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PriCells：原代微血管内皮细胞（Primary Microvascular Endothelial Cells）的体外分离培养

PriCells: 原代血管内皮细胞、Angiogenesis、VEGF血管内皮细胞是位于循环血液与血管壁内皮下组织之间的单层细胞。血管内皮细胞在血栓与止血、血管新生、辐射损伤、炎症及免疫反应等一系列重要的病理生理过程起着重要的作用。脐静脉内皮细胞培养和鉴定方法：采用胰蛋白酶行脐静脉两次酶灌注消化法获取内皮细胞。分别在倒置相差显微镜、透射电镜下观察，SP免疫组化法行Ⅷ因子抗原鉴定。观察血管内皮 ...

PriCells: 肾血管支的分离和血管平滑肌细胞培养Isolation of renal vascular trees and culture of the vascular smooth muscle cell1. Male Wistar rats of about 250 g body wt were anesthetized with ether and were decapi ...

PriCells: 动脉平滑肌细胞 (Arterial smooth muscle cells)平滑肌分类尽管体内各器官所含平滑肌在功能特性上判别很大，但一般可分为两大类：一类称为多单位平滑肌，其中所含各平滑肌细胞在活动时各自独立，类似骨骼肌细胞，如竖毛肌、虹膜肌、瞬膜肌（猫）、以及大血管平滑肌等，它们各细胞的活动受外来神经支配或受扩散到各细胞的激素的影响；另一类称为单位平滑肌，类似心肌组织，其 ...

特异性抗体免疫磁珠分选、分离、纯化原代细胞用包被特异性抗体或抗IgG抗体的免疫磁珠分选、分离、纯化原代细胞的方法。可以在几分钟内从复杂的原代细胞混合物中分离出很高纯度的目的原代细胞。用包被特异性抗体或抗IgG抗体可以分离出非常纯的原代细胞群体，而且有极好的回收率和存活率。依据细胞频率和标记表达水平的不同，原代细胞的纯度可达95%-99.9%。

PriCells: 小鼠单个核细胞分离去除脾脏细胞悬液中的红细胞脾脏细胞悬液在进行淋巴细胞计数之前最好先去除红细胞（RBC）。胸腺和淋巴结细胞悬液则不必去除红细胞。脾脏细胞的亚群分离也需先去除红细胞。

小鼠单个核细胞的分离基本方案：从脾脏、胸腺和淋巴结制备细胞悬液

原代细胞复苏的基本操作方法

PriCells: 磁珠法分离小鼠T细胞和B细胞基本方案用AUTOMACS系统进行总T细胞、CD4+细胞或CD8+T细胞的自动分离实验材料1、小鼠2、HBSS洗涤缓冲液3、MACS缓冲液4、磁珠5、RPMI-10完全培养基6、AUTOMACS系统和分选柱7、30μm尼龙网或40μm预分离滤膜实验方法1、用5只小鼠的淋巴结或2只小鼠的脾脏制备单细胞悬液并去除红细胞。2、细胞在10mlHBSS ...

小鼠单个核细胞分离一步梯度法去除死细胞基本原理活细胞（密度较小）和死细胞（密度较大）密度不同，从而有助于将活的淋巴细胞和红细胞分离。附加材料高密度溶液：Ficoll-Paque（Ficoll和泛影酸钠；Pharmacia LKB）或Lympholyte-M（Cedarlane）12ml或50ml聚丙烯离心管（比聚苯乙烯离心管好）注：Ficoll-Paque和Lympholy ...

PriCells: 磁珠分选柱手工操作分离小鼠CD4+ CD25+抑制性细胞实验材料：1. 小鼠2. HBSS洗涤缓冲液3. MACS缓冲液4. CD8a（Ly-2）磁珠5. 结合缓冲液6. biotin-抗CD25（7D4）7. Streptavidin-PE8. 抗PE磁珠9. 完全RPMI培养基10. 小鼠CD3+T细胞富集柱和1 ...

PriCells: AUTOMACS系统自动分选体系分选小鼠CD4+ CD25+抑制性细胞由此方法得到的阴性细胞（CD4+ CD25-）可用作反应细胞或对照细胞实验材料：1. 小鼠2. HBSS洗涤缓冲液3. MACS缓冲液4. CD8a（Ly-2）磁珠5. 结合缓冲液6. biotin-抗CD25（7D4）7. Streptavidin-PE8. ...

从小鼠脾脏分离小鼠天然杀伤细胞基本方案：由于所用Mab只能检测C57BL背景小鼠体内的NK1.1CD3-NK细胞，故本方案适用于C57BL/6或者C57BL/10（以及H2b、d、q同系小鼠）小鼠脾脏细胞。清楚杂细胞所用的单克隆抗体的活性对本方案至关重要。单克隆抗体可以买到，并且其杂交瘤可以从ATCC得到，因此建议检测单克隆抗体的活性以保证实验成功。最佳补体和细胞浓度也需要通过 ...

辅助方案：胶原酶消化制备脾脏细胞悬液实验材料：1. 4000U/ml胶原酶D，融化后置于冰上2. HBSS，已灭菌，含Ca+、Mg2+（购置于Life Technologies）3. 小鼠脾脏4. 皮下注射针，22G×11/2in内径（Becton Dickinson）5. 10ml、5ml一次性注射器（如Becton Dickinson）6. 100mm直径 ...

实验材料：1. 胶原酶消化的脾脏细胞悬液2. 高密度牛血清白蛋白（BSA）溶液3. RPMI 1640培养基（如Life Technologies），4℃和37℃4. RPMI-5完全培养基，4℃和37℃5. 抗体偶联的绵羊红细胞（EA）6. 用于流式细胞分析的一抗7. 用于流式细胞分析的二抗（荧光结合的小鼠抗大鼠IgG和IgM；如Boehringer M ...

牛或猪大血管原代内皮细胞的分离-灌注酶消化法实验材料：1. 牛或猪2. PBS，含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml3. 0.1%Ⅰ型胶原酶4. 眼科剪，眼科镊5. 慕丝线6. 离心管（15ml、50ml）实验方法：1. 分离牛或猪的主动脉等大血管，长15-20cm，用丝线结扎血管各分支后，取出主动脉。放入含青霉素100U/ ...

PriCells: 树突细胞的分离-用小鼠骨髓前体细胞培养树突细胞实验材料：1. 6-7周龄小鼠（最好为雄性鼠，因为它们的骨头比较粗大；运输后需要休息至少5天；不要使用应激或脱水的老鼠）2. 70%乙醇3. 冰冷的以及室温的RPMI-1640培养基（如Life Technologies）4. 氯化铵溶液0.02mol/L Tris·Cl，pH7.2 /0.14mol/L N ...

PriCells: 人或动物肺毛细血管原代内皮细胞的分离实验材料：1. 人或动物的肺部毛细血管2. PBS，含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml3. 3mg/ml中性蛋白酶、0.25%胰蛋白酶4. 眼科剪，眼科镊5. 20μm尼龙筛、100μm尼龙筛6. 离心管（15ml、50ml）实验方法：1. 将动物麻醉后开胸取肺组织，将肺 ...

PriCells: 牛或猪大血管原代内皮细胞的分离-消化刮脱法实验材料：1. 牛或猪2. PBS，含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml3. 0.1%Ⅰ型胶原酶4. 眼科剪，眼科镊5. 慕丝线6. 离心管（15ml、50ml）实验方法：1. 分离牛或猪的主动脉等大血管，长15-20cm，用丝线结扎血管各分支后，取出主动脉。放入盛有含青霉素100U/ ...

人或动物脑毛细血管原代内皮细胞的分离实验材料：1. 人或动物的脑部毛细血管2. PBS，含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml3. 10μg/ml DNaseⅠ和1mg/ml胶原酶4. 250g/L BSA5. 眼科剪，眼科镊6. 60μm尼龙筛、150μm尼龙筛和230μm尼龙筛7. 离心管（15ml、50ml ...