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根据调亡的生化特征的检测方法 一、琼脂糖凝胶电泳 1）常规的琼脂糖凝胶电泳 方法一： 1．收集细胞（5×106）1000r/min，离心5min，去上清。 　　2．PBS洗一次，1000r/min，离心5min，去上清。 　　3．加细胞核裂解液500μl重悬细胞，50℃水浴，3～5h，不时振摇或37℃过夜。 　　4．加0.5ml平衡酚抽提，上下颠倒几次混匀，6000r/m ...

大豆的蛋白含量较高而且营养丰富，一般含蛋白30%——50%。大豆蛋白含有8种人体必需氨基酸，且比例比较合理，只是赖氨酸相对稍高，而蛋氨酸和半胱氨酸含量较低。目前大豆蛋白已成为一种重要的蛋白资源，特别是大豆分离蛋白含蛋白质90%以上，是一种优良的食品原料。大豆分离蛋白主要由11S球蛋白（Glycinin）和7S球蛋白（β-con-glycinin）组成，大约占整个大 ...

1、用异硫氰酸胍提取 提病毒的详细步骤，可参考（我提过N次做定量PCR都没问题）： 1、取200ul样品数+阴性对照+阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管　　2、加600ul异硫氰酸胍，然后加入对照和样品，再加200ul氯仿，颠倒混匀　　3、13000rpm离心15min　　4、在第3步离心快结束时，另取同样多eppendorf管，加入400ul -20度预冷的异丙醇　　5、取第3步离心的 ...

1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。 2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。 3、重复2。 4、加入5ml DNA提取缓冲液，(10m mol/L Tris-cl，0.1 mol/L EDTA，0.5% SDS)，混匀。5、加入25ul 蛋白酶K，使终浓度达到100ug/ml，混匀，50℃水浴3h。 6、用等体积的酚抽提一次，2500r/min 离心收集水相。用等体积的（酚，氯仿，异戊醇）混 ...

（一）试剂准备 1．TRIzol试剂。　　2．氯仿　　3．异丙醇　　4．75%乙醇（DEPC H2O配制）　　5．DEPC H2O （二）操作步骤 1． 样品处理：　　（1）培养细胞：收获细胞1-5×107，移入1.5ml离心管中，加入1ml Trizol，混匀，室温静置5min。　　（2）组织：取50-100mg组织（新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可）置1.5ml离心管中，加入1 ...

狂犬病概述：狂犬病俗称疯狗病，又名恐水病，是由狂犬病病毒引起的犬、猫和其他动物及人畜共患的一种急性传染病。病的特征是，发病犬、猫表现狂燥不安、意识紊乱、攻击人畜，最后麻痹而亡。 一、流行狂犬病毒属于弹状病毒科狂犬病毒属，RNA型。病畜及带毒的野生动物是本病的传染病。病毒主要存在于病畜的唾液内，在临床症状出现前10-15天，以及临床症状消失后6-7天，唾液中均含有病毒。主要通过咬伤的伤口发生感染。现 ...

流行性出血热 本病由流行性出血热病毒感染引起的以发热、出血和肾脏损害为主要临床表现的人兽共患性烈性传染病。在野外主要是黑线姬鼠和褐家鼠，对实验动物来讲，主要感染大鼠。受感染的大鼠可向外界排毒，污染环境，从而危及动物饲养管理和动物实验人员的健康。 临床症状：大鼠感染后不表现临床症状，也不发生死亡。但多数动物可发生病毒血症，终生排毒。 病理变化：大鼠无可见的病理改变。人工感染乳小鼠和地鼠，可见广泛性充 ...

1 高效液相色谱仪的系统组成、工作原理 高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相） 内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器 ...

1、毕氏酵母氯化锂转化法 （1）试剂 1M LiCl（用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌；必要时用消毒去离子水稀释） 50% PEG3350（Sigma P3640 用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌，用较紧的盖子的瓶子分装） 2mg/ml salmon sperm DNA / TE（10mM Tris-Cl pH8.0 1.0mM EDTA）-20℃保存 注：醋酸锂对毕氏酵母无效，仅氯化 ...

在甲醇酵母中表达蛋白的步骤比大肠杆菌复杂得多。首先要考虑选用什么载体。一般人们趋向于使用分泌表达载体，以便于蛋白的纯化。但有的蛋白并不适合于分泌表达，如一些胞质蛋白，非糖基化蛋白等。此外分泌表达的蛋白信号肽存在一个效率问题。有的蛋白即使存在信号肽，也不能分泌。并且有的分泌蛋白较易受到蛋白酶的降解。所有这些因素都需综合考虑。 1、酵母菌株的分离纯化 接种GS115于5ml YPD液体培养基，30℃ ...

分子生物学技术的发展为利用生物反应器生产外源蛋白提供了许多方法和手段。到目前为止，已发展出了大肠杆菌、酵母、昆虫、哺乳动物细胞等多种蛋白表达系统，其中酵母表达系统是最近发展起来的新型表达系统。最先使用的是酿酒酵母，1981年Hitzeman等用酿酒酵母成功地表达了人干扰素，但该系统具有一定的局限性，缺乏强有力的启动子，分泌效率差，质粒不稳定等。因此，人们在此基础上又寻找了新的酵母表达系统&mdas ...

基因表达是分子生物学领域的重要内容之一，人们利用基因表达技术制备各种目的基因的重组蛋白质，在分析基因的表达与调控、基因的结构与功能、基因治疗以及生物制药等领域均取得了令人振奋的成果。其中，酵母表达系统拥有转录后加工修饰功能，操作简便，成本低廉，适合于稳定表达有功能的外源蛋白质，而且可大规模发酵，是最理想的重组真核蛋白质生产制备用工具。 1、酵母表达系统的特点 酵母是一种单细胞低等真核生物，培养条 ...

存在的问题 在过去的几十年里，人类对动物细胞的培养技术进行了大量的研究开发，取得了很大进展，但是利用CHO细胞表达外源基因的技术水平尚不能满足生物药品的开发和生产的要求，目前上游工作中主要存在以下问题： ①构建的重组CHO细胞生产效率低，产物浓度亦低； ②某些糖基化表达产物不稳定，不易纯化； ③重组CHO细胞上游构建与下游分离纯化脱节，主要表现在上游构建时着重考虑它的高效表达，而对高教表达的产物 ...

影响外源基因在哺乳动物细胞中表达水平的因素很多，层次也很广泛，涉及复制、转录和转录后、翻译和翻译后等各级水平，其中mRNA的转录是真核基因表达谓节的基本控制点，它的翻译对表达水平也有一定作用。研究表明，所有提高转录水平的策略均与蛋白质编码序列无关，主要是通过载体构建基因转染方法和选择不同标记来调控。而提高翻译水平则主要是通过增强与核糖体结合能力和改造编码基因的结构来实现。 转录水平的调控可以概括为 ...

分子生物学、分子免疫学等学科的发展使基因工程疫苗具有越来越重要的地位。在基因工程疫苗研究的动物细胞表达系统中，最具代表性的就是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary，CHO)。它是用来表达外源蛋白最多也最成功的一类细胞。本文就CHO细胞表达系统在疫苗研制中的应用做一综述。 1、CHO细胞表达体系及其特点 CHO细胞属于成纤维细胞，既可以贴壁生长。也可以悬浮生长。目前常用的 ...

(一) 保留时间变化 1.柱温变化 柱恒温 2.等度与梯度间未能充分平衡 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱 3.缓冲液容量不够 用>25mmol/L的缓冲液 4.柱污染 每天冲洗柱 5.柱内条件变化 稳定进样条件，调节流动相 6.柱快达到寿命 采用保护柱 (二) 保留时间缩短 1.流速增加 检查泵，重新设定流速 2.样品超载 降低样品量 3.键合相流失 流动相pH值保持在3~7.5，检查柱的 ...

1、问：请问有人养过CHO细胞吗？文献报道说用DMEM培养基来养，但我不太清楚具体是高糖还是低糖？ 参考见解：CHO细胞用高糖DMEM养就可以了，比较好养，10%血清，小牛和胎牛都可以，长得比较慢，跟你所用的血清有一定的关系，大概需要两天传一次代。在塑料板上比玻璃板上好养，感觉如果在玻璃板上养而且不包被的话，好像细胞不易伸展开来。 2、问：要转染钾通道pcDNA3.1入细胞，是选cho细胞呢还是 ...

1、CHO细胞 CHO细胞即中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary)，该细胞具有不死性，可以传代百代以上，是目前生物工程上广泛使用的细胞。全世界批准正式应用于人类疾病治疗或疾病预防的基因工程产品约有三十多种，其中只有一种(乙肝疫苗)是由酵母菌生产的，其余所有产品都是由CHO细胞和大肠杆菌生产的，大肠杆菌不能形成有活性的二聚体(如白介素2)，也不具有糖基化的功能(如EPO)， ...

分子生物学、分子免疫学等学科的发展使基因工程疫苗具有越来越重要的地位。在基因工程疫苗研究的动物细胞表达系统中，最具代表性的就是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary，CHO)。它是用来表达外源蛋白最多也最成功的一类细胞。本文就 CHO细胞表达系统在疫苗研制中的应用做一综述。 CHO细胞表达体系及其特点 诞生于70年代末的基因工程药物因其具有其他药物无法比拟的优点，已迅速成 ...

流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍增管或一个固态装置)，光检测器把散射光定量转化成电信号，经数字转换器进行数字化后而成整数，然后进行电子存储，以后数据可以调出显示和进行分析。其优点如下： 1、具有操作简便，只 ...