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小弟是新手，刚开始做实验，向诸位请教一个问题。我要做一个蛋白的 IP,520个AA，58/55kDa，查文献都是用标签FLAG的抗体做的，但现在没有这个标签的真核表达载体，想直接转染后用目的蛋白的抗体做，不知 道可不可以？还有就是，什么时候用标签，什么时候可以不用？标签的选择有没有要求？请大家不吝指教，*！ps：小弟新虫，金币不多，大家见谅啊！问题：看的文献上都是用含标签的目的蛋白基因的载体转染细胞，然后做IP，我想，是不是目的 ...

1. The preparation of native chromatin from cultured human cells1.1.Cultured cells (e.g. HL-60 or lymphoblastoids) are grown to a density of approximately 1 x 106 cells/ml until they are inlog phase.1.2.Harvest cells: centrifuge samples (7,000 g, 10 min, 4°C) and wash the cell pellet 3 x ice cold PBS (Pho ...

ChIP是一种强大的确定蛋白或者组蛋白修饰在基因组上定位的实验方法。染色质被分离出来后采用抗体与抗原的结合来判定目的蛋白是否结合在特定的DNA序列上或者判定目的蛋白结合位点在全基因组范围的分布（微阵列或DNA序列）。这种方法具有空间性与时效性。该实验设计为如何在细胞中进行ChIP实验提供了详细的步骤。1. 交联和细胞收获甲醛可以将蛋白质交联到DNA上。交联结果的好坏决定于交联时间的把握。我们建议样品交联的时间 ...

染色质由真核基因组包装而成，它参与了转录、复制、重组、修复等许多以DNA一蛋白质相互作用为基础的生化过程。研究者感兴趣的是这些过程涉及到哪些特异的基因或DNA序列,有哪些蛋白质参与。尽管有许多人对染色质进行分类,就像Holde将其分为转录活性或非活性位点,但染色质构本身是动态的,并且DNA与非组蛋白相互作用常是瞬时的。因此极有必要发展一种方法,能够研究生理状态下DNA与蛋白质的结合,避免DNA结合蛋白在染色质 ...

来源：王云峰 Emory University, GradyMemorial Hospital 翻译：王 启 北京大学人民医院 计数每月接收的独立血培养套数（1个静脉穿刺点取的血培养计算为1套），1个患者可以有1套或多套血培养。计数血培养生长痤疮丙酸杆菌、芽孢杆菌、微球菌或凝固酶阴性的葡萄球菌的套数。这些细菌都可能是“污染菌”。芽孢杆菌和微球菌“一直”都属“污染菌”，痤疮丙酸杆菌“通常”都是“污染菌”，而凝固酶阴性葡萄球菌则可能为“污染菌”或导管相关性 ...

ELISA即酶联吸附试验，是一种常用的固相酶免疫测定方法。Engvall 和Perlmann于1971年最先应用该法进行了IgG定量测定，并命名为"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。 ELISA的基本原理是：①使抗原（或抗体）结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；②使抗原（或抗体）与某种酶联结成酶标 抗原（或抗体），而且此酶标抗原（或抗体）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；③测定时将受检标本（ ...

凝血酶原时间(PT)活分部分凝血活酶时间(APTT)纤维蛋白原(FIB)及凝血酶时间(TT)测定常用血栓与止血筛实，在临床上常用于病人手术前准备，抗凝剂用量的观察，出血性的疾病或血栓性疾病的初步诊断和疗效评估，是判断机体出血和凝血系统病理变化，手术前筛查凝血系临床药物冶疗和重要指标，但影响实结果的因素较多。因此，实的标准化是测结果的保证，因各实室或同一实不同方法测定都存在着差异。为了得到准确和可靠的实数据。测过程中 ...

在大鼠腹部正中行纵行切口，2－3cm即可。胰腺是散在的，不是一个完整的器官。在胃，肝脏，小肠之间，如下图所示的淡黄色偏白的组织，你只能一点一点把 它取下来，注意和脂肪细胞区别，脂肪细胞和它很像，但是仔细看，胰腺每个小团块都有分叶，就是和胰腺病理一样的花纹，但是，脂肪细胞就没有，而是一团淡白色的组织。进针的地方就是这张图我用箭头指向的那个点。有个找位置的窍门，轻轻捏起十二指肠，展开胰腺，对着灯光，隐约可以看到有一条细细的透明 ...

接上一期《共聚交显微镜相关程序安装及操作（一）》，本期继续讨论《共聚交显微镜相关程序安装及操作》，主要内容涉及背景校正，对比度和强度的调整，添加标尺和其他标记等。背景校正olympus FV1000提供了三种背景校正方式：第一种：是选定一个ROI（region of interest）以后，以ROI的荧光平均值作为背景，然后软件会自动减去背景。第二种：是选择一张没有阳性表达的部位作为背景图片，然后进行扣除，第三种：是--我也忘记了。 ...

起草小组：于学忠，郭树彬，杜铁宽，白连军，王仲，张茂通讯作者：郭树彬(北京协和医院急诊科)（中国急救医学　2013, 33(6)）为挽救生命、积极救治患者，在受到客观条件限制常规抢救治疗措施无法实施，法律尚无明确规定的特殊情况下，允许医生为挽救患者生命按照下列步骤采取紧急输血措施。1 血型不明时紧急输注O型红细胞处理流程1．1适用情况患者必须同时满足以下所有条件方可启动此流程：1．1．1 ABO血型难以确定(如：ABO血型系统的亚型表型， ...

2014 年 11月，Lancet Infect Dis上发表了“新出现的呼吸道感染”系列文章，共5 篇，其中第4篇主要描述了现有的呼吸道感染病毒和细菌病原体的诊断试验，以及有望提高床旁快速诊断质量、速度和可操作性的技术发展。现将主要内容编译归纳如下。呼吸道感染由多种病毒和细菌病原体引起，是全球发病和死亡的第二大常见病因。在全球疾病负担的排名中，下呼吸道感染仅次于缺血性心脏病位居第二。欧洲的监测报告显示，由耐药细菌所致的感染数量显 ...

Clontech是cDNA合成技术的引领者，近年来SMART(Switching Mechanism at 5’ End of RNA Template)技术被公认为是微量RNA和单细胞RNA-seq的行业金标准。现在创新的DNA SMART技术将模板转换机制的优势拓展到了DNA分析，利用DNA SMART ChIP-Seq Kit无需接头连接即可构建ChIP测序文库，极大地缩短了实验进程。科学技术的发展有时需要突破实验技术的挑战，如何从染色质免疫共 ...

接上一期 SDS-PAGE失败实例及分析 之 条带过浅，本期就来讲讲由于前端指示剂缺失，而在产生的问题部分前端指示剂——例1为了装置凝胶花了不少功夫，如果停止电泳太晚就太可惜了。因为如果部分前端的指示剂已经跑出凝胶的话就不能确定各个条带相对应的迁移率了。这块胶有一个内部的刻度——也就是跑胶时带上了分子量标准（Marker）。由于条带较平直，任意条带都可以作为参考来确定跑胶的迁移率。前端指示剂缺失——例2这块胶跑胶时间过长以至 ...

资料占有数和资料利用率成反比，是我们大多数人的一个坏习惯（包括偶自己）。近期论坛不少帖子都对实验室里的所用水感到困惑。我自己最大的一个体会是层析试验中缓冲液的配制，所用的水对离子交换层析和疏水层析的效果有所影响。为此， 特地摘抄一段大家都知道（但未仔细学习）的内容，以共同来温习实验室用水的相关常识。问题：实验室中常见规格的水及使用注意点?1、自来水（Tap water）Tap water is usually of uncontrolled q ...

1．溶液I—溶菌液：溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求 ...

lipo2000是各大实验室，科学院，技术实验室最常用的转染试剂，小小的试剂，价格不菲，经常听到客户说严格按照说明书来操作，还会出现这样或者那样的问题。客户经常抱怨东西贵，还做不出好效果。1. Lipo2000的保存：4℃保存和运输2. Lipo2000的活性：由于Lipo2000是生物蛋白，在4℃保存和运输，所以就算是同一个批号的Lipo2000，只有在刚出厂分装时活性才是相同的。经过供应商的保存、运输（运输的温度控制各不 ...

接上一期：一、症状——条纹拖尾条纹拖尾——例1这块胶就非常难看了。原因在于分离胶倒完之后没有用水或者异丙醇压胶，导致分离叫上缘非常粗燥，就像你看到的一样。当样品堆积在凹凸不平的分界线时，位于凹陷部位的蛋白由于不能适当的浓缩就析出来了。然后再跑胶过程中逐渐溶解造成了条纹拖尾症状。二、症状——条带过浅条带过浅——例1这个问题可能是由于加样孔成形不佳和/或凝胶加样不认真所致。背景较深而且不均一说明蛋白可能存在于电泳缓冲液中 ...

一，尿微量白蛋白肌酐比值（ACR）临床参考范围ACR：男参考区间：0-25女参考区间:0-30二，尿微量白蛋白肌酐比值（ACR）在临床的应用：尿微量白蛋白(MA)是诊断糖尿病早期肾功能损伤的重要参考指标。糖尿病肾病早期尿常规查尿蛋白常为阴性，因此，糖尿病患者必需定期进行尿微量白蛋白测。此外，尿MA是诊断慢性肾脏病的重要指标，而且是心血管疾病发生，肾脏病预后及死亡的独立预测因子。美国肾脏病预后及生存质量（K／DOQI）指南 ...

BNP-B型脑钠肽，主要来源于心室。它的含量与心室的压力，呼吸困难的程激素调节系统的状况相关。心室的体积和压力增高可导致血浆内BNP的升高，升高的程度与心室扩张和压力超负荷成正比可敏感和特异性反映左心室功能的变化。用BNP协助诊断心力衰竭，判断病情的严重程度和预后。BNP是从猪脑内分离纯化的一种利钠肽，具有强大的利钠，利尿，扩血管，降低血压的作用。BNP具有抑制血管平滑肌细胞和成纤维细胞增殖的作用，在血管再重塑 ...

最近有不少战友在做ChIP实验，希望我的一点经验对大家有帮助（本贴不谈实验步骤，最后我会附件一份说明书，有详细步骤，另外建议像我一样的新手用试剂盒，避免不必要的麻烦）一、原理转录从基因的启动子区开始，由一系列的转录因子结合到基因的启动子区，通用转录因子结合在基本启动子区起始转录，而这个过程对基因的转录是必需的，但不是充分的，通常需要一些特异的转录因子结合在上游调节序列，使基因特异表达并维持的合适水平，ChIP主 ...