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        ELISA测细胞上清肿瘤坏死因子TNF-a

        互联网

        13509

        【求助】ELISA测细胞上清肿瘤坏死因子TNF-a

        参与者:juaden

        我做体外细胞实验看某种药物刺激下小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-a的量

        买的是BIO-source的ELISA试剂盒

        标准曲线很正常

        但是挑选LPS作为阳性对照 阳性结果很不明显 几乎就是空白值

        请教做过的老师同学 LPS浓度和刺激时间有什么特别的要求么?

        还有 细胞上清测之前需要特殊处理么?如蛋白酶灭活之类的

        谢谢!

        参与者:sandy99

        1、LPS刺激浓度不同的文献有所不同,看下来,较常用的是20ng-200ng,可能不同厂家的活性不太一样,建议LZ可以做量效确定LPS的工作浓度。

        2、刺激时间一般6小时就够了。

        3、一般来说标准曲线能做出来,试剂盒的问题较小。

        4、测之间上清液没做特殊处理。

        5、我们用ELISA法做TNF还是比较顺利的,但Western blot做不出来,也是找不到原因。

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