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探针标记方法有： 1、DNA的缺口平移法。缺口平移是一种快速、简便、成本相对较低以及生产高比活性均一标记DNA的方法。该技术可以制备序列特异的探针。当使用重组质粒探针时，虽然任何形式的双链DNA都可以进行缺口平移标记。但通常使用限制性核酸内切酶将插入片段进行酶切和凝胶电泳纯化后再进行缺口平移标记。此外，用这种探针进行杂交可产生较低的背景信号。 2、DNA的随机引物法。这种方法是使用寡核苷酸引物和大 ...

PC12传代的消化 丁香园wangpengljr的问题： 我最近养PC12细胞做分化方面的研究，但是遇到的难题是PC12细胞本身的贴壁能力就差（养PC12细胞最好是用Gibco的马血清，Hyclone的不贴壁！），最开始没有用胰酶处理，直接吹打下细胞发现成团现象，用0.02％EDTA的PBS吹打似乎不易成团，但是慢慢地细胞贴壁能力下降了，我用poly－Lys包被都不行。我之所以不用胰酶是因为怕胰酶 ...

丁香园ivy_mayan的问题： 在做PC12的H2O2损伤模型时，由于细胞经过H2O2的冲击，大多活性不好了，所以贴壁性变差，结果在测MTT时由于要去掉上清液，细胞会被一同吸走，这样所测吸光值就不准了，请问大家，怎么可以使PC12贴壁更牢（即使经过损伤冲击）？ 丁香园george的观点： 1.细胞培养板的选择：一定要用进口的培养板，国产的大多贴不好。 2.尽量使细胞处于良好的状态，包括培养液要新 ...

丁香园Ginkgokeer的问题： 未分化的PC12在什么情况下会使它产生分化，从而成为分化的PC12？？是不是NGF有这样的作用？除此以外呢？ 丁香园sudajyou的观点： pc12 在未分化时贴壁生长，但最好用5%HS 5%FBS/DMEM培养液，据说PC12在完全没有HS的培养液中贴壁不好。我用的是CORNING的培养皿，PC12贴壁很好。 丁香园忘记宝儿兔兔的问题： 关于pc12细胞即鼠 ...

丁香园Ginkgokeer的问题： PC12细胞是什么细胞？或者说它的形态是什么样的？来源呢？ 丁香园wack_lry的回答： 来自大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系，它与神经细胞在发生学上均来源于神经脊；在结构、功能上与神经元有很多相似之处，与神经元比较又相对容易培养，故普遍将PC12细胞用作研究神经的细胞模型。 丁香园balabom的问题： 才从别人那里拿来已传代的pc12养，感觉长得很快，两天就要 ...

丁香园myl0605的观点： 前几天为自己养的PC12是未分化还是分化型困扰查了一些资料现发上来希望能给有同样问题的战友有一点帮助! 培养条件:ＰＣ12细胞培养于铺有鼠尾胶原的玻璃培养瓶中置于ＣＯ2培养箱(37℃95%空气5%ＣＯ2)培养基选用ＤＭＥＭ(ｐＨ7.4高糖)加入10%灭活小牛血清及5%灭活马血清。 分化前:ＰＣ12细胞在培养基中多呈圆形直径15～20μｍ也有椭圆或多角形的扁平的细 ...

问：刚做克隆，遇见测序过程中 有3'端测序，5'端测序，到底是怎么回事？为什么有两个测序结果？我应该按那一个来看测序正确还是不正确？ 答：测序都是从5'端进行的，正向和反向测序是指对DNA的两条互补链分别测序，通常两个方向测序结果经校读后完全一致才能认为得到可靠结果。一点测序经验： 1、测序选择引物很重要，一般的克隆载体现在都有通用引物，如T7SP6M13-47 RVM ....但选择哪个引物测序 ...

Q:my group is involved in a national project to develop a genomic platform for cancer research. while Nimblegen has developed target enrichment chip for the Genome Sequencer 20 nothing similar has bee ...

Q:We recently completed a ChIP-seq run on the ABI SOLiD. We received the following data back for one of our samples. These data were from a quarter (1/4) of a slide. ------------------61993194 total b ...

Q:I've been getting mixed messages about the accuracy of the reads coming off the SOLiD platform. A 454 representative swore blind to me last week that only 25% of SOLiD reads are error-free (!) but t ...

Sequences for Solexa Library Preparations: Genomic DNA oligonucleotide sequences Adapters 1 5' P-GATCGGAAGAGCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG 5' ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT PCR Primers 1 5' AATGATACGGCG ...

Here I present a brief overview of Solexa's sequencing-by-synthesis chemistry. The sample prep methods used differ slightly from that used in ABI's SOLiD system but the basic goals are the same: gener ...

The following derives largely from an email I sent to some "fellow travelers" before I heard of this web site. Consider 3 SOLiD runs we did all genomic DNA (fragment 35mers single flowcell ...

Applied Biosystems has just launched their instrument which supports their version of high-throughput sequencing chemistry termed “SOLiD™” (little “i” please). Acquired f ...

The Solexa sequencing platform comprises all hardware software procedures and kitted reagents for DNA sequencing at the whole genome or repetitive regional scale. a) Preparation of full diversity libr ...

DNA测序原理和方法 DNA序列测定分手工测序和自动测序，手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪，其中310型是临床检测实验室中使用最多的一种型号。本实验介绍的是ABI PRISM 310型DNA测序仪的测序原理和操作规 ...

在分子生物学研究中，DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger等（1977）发明的双脱氧链末端终止法和Maxam和 Gilbert（1977）发明的化学降解法。这二种方法在原理上差异很大，但都是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，产生A，T，C，G四组不同长度的一系列核苷酸，然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测，从 ...

Introduction For over 25 years Applied Biosystems has been a pioneer in the field of genetic analysis by offering systems to address the expansion of genetic analysis applications and the evolving ne ...

ABI SOLiD sequencing is a form of DNA sequencing. DNA sequencing encompasses biochemical methods for determining the order of the nucleotide bases adenine guanine cytosine 5-methyl cytosine and thymin ...

ABI SOLiD sequencing is a form of DNA sequencing. DNA sequencing encompasses biochemical methods for determining the order of the nucleotide bases adenine guanine cytosine 5-methyl cytosine and thymin ...