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Introduction Luciferase can be used as a reporter gene to measure the activity of promoters and/or the transfection efficiency. Aims You will be provided with the HEK293/COS cells that you transfected ...

问：有没有做辣根过氧化物标记的朋友啊，能不能把你们的步骤发给我。本人开始做，发现很多人用的浓度都不一样。 答：1.1 试剂准备 1) 10mg/mL HRP 2) 0.06mol/L NaIO4 3) 0.16mol/L乙二醇 4) 碳酸盐缓冲液(Na2CO3 0.7952g NaHCO3 1.4702g 溶于500mL蒸馏水中，调pH值到9.5) 5) 2.5mg/mL NaBH4 6) 0.0 ...

问：我想知道，用什么方法进行酶标记可以非常有效呐？过碘酸钠标记怎么样？ 答：第一节 间接法测抗体 基本原理 将特异性抗原包被在固相载体上，形成固相抗原，加入待检标本（含相应抗体），其中抗体与固相抗原形成抗原-抗体复合物，再加入酶标记的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体，亦称二抗），与上述抗原-抗体复合物结合。此时加入底物，复合物上的酶则催化底物而显色（反应过程见图1－1）。 试剂与设备 纯化抗原。 ...

当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时，主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合，形成FITC-蛋白质结合物，即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基，一般最多能结合15～20个，一个IgG分子可结合2～8个分子的FITC，其反应式如下 FITC-N=C=S + N-H2-蛋白质 → ...

摘要 分子信标技术是一种基于荧光共振能量转移现象（FRET）和碱基互补配对原则建立起来的一种分析技术。分子信标作为一种荧光标记的分子探针，具有极强的特异性和较高的灵敏度，目前已经成为基础医学和生物学的重要研究工具。本文着重介绍了分子信标的基本原理及其应用，并对其近年来的研究进展做以简单介绍。 1 引言 在基因时代和蛋白质时代，人们迫切需要一种具有高灵敏度和高亲和力的生物分子探针，用以进行定性和定量 ...

1996年Tyagi和Kramer首次建立了分子信标探针，最初目的是能在液相中定量测定靶标的量。分子信标技术以其操作简单、灵敏度高、特异性强、可对核酸进行实时定量测定、甚至可以用于活体分析等特点不仅在生物学研究中有着广泛的应用，而且在疾病基因检测与诊断等生物医学基础和临床研究中也将充当重要的角色。近来，人们通过改变经典分子信标的结构，设计出许多新型的分子信标，如用ssDNA链做环、用RNA-DNA ...

Tyagi和Krammer于1996年设计了一种可以特异性识别核酸序列的新型荧光探针这种荧光探针通过与核酸靶分子进行杂交后发生构象的变化而发出荧光他们将其命名为分子信标(Molecular Beacon)。 分子信标具有背景信号低灵敏度高、特异识别性强、操作简单，不必与未反应的探针分离即可实时检测，可用于活体分析等优点。在生物化学分析，生物医学研究和临床诊断中有着广泛的应用价值。 分子信标的结构 ...

探针标记方法有： 1、DNA的缺口平移法。缺口平移是一种快速、简便、成本相对较低以及生产高比活性均一标记DNA的方法。该技术可以制备序列特异的探针。当使用重组质粒探针时，虽然任何形式的双链DNA都可以进行缺口平移标记。但通常使用限制性核酸内切酶将插入片段进行酶切和凝胶电泳纯化后再进行缺口平移标记。此外，用这种探针进行杂交可产生较低的背景信号。 2、DNA的随机引物法。这种方法是使用寡核苷酸引物和大 ...

PC12传代的消化 丁香园wangpengljr的问题： 我最近养PC12细胞做分化方面的研究，但是遇到的难题是PC12细胞本身的贴壁能力就差（养PC12细胞最好是用Gibco的马血清，Hyclone的不贴壁！），最开始没有用胰酶处理，直接吹打下细胞发现成团现象，用0.02％EDTA的PBS吹打似乎不易成团，但是慢慢地细胞贴壁能力下降了，我用poly－Lys包被都不行。我之所以不用胰酶是因为怕胰酶 ...

丁香园ivy_mayan的问题： 在做PC12的H2O2损伤模型时，由于细胞经过H2O2的冲击，大多活性不好了，所以贴壁性变差，结果在测MTT时由于要去掉上清液，细胞会被一同吸走，这样所测吸光值就不准了，请问大家，怎么可以使PC12贴壁更牢（即使经过损伤冲击）？ 丁香园george的观点： 1.细胞培养板的选择：一定要用进口的培养板，国产的大多贴不好。 2.尽量使细胞处于良好的状态，包括培养液要新 ...

丁香园Ginkgokeer的问题： 未分化的PC12在什么情况下会使它产生分化，从而成为分化的PC12？？是不是NGF有这样的作用？除此以外呢？ 丁香园sudajyou的观点： pc12 在未分化时贴壁生长，但最好用5%HS 5%FBS/DMEM培养液，据说PC12在完全没有HS的培养液中贴壁不好。我用的是CORNING的培养皿，PC12贴壁很好。 丁香园忘记宝儿兔兔的问题： 关于pc12细胞即鼠 ...

丁香园Ginkgokeer的问题： PC12细胞是什么细胞？或者说它的形态是什么样的？来源呢？ 丁香园wack_lry的回答： 来自大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系，它与神经细胞在发生学上均来源于神经脊；在结构、功能上与神经元有很多相似之处，与神经元比较又相对容易培养，故普遍将PC12细胞用作研究神经的细胞模型。 丁香园balabom的问题： 才从别人那里拿来已传代的pc12养，感觉长得很快，两天就要 ...

丁香园myl0605的观点： 前几天为自己养的PC12是未分化还是分化型困扰查了一些资料现发上来希望能给有同样问题的战友有一点帮助! 培养条件:ＰＣ12细胞培养于铺有鼠尾胶原的玻璃培养瓶中置于ＣＯ2培养箱(37℃95%空气5%ＣＯ2)培养基选用ＤＭＥＭ(ｐＨ7.4高糖)加入10%灭活小牛血清及5%灭活马血清。 分化前:ＰＣ12细胞在培养基中多呈圆形直径15～20μｍ也有椭圆或多角形的扁平的细 ...

问：刚做克隆，遇见测序过程中 有3'端测序，5'端测序，到底是怎么回事？为什么有两个测序结果？我应该按那一个来看测序正确还是不正确？ 答：测序都是从5'端进行的，正向和反向测序是指对DNA的两条互补链分别测序，通常两个方向测序结果经校读后完全一致才能认为得到可靠结果。一点测序经验： 1、测序选择引物很重要，一般的克隆载体现在都有通用引物，如T7SP6M13-47 RVM ....但选择哪个引物测序 ...

Q:my group is involved in a national project to develop a genomic platform for cancer research. while Nimblegen has developed target enrichment chip for the Genome Sequencer 20 nothing similar has bee ...

Q:We recently completed a ChIP-seq run on the ABI SOLiD. We received the following data back for one of our samples. These data were from a quarter (1/4) of a slide. ------------------61993194 total b ...

Q:I've been getting mixed messages about the accuracy of the reads coming off the SOLiD platform. A 454 representative swore blind to me last week that only 25% of SOLiD reads are error-free (!) but t ...

Sequences for Solexa Library Preparations: Genomic DNA oligonucleotide sequences Adapters 1 5' P-GATCGGAAGAGCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG 5' ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT PCR Primers 1 5' AATGATACGGCG ...

Here I present a brief overview of Solexa's sequencing-by-synthesis chemistry. The sample prep methods used differ slightly from that used in ABI's SOLiD system but the basic goals are the same: gener ...

The following derives largely from an email I sent to some "fellow travelers" before I heard of this web site. Consider 3 SOLiD runs we did all genomic DNA (fragment 35mers single flowcell ...