助】G418 原代细胞筛选 参与者：lxwgww 在论坛看了很多关于G418的帖子，正在做原代细胞转染的筛选，不知道是否可以使用G418 筛选？是否可以筛选到稳定的细胞株？？ 请做过相关研究的战友指教！！ 参与者：zhaolifei 分析转化的功能和表达需要DNA稳定转染至宿主细胞染色体。外源基因进入细胞后，部分能够通过细胞质进入细胞核内，根据细胞类型，至多80%的进入核内的外源DNA得到瞬时 ...

细胞复苏后，在显微镜下观察大约有80%~100%的细胞已经贴壁时用新鲜的培养基换掉原来的培养基，去除DMSO对细胞的毒害，估计复苏到换液的时间为0.5~1.5h。 2~3d细胞长满后传代，传代前先把培养基和0。2%的胰酶从冷库放到室温1~2H，由于冷库中的培养基温度与在温房的温差很大，这样做可以防止细胞"感冒"，然后把培养瓶中的废液倒掉，加入约5~10ml胰酶，把培养瓶平放使胰 ...

大鼠骨髓经ficoll分层后培养。一周换液2次。三周后，可以传代了。然后大约7天可以传代一次。跟das1977网友的方法稍微有点不同。 1. 弃去旧培养液。 2.预热的PBS液轻缓漂洗细胞两遍，尽量洗去残余血清，弃去PBS 3 加0.25%胰酶0.05%EDTA于37度条件下消化，约两到三分钟，倒置相差显微镜下观察，细胞缩成圆形漂浮为准。我还用手轻轻击打培养皿的两侧，希望可以加速其消化。实验室里的 ...

【求助】不同细胞siRNA转染效率，如何检测？ 参与者：SmallDonkey 最近在做RNAi，用的siRNA，然后Real-Time PCR，发现抑制率仅20-30%左右，与说明书说的70-90%相去甚远 咨询一些相关人员后，认为可能是转染效率的问题，如果转染效率仅有20-30%，那抑制20-30%也就不少了。 因此想请教一下，一般不同细胞通常转染效率是多少？ 我用的是MT4（悬浮）、CEM（ ...

HEK 923 subculture method in CELL Biology 1. prepare the devices in the hood such as the pipette and flask(T-75) petri dishes(4undefined10) 2.prewarm the CDMEM DPBSTE(the combination solution by trysine and ...

人胃腺癌细胞MNK-45体内传代及接种实体瘤的详细步骤： 1、收集对数增长期的MNK-45细胞若干瓶制备成瘤细胞悬液undefined10^8个/ml左右接种到裸鼠胁部皮下。 2、待肿瘤生长到0.8g左右时，选择1-2只荷瘤（瘤块必须要求生长良好且无破损）裸鼠，颈椎脱臼处死，置75%酒精浸泡1-2分钟后裸鼠置超净工作台，于无菌条件下，剥取瘤块并将瘤块置200目细胞筛用玻璃棒研磨后用生理盐水或培养液冲洗，并用1容 ...

研制CA125时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）试剂盒。方法 采用双抗体夹心法建立CA125TRFIA试剂盒，对试剂盒各项指标进行评价。结果 该试剂盒的工作范围为10~600U/mL，分析灵敏度为1.07U/mL，批内、批间的精密度分别为4.5%~8.1%，V6.9%~11.5%。与CEA、AFP、CA50、CA15-3、CA19-9无交叉反应。稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年，37℃稳定7d。425份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0~37U/mL。123份血清标本用本试剂盒与国外其他方法的同类试剂盒同时检测其相关系数为0.939。结论 试剂盒各项指标均达到临床检测要求，可替代国外同类产品试剂盒。

Bcap-37和MDA-MB-435细胞都是人乳腺癌细胞，培养液用DMEM或1640均可，小牛血清10％就足够，不过感觉435细胞用DMEM长得更旺一些。 两种细胞都很好养，Bcap-37可称为是最漂亮的乳腺癌细胞，一个个成排列均匀的瓜子状，形态规则，长得也快，一般1：2传代后2－3天即可长满。435长的较慢，需4－5天。 传代常规用0.25％的胰酶消化后用含血清的培养基终止消化，视消化程度而决定 ...

These are basically Tim's procedures and have been used successfully by numerous members of our lab and by others around us。 一、Checking Peptide Thiol Groups Do this before thiol coupling either to K ...

摘要： 流式细胞技术在细胞定量检测方面是最先进检测技术，流式细胞仪在临床和科研领域得到广泛运用。 概述： 分析细胞学是细胞定量分析的学科，流式细胞技术（Flow Cytometer ，FCM）是分析细胞中的一个重要领域，该技术为细胞学研究手段之一，能够对细胞和细胞器及生物大分子进行高达每秒上万个染色体的分析，而且一个细胞多参数分析并可分选细胞。这种以流动的方式（相对静态方式）测量细胞与传统的用荧光 ...

摘要： 简要论述了流式细胞仪（flow cytometry ，FCM）的工作原理，并对其在生物学基础科学研究中的应用进行阐述，包括对细胞凋亡、细胞周期、免疫细胞、细胞受体的研究应用。 流式细胞仪（flow cytometry ，FCM）研制、发展、革新和应用领域的扩展，都是由生物学、生物技术、计算机科学、电子工程学、流体力学、激光技术、分子生物学、有机化学和物理学等多个学科综合发展和应用而实现的。 ...

【求助】不同细胞siRNA转染效率，如何检测？ 参与者：SmallDonkey 最近在做RNAi，用的siRNA，然后Real-Time PCR，发现抑制率仅20-30%左右，与说明书说的70-90%相去甚远 咨询一些相关人员后，认为可能是转染效率的问题，如果转染效率仅有20-30%，那抑制20-30%也就不少了。 因此想请教一下，一般不同细胞通常转染效率是多少？ 我用的是MT4（悬浮）、CEM（ ...

【求助】关于CHO-K1细胞稳定转染和瞬转COS的问题急 参与者：sisars 各位大虾小弟我最近一直在瞬转COS细胞分泌表达上清一直没有表达也浓缩过再做ELISA WB 都没有啊时间挺长了实在等不及了就想稳定转染cho-k1细胞系通过MSX来筛选加压25UM的MSX 结果还不到两个星期CHO全死了不知道怎么回事如果有表达的话应该是分泌表达的怎么我总是做不出来呢很是一个郁闷阿 质粒纯度和浓度都应该 ...