• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        组织肥大细胞的分离

        互联网

        4692

        肥大细胞不存在于循环血液中,需从有关组织如胃肠道和肺组织中获取,下面介绍从胃肠道组织中用机戒破碎,酶消化后获得肥大细胞的方法。

        [材料和试剂]

        (1)肠片段3~5g

        (2)含5%NCS的HBSS

        (3)0.9%生理盐水

        (4)含20%NCS和1ug/ml胶原酶的HBSS

        (5)含20%NCS和0.5ug/ml胶原酶的HBSS

        (6)含0.13mmolEDTA的HBSS(HBSS/ETDA)

        (7)用HBSS配成50mmol/LN-乙酰基-L-半胱氨酸。

        [操作方法]

        (1)切取小块组织,置于装有20ml(2)液的培养皿中;用剪刀去掉组织块上肠系膜及脂肪;室温下将组织块放入装有(3)液的烧杯内轻轻晃动,洗去组织上附着的杂物。弃掉液体后洗3次,然后用剪刀将组织块剪成小于0.3cm3的小块;

        (2)将剪碎的组织块放入装有以下预温的液体内,37℃下轻轻拨动,洗涤;先放(6)液内洗涤2次,每次5min,再放(7)液洗涤1次,1min后,最后放(2)液内洗2次,每次10min;

        (3)弃掉最后的洗涤液,并用剪刀将组织块剪成1mm3的碎块分别放入几个培养皿内;

        (4)加入(4)液25ml,放37℃,轻轻搅动下作用90min;

        (5)将上述液体加入50ml离心管内,4℃,1000r/min离心10min,弃上清;加入(2)液,放入冰浴中保存;

        (6)在剩余的组织碎片内加入(5)液25ml,继续作用60min。然后用注射器反复抽吸,使组织碎片散开,用网状海绵过滤,获得肥大细胞;

        (7)将上两次获得的细胞悬液合并,4℃,1000r/min离心10min,弃上清;

        (8)加5ml(2)后,用5ml聚酰胺纤维柱滤去碎片及细胞团块,再加5ml(2)液洗涤该柱。加上前一次的洗涤大约共的8~9ml细胞悬液。将此悬液4℃,1000r/min离心10min,弃上清,加少许(2)液,放入冰浴中备用;

        (9)用甲苯胺蓝染色后,计数肥大细胞的百分比。正常人:1×104~2×104细胞/mm3。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序