全部

聚蔗糖-泛影葡胺分层液密度梯度离心法分离外周血单个核细胞【试剂及配制】（1） 聚蔗糖-泛影葡胺分层液：有成品供应，比重为1.077±0.0001。（2） 台盼蓝染液：称取4g台盼蓝，于研钵中用少量双蒸水研磨，加双蒸水至100ml，1500r/min 离心15min，吸取上层液，即为4%水溶液。用前，用1.8%氯化钠溶液稀释1倍，即为2%台盼蓝染液。（3） HBSS或RPM ...

淋巴细胞的分离单核细胞和多核白细胞具有粘附在塑料或玻璃表面及吞噬羟基铁粉等特性，而淋巴细胞则不能，由此可将其从悬液中分离出来。（一）玻璃器皿吸附法【操作方法】（1） 将分离的外周血单个核细胞（PBMC）悬液（2×106 /ml）倾入 玻璃平皿中，于37℃温箱静置30～40min使单核细胞粘附与玻璃平皿上； ...

流式细胞术分离法分离T淋巴细胞和B淋巴细胞【试剂及配制】（1） RPMI-1640培养基：应选购不含酚红的，使用时加入5%的小牛血清。（2） FITC-抗CD3单克隆抗体：FITC为异硫氰酸荧光素，CD3为T细胞表面特有的蛋白质分子（分化抗原）。【操作方法】（1） 用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离单个核细胞，用RPMI-1640培养基配成1×107 /ml；（2） ...

抗体/补体介导的特异性细胞毒作用分离法分离T细胞亚群人T淋巴细胞按其表面标志分为CD4+T和CD8+T细胞两类，其细胞膜上分别有CD4和CD8分子，当它们与相应的鼠抗人单克隆抗体结合后，在补体的参与下，可溶解相应的T细胞亚群，从而分离出另一种细胞亚群。【试剂及配制】（1） 聚蔗糖-泛影葡胺分层液（D=1.077±0.001）。（2） Hank’s液（内含5%小牛血清和1.0g/ ...

盘选(Panning)分离法分离T细胞亚群 聚苯乙烯表面可以用作亲和性试剂的不溶性基质以分离淋巴细胞亚群.聚苯乙烯培养皿首先用纯化的羊抗鼠IgG抗体包被然后将鼠抗人(如抗CD4或抗CD8单抗)与T细胞反应的细胞悬液加入培养皿中孵育一段时间后对CD4或CD8抗原特异的T细胞即结合到平皿表面而CD8+或CD4+细胞不结合轻吸出未贴壁的细胞悬液洗下粘附细胞。【试剂及配制】（1） 聚蔗糖- ...

免疫磁性微珠分离法分离T淋巴细胞和B淋巴细胞【材料及试剂】（1） 磁性激活细胞分离器（MACS）：MACS柱（C型，可结合2×108个细胞）生物素标记的抗CD4单抗和抗CD8单抗（2） 生物素标记的羊抗鼠IgG F(Fab)2（3） FITC标记的亲和素（4） 生物素标记的磁性微珠（5） MACS柱染色洗涤液、MACS柱洗脱液（含1%牛血清白蛋白的PBS） ...

E花结形成分离法分离T淋巴细胞和B淋巴细胞为了深入研究T、B细胞的生物学特性和功能，必需从淋巴细胞群体中分离出单一的T细胞或B细胞，以满足实验要求。根据T、B细胞膜表面标志及粘附能力等特性的不同，可将两者加以分离，常用的方法有E花结形成法、免疫吸附法和免疫磁性微珠分离法，近年来应用流式细胞仪可以分离出均质性的单一细胞类型或亚群。（一）此法是基于成熟的T细胞表面有独特的绵羊红细胞(SRBC)受体 ...

吸附分离法（贴壁法）分离单核细胞 单核细胞具有吸附于固相表面的特性，把单个核细胞放于玻璃或塑料平皿内，37℃于孵育一定时间后，吸附于平皿壁上的细胞即为单核细胞，未吸附的细胞即为淋巴细胞。【试剂及配制】（1）含5%小牛血清PRMI-1640培养基。（2）Hank’s液。【操作方法】（1） 含5%小牛血清PRMI-1640培养基将单个核细胞配成细胞悬液，将细胞悬液置于玻璃或 ...

磁化细胞分离器分离法（MACS）分离NK细胞 从外周血分离单个核细胞，以粘附法除去其中的单核细胞后，以尼龙棉柱法除去其中的B细胞，余下的T细胞和NK细胞以磁化细胞分离器(MACS)进行分离。有两种方法：阴性选择法，在反应中加入抗CD3抗体，使T细胞与之特异结合后形式磁性分离柱内，以除去标记的T细胞，洗下的未标记细胞；阳性选择法，在反应中加入抗CD16及抗CD56，使NK细胞与之特异结合形成 ...

密度分离法分离单核细胞 单核细胞只占末梢血白细胞的3%～5%，比重与淋巴细胞近似，用离心的方法很难将二者分开。而利用上述贴壁法也很难将两者分开，且有损伤细胞及回收率低等缺点。现可用以下两种方法获得量较多且纯度较高的单核细胞。1．Colotta方法【试剂及配制】（1） pH 7.2 PBS液（2） 聚蔗糖-泛影葡胺分层液（D=1.077）（3） ...

不连续密度梯度分离法分离NK细胞 NK细胞即自然杀伤细胞，是一群具有自然杀伤能力的大颗粒淋巴细胞，无粘附作用。它们不需要抗原激活，也没有MHC限制性，即能直接杀伤肿瘤细胞。成熟的NK细胞离开骨髓进入外周免疫器官，主要分布在脾脏和外周血中，约占外周血的3%。【试剂及配制】（1）pH 7.3柠檬酸缓冲液柠檬酸 327mg柠檬酸钠 2.63g碳酸氢钠 222mg葡萄糖 2.55mg ...

聚蔗糖-泛影葡胺法分离嗜碱性粒细胞【试剂及配制】（1） 聚蔗糖-泛影葡胺分层（D=1.085）（2） HEPES-ACM缓冲液：HEPES 25mmol/L中含CaCl2 1mmol、 NaCl 130mmol、 KCl 5mmol、 MgCl2 1mmol用1mol/L NaOH调节至pH7.4。（3） 无Ca2+、Mg2+Hank’s液【操作 ...

人外周血中性粒细胞制备 利用右旋糖酐加速红细胞沉降，将富含白细胞的上层液用淋巴细胞分层液进行离心分离，使粒细胞沉于管底而与淋巴细胞和单核细胞分离。（一）小量分离法【试剂及配制】（1） 6%右旋糖酐生理盐水（2） 聚蔗糖-泛影葡胺分层（D=1.077）（3） 0.83% NH4Cl溶液：取0.83g NH4Cl、0.1g KHCO3 、0.0 ...

Percoll密度梯度离心法分离嗜碱性粒细胞 正常人血液中，嗜碱性粒细胞是数量最少的一种白细胞（2.8×104/ml）因此也是最难分离、提纯的一种细胞。目前仍然用密度梯度离心法分离嗜碱性粒细胞。【试剂及配制】（1） 无Ca2+、Mg2+Hank’s液（2） Percoll混悬液：取购买的Percoll(Pharmacia)90mlHBSS 9mlHEPES ...

嗜酸性粒细胞的分离嗜酸性粒细胞在支气管哮喘、过敏性鼻炎等发病过程中起重要作用，研究其功能需要制备高纯度和高活力的嗜酸性粒细胞。以下介绍一种根据中性粒细胞膜选择性表达FcγRIII（CD16），采用包被有抗CD16单克隆抗体的磁珠，通过负性选择方式快速简便的分离脐血嗜酸性粒细胞的方法。【试剂及配制】（1）各种比重的聚蔗糖-泛影葡胺分离液A液：12% 比重1.090的聚蔗糖-泛影葡胺分离液B液：9 ...

免疫荧光染色技术检测各类免疫细胞的数量 免疫细胞在各自正常分化成熟的不同阶段以及活化过程中，其细胞膜表面均表达可供鉴别的特殊结构，即表面标志。其中CD分子常作为各类免疫细胞的表面标志用于免疫细胞的鉴定和分离以及用于检测在不同状态下某类免疫细胞数量的变化，能够反映机体免疫功能状态，有助于研究某种疾病的发病机制，为疾病的诊断和治疗提供依据。【基本原理】 利用荧光素标记抗人T细胞亚群的单克 ...

组织肥大细胞的分离肥大细胞不存在于循环血液中，需从有关组织如胃肠道和肺组织中获取，下面介绍从胃肠道组织中用机戒破碎，酶消化后获得肥大细胞的方法。【材料和试剂】（1） 肠片段3～5g（2） 含5% NCS的HBSS（3） 0.9%生理盐水（4） 含20% NCS和1ug/ml胶原酶的HBSS（5） 含20% NCS和 ...

树突状细胞（DC） 树突状细胞作为一种重要的抗原提呈细胞，参与免疫应答的启动和调节。它具有一些不同于其他细胞的特性如粘附性（过夜培养后，便失去粘附性）、比重较低等。人外周血中DC含量很少，仅占单个核细胞的0.1%～1%。利用细胞粘附和密度梯度离心的方法虽然可分离纯化外周血树突状细胞，但此法分离的DC，不仅纯度低，数量少，而且处于不同的分化阶段，已难以满足临床研究的需要。随着人们对DC发生学 ...

流式细胞仪术检测各类免疫细胞的数量 流式细胞术（FCM）是一种高速度、高灵敏度、高精度和高分辨率的自动分析细胞的高新技术。主要用于定量分析单细胞表面、细胞内抗原和对分子水平的核酸含量的测定。【试剂及材料】（1） FITC（或PE）标记的抗CD的mAb及正常小鼠IgG（2） 细胞洗液：含2%BSA、0.1%NaN3的PBS。（3） 固定液：2 ...

红细胞花环法检测各类免疫细胞的数量【基本原理】 采用戊二醛交联技术将McAb或兔抗鼠IgG与羊红细胞（SRBC）结合，制成致敏的SRBC。抗体致敏的SRBC可与T淋巴细胞直接或间接结合，在T淋巴细胞周围形成花环。通过计数花环形成率，从而确定T淋巴细胞各亚群。该方法可分为直接红细胞花环法和间接红细胞花环法。现以间接花环法为例。【试剂及材料】（1） 醛化二抗致敏的SRBC（2） ...