先用细胞裂解液对已制备好的组织匀浆充分裂解,然后用蛋白酶去除其中的蛋白,再用氯仿一次抽提(无需用酚抽提)、预备液沉淀、RNase去除RNA、乙醇再沉淀即可得到完整DNA。该方法适用于从人或动物的各种组织、血液、培养细胞、G+/G-细菌中快速抽提基因组DNA。
组织细胞固定在免疫荧光中的作用探讨
免疫组化技术常见问题及其解答集锦
兔胶体金检测技术IGSS法
彩色免疫金银法(colouredIGSS简称CIGSS)是在IGSS基础上发展起来的一种新方法。其基本原理与彩色显影相似。
1、切片固定后用毛细滴管吸取经适当稀释的免疫血清滴加在其上,置于染色盒中保持一定的湿度,37℃作用30min。然后用0.01mol/l pH7.2PBS洗两次,10min,用吸水吸去或吹干余留的液体。 2、再滴加间接荧光抗体(如兔抗人 -球蛋白荧光抗体等),同上步骤,染色30min,37℃,缓冲盐水洗两次10min,搅拌,缓冲甘油封固,镜检。 对照染色:①抗体对照:用正常兔血清或人血清代替免疫血清 ...
直接免疫荧光法测抗原
免疫组化Elivison二步法
SP(streptavidin-perosidase)法,即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法。
4%多聚甲醛常规灌注固定,取材并置20%蔗糖溶液(4℃)中过夜
欧美国家相继开展了免疫组化质量控制工作,建立了一套比较完善的质量控制方法和程序。
目前,免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂,其中以甲醛类和戊二醛最为常用。在此,简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂,以供读者选用。
利用荧光染料检测支原体污染。这种染料会结合到DNA的A-T富集区,因为支原体DNA中A-T含量高,所以可将其染色而被检测到。
1.实验进行前,无菌室及无菌操作台(laminar flow)以紫外灯照射30-60分鐘灭菌,以70%ethanol擦拭无菌操作抬面,并开啟无菌操作台风扇运转10分鐘后,才开始实验操作。 2.每次操作只处理一株细胞株,且即使培养基相同亦不共用培养基,以避免失误混淆或细胞间污染。 3.无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置,其他实验用品用完即应移出, ...
SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳
聚酮的生物合成基本原理
详细的有关禽流感病毒实验室分离及各项实验方案,包括标本的采集与处理、病毒分离、病毒鉴定三大部分。
动物细胞培养开始于本世纪初1962年,其规模开始扩大,发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法。
该protocol应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中脂联素水平。通过显色反应,用酶标仪测定吸光度,计算样品浓度。
Bartel Lab Whitehead Institute的Allison C. Mallory总结的拟南芥、烟草总RNA提取方法简洁明了

