ABGENT：western-blotting
互联网
2428
1. 溶液准备：
转印缓冲液：0.025M Tris base ， 0.192 M甘氨酸 ， 30%甲醇
10×TBST：250mM Tris-HCl （ pH 8.0 ） ， 1.25M NaCl ， 0.5%Tween20
封闭液：1×TBST ， 3%脱脂奶粉
洗涤液：1×TBST
2. 实验程序：
A. 膜的准备：
将PVDF膜切成条浸在甲醇中，室温条件下在摇床上摇1min，去除甲醇后加入1×TBST备用。
B. 膜转印：
1. 细胞或组织裂解液进行SDS-PAGE电泳
2. 用夹心法电转至PVDF膜
3. 海绵和滤纸浸泡在转印缓冲液预湿润
4. 在半干转印系统中10v转印2h，封闭液室温封闭1h或者4℃过夜。
C. 抗体检测：
1. 将一抗溶解于3ml封闭液中，终浓度为4μg/ml，4℃孵育过夜。
2. 用洗涤液洗涤3次，每次5min。
3. 用封闭液来稀释二抗（HRP标记的抗兔或抗鼠），室温下培育1h。
4. 用洗涤液洗涤3次，每次5min。
5. 用化学发光底物检测。
