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筛选解离速率优化的scFv：选择3~5轮后，随机挑取克隆加入96孔微量滴定板中 并诱导表达可溶性scFv.然后，在包被有相关抗原的96孔微量滴定板中，用ELISA分析含有可溶性scFv的细菌上清。

原位免疫PCR的IHC增敏方法：Sano等（1992）率先利用基因工程的方法表达了A蛋白与链霉亲和素的嵌合体分子获得成功，建立了免疫PCR技术。这是一种新的抗原检测系统，利用细胞工程和基因工程技术，巧妙地将抗原抗体反应的特异性同PCR的敏感性相结合，通过构建单克隆抗体与重组核酸的嵌合体分子，使得利用PCR技术检测蛋白成为可能。

滚动式循环放大法IHC增敏方法：滚动式循环放大（RCA）法是一种能够在恒温条件下，使标记有寡核苷酸探针（与组织细胞内的核苷酸无相关性）的抗体（特异性一抗或第二抗）与组织细胞内的抗原结合后，在DNA聚合酶的作用下，加入的寡核苷酸进行循环扩增，产生一条扩增的DNA序列拷贝产物。

白磷还原法制备胶体金分散颗粒：胶体金可用多种方法制备，其中应用较为广泛的是化学还原法。这一方法的基本原理是在氯化金水溶液中加入一定量的还原剂，使金离子还原为金原子，可用于制备胶体金的还原剂有50余种，但在生物医学领域内最为常用的还原剂是白磷、柠檬酸三钠以及鞣酸等。

制备胶体金分散颗粒的其他方法：乙醇-超声波还原法（Baigent和Muller,1980），硼氢化钠还原法（Tschopp等，1982），放射性胶体金制备法（Kent等，1981）

当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后，便可进行标记。具体步骤如下：（1）根据标记所用胶体金的总量计算出所需要待标记蛋白质的总量。

胶体金标记蛋白质的纯化:标记好的免疫金探针必须经过纯化处理才能用于IHC染色，尤其是免疫电镜的染色。纯化的目的就是除去其中未标记的蛋白质，未充分标记的胶体金及在标记过程可能形成的各种聚合物。其纯化方法有超速离心法、色谱柱法以及以上二者相结合应用。

本法是由Geoghegan等（1978）首次应用金标探针检测B淋巴细胞表面抗原，将胶体金颗粒（大于20nm）标记在第二抗体或SPA分子上，制备成金标二抗。

免疫金银染色（IGSS）操作流程：做冰冻切片的组织可先经过固定再作切片，也可先制作冰冻切片，然后再固定。这要根据保存抗原的需要而定，固定过的组织可用含20%蔗糖的PBS（0.1mol/L,pH7.4）浸泡过夜，使切片减少冰结晶，保持组织细胞良好的形态结构。

免疫金银染色方法敏感、简便、省时、安全可靠，葡萄球菌A蛋白（SPA）金标记四步法是在此基础上发展起来的更为敏感的一种新方法。SPA和许多哺乳类动物IgG具有亲和性，且它们之间的连接不会干扰抗原-抗体的结合。

彩色免疫金银染色方法的基本原理是在IGSS法的基础上，根据洗彩色照片的显影原理而发展起来的，即IGSS后，在抗原位点处生成的银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的氧化反应，将银颗粒氧化成溴化银，后者与彩色显影剂起还原反应，生成金属银，而彩色显影剂本身则被氧化，其氧化产物使彩色成色剂由五色变成有色的染料，并沉积在银颗粒的部位，金属银变成了银离子。由于染料只能通过彩色显影剂沉积在有银的部位，不会发生非特异性背景染色。

物理显影液的配制：硝酸银显影液、乳酸银显影液、醋酸银显影液、彩色显影剂的配制、漂白液的配制、定影液的配制、缓冲液。

微量移液器之拆解与组装方法步骤：微量移液器 （micropipet） 是进行生化实验或分子生物学实验的必备工具，然而使用方法的正确与否，以及微量移液器的准确性，都直接影响了实验结果的正确性。

微量移液器基本使用方法：选择适当的Pipetman:不同型号的微量移液器，各有其吸取体积范围，请依取用溶液体积取用适当的微量移液器。

微量移液器的使用与准确度检测：将适当微量移液器之体积调整圈调至总体积处，以干净的微量移液器头吸取管中的溶液，并检查……

检测微量移液器的准确度：天平上预先放置秤药纸或秤药盘并归零……由结果判断你的微量移液器是否该校正维修了？

蛋白质纯化实验中，将会测定 b-glucuronidase （GUS） 的活性，是利用 p-nitrophenyl b-D-glucuronide 为基质，加入酵素反应后所释出之 p-nitrophenol 在碱性下呈现黄色，可测定 415 nm 之吸光度，利用 Beers Law 即可计算求得反应物之生成量。

仪器用具： 酒精灯 接种环 药品试剂： E. coli 菌株 （JM109） LB 培养液： 1% （w/v） Bacto tryptone 0.5% Bacto yeast extract 1% NaCl以5 N NaOH 调至pH 7.0 后，以湿热法灭菌。 LB agar plates: LB 培养液中添加1.5% （w/v） Bacto agar. 方法步骤： 1） 每组应有一支15 mL ...

DEAE membrane吸附法分离与纯化DNA片段利用离子交换的原理，在低盐情况下使DNA 吸附在带正电荷的滤膜上，再利用含有高浓度盐类的缓冲液将DNA 自膜上溶离下来。

Silica gel吸附法分离与纯化DNA片段：经BamHI 及HindIII 作用的pBlueGus 及pQE31,置于65℃水浴10 min，移至冰浴降温后，以含EtBr 的1.0% agarose gel 进行电泳 （两种样品各用六个wells,每个well 注入30 μL 样品）。