全部

1. 新鲜组织立即在恒冷冰冻切片机内切片( 也可- 80℃保存)，厚度为 5～6μm。 2. 载玻片可不打底，裱片后，立即用电吹风吹干。 3. 如不马上染色，可密封后- 20℃保存。 4. 染色前用冷丙酮在 4℃固定 10-20 分钟。 5. PBS 洗 2 次，每次 5 分钟，( 必要时应用 0.1%柠檬酸钠+0.1%triton打孔) 6. 3% H2O2灭活内源性过氧化物 ...

1. 75cm2方瓶中接种 293 细胞，至密度达到 90%，加入适量病毒上清感染细胞。 3- 4d 后，细胞几乎变圆，且有一半细胞漂浮，则收集所有细胞。约500g 转速离心，弃上清。 2. 以灭菌 PBS 重悬沉淀，反复冻融4 次。4℃下 7000g 离心 5min.病毒纯化至少 需要 30 瓶 75cm2方瓶细胞。 3. CsCl 连续梯度离心纯化：50ml 离心管中称量 4.4g CsCl ...

重组子可通过酶切进行鉴定，也可以利用扩增引物通过 PCR 进行鉴定，阳性重组子能切出所需要的片段或得到相应片段的 PCR 产物。 1. 用牙签挑取平板上的菌落接种于 2ml 含适当抗生素的 LB 培养基中，37℃摇 床培养过夜。 2. 次日取菌液 0.2-0.5ml，13000rpm×3min 离心，弃上清，加入 20μl ddH2O 和 20μl 酚/ 氯仿，震荡混匀， ...

1. 一般肿瘤蛋白疫苗首次免疫剂量 10ug/ 只小鼠，与相应佐剂混匀，在背部皮 下注射 2. 第 2 次免疫间隔 2 周，同样加佐剂在皮下注射 3. 第 3 次免疫间隔 2 周，同样加佐剂在皮下注射 4. 第3 次免疫后 2 周，用 ELISA检测其血清效价，当效价达 到要求时；在接种肿瘤细胞前 3 天，于腹腔或尾静脉加强注射 20ug / 只。 ...

1. 取第二轮筛选得到的阳性克隆贮存液上清。 2. 将过夜培养的 XL1-blueMRF' 细菌 2000 转/ 分离心 10 分钟，将细菌溶解在10mMMgSO4 中，调整细菌溶度到 OD600=1.0。 3. 在一个 EP 管中加入：200ul XL1-blueMRF' 细菌+250ul phagestock（步骤 1）+1 ul ExAssisthelper phage。 ...

1. 准备 NZY agar plates（至少用前 24 小时倒好） ，用前在37℃培养箱中烘烤1-2 小时以去除水滴。 2. 将过夜培养的 XL1-blueMRF' 细菌 2000 转/ 分，离心10 分钟，将细菌溶解在10mMMgSO4 中，调整细菌浓度为 OD600=0.5。 3. 融化 NZY top，并将 NZY top 放在 50℃水浴中。 4. 将适量的 XL1-blue ...

一、培养细胞的 DNA 含量的测定 制备单细胞悬液于 200μ l 的 PBS 缓冲液中； 加入 2ml 预冷的 70%乙醇，4℃保存； 附：细胞固定的一般步骤 1. 取单细胞悬液 1～2×106 个细胞于 PBS（PH=7.2）缓冲液中； 2. 300g 离心 5 分钟，弃上清，反复两次； 3. 重悬细胞于 0.5ml PBS 缓冲液中； 4. 将细胞悬液放置于 2～3ml ...

间接标记法 1. 制备单细胞悬液； 2. 细胞计数，取出 1×106 个细胞于试管中； 3. 用台盼蓝染色计活细胞数，要求活细胞数 >90～95%； 4. 在试管中加入一抗， （剂量按照说明书的要求） ，孵30育～60 分钟； 5. PBS 洗涤 1～2 次，1500rpm，离心 3 分钟，弃上清； 6.加入二抗，孵育 20～30 分钟； 7. PBS 洗一次，15 ...

水化上样( 被动上样) 1. 从冰箱中取出 IPG 胶条，室温放置 10min。 2. 沿水化盘槽的边缘从左向右线性加入样品，槽两端各 1cm 左右不加样，中间的样品液一定要连贯。注意：不要产生气泡，否则会影响胶条中蛋白质的分布。 3. 用镊子轻轻撕去 IPG 胶条上的保护层。注意：碱性端较脆弱，应小心操作。 4. 将IPG胶条胶面朝下轻轻置于水化盘中样品溶液上.注意：不要将样品溶液弄到胶条背面 ...

主要包括以下 4 个基本步骤：样品制备；电泳分离；蛋白的膜转移；免疫杂交与显色――蛋白检测。 溶液和试剂 1. 1X 磷酸盐缓冲液(PBS) 2. ModifiedRIPAbuffer：Tris-HCl:50 mM pH 7.4 ; NP-40: 1% ;Na-deoxycholate: 0.25% ;NaCl: 150 mM ;EDTA:1 mM ;PMSF: 1 mM;Aprotininle ...

一、细胞 DNA 含量分布（由细胞 DNA 降解方式检测细胞凋亡） ① 收集已固定的单细胞悬液约 5×105~1×106/ml； ② 离心除去固定液，3ml PBS 重悬细胞; ③ 1500rpm 离心，5 分钟 ，弃去 PBS； ④ 加 PI 染液 1ml，室温避光 20 分钟； ⑤ 调整细胞浓度 5×105/ml； ⑥ 上机检测。 二、磷脂酰丝氨酸外翻分析 ...

1. 将 E.coli /phagelysate 以 1:10-20 稀释在 TBST溶液中。 2. 将 4 张 82mm 的 nitrocellulosemembranes（NC）浸入稀释后的 E.coli/ phage lysate中，室温下水平摇动 30 分钟，取出 NC 并使膜沥干。 3. 用 50mlTBST 溶液洗膜 3 次，每次 10 分钟。 4. 用滤纸轻轻吸去膜上的液体。 5. ...

将对数生长的肿瘤细胞收集 ， 用无血清基质 10.0ml， 于 1500 转/ 分， 离心3min， 连续洗 3 次， 最后用无血清基质混匀， 用血球计数器计算肿瘤细胞数量( 平均 5 个中方格的细胞计数×104即是肿瘤数/ 毫升) 。 计算完肿瘤细胞总数， 再将 肿瘤细胞密度调至 4×106 个/ml， 每只小鼠腋下接种 50ul(即 2×105个肿瘤细胞) ...

样品制备原则 样品制备是双向电泳中最关键的一步，将直接影响 2-DE 结果好坏。目前并 没有一个通用的样品制备方法，尽管处理方法多种多样，但都遵循几个基本的原 则：1）尽可能的提高样品蛋白的溶解度，抽提最大量的总蛋白，减少蛋白质的 损失；2）减少对蛋白质的人为修饰；3）破坏蛋白质与其他生物大分子的相互作 用，并使蛋白质处于完全变性状态。 根据这一原则，样品制备需要四种主要的试剂：离液剂(chao ...

1．确定抗生素作用的最佳浓度： 不同的细胞株对各种抗生素有不同的敏感性，因此在筛选前要做预试验，确定抗生素对所选择细胞的最低作用浓度。 ①提前 24 小时在 96 孔板或 24 孔板中接种细胞 8 孔，接种量以第二天长成 25%单层为宜，置 CO2 孵箱中 37℃培养过夜。 ② 将培养液换成含抗生素的培养基， 抗生素浓度按梯度递增0（50 100 200 400 600 ...

1. 加入 1/10 体积的乙酸钠（3 mol/L ，PH=5.2）于 DNA 溶液中充分混匀，使其 最终浓度为 0.3 mol/L； 2. 加入 2 倍体积用冰预冷的乙醇混合后再次充分混匀置于- 20℃中 15~30 分钟； 3. 12000 g 离心 10 分钟，小心移出上清液，吸去管壁上所有的液滴； 4. 加入 1/2 离心管容量的 70％乙醇，12000g 离心 2 分钟，小心移出上清液 ...

1. 取出细胞爬片，迅速置入冷丙酮固定 20~30 分钟。 2. 蒸馏水浸泡 5 分钟，2 次。 3. 打孔液浸泡 5 分钟。 4. 蒸馏水浸泡 5 分钟，2 次。 注：第 3、4 步仅用于检测细胞内抗原，检测细胞膜抗原时不用。 5. 正常血清封闭：从染片缸中取出切片，擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分 （保持组织呈湿润状态）滴加正常山羊或兔血清 （与第二抗 体 同源动物血清）处理，37℃ ...

一．石蜡切片免疫组化染色实验步骤： 1．石蜡切片脱蜡至水：（石蜡切片染色前应置 60℃ 1 小时） 。 二甲苯 、II各 10 分钟。 梯度酒精：100%，2 分钟 95%，2 分钟 80%，2 分钟 70%2 分钟。 蒸馏水洗：5 分钟，2 次（置于摇床）。 2．过氧化氢封闭内源性过氧化物酶：3%H2O 2，室温 10 分钟（避光） ...

1. 将藻酸钠溶于无菌生理盐水，终浓度为 1.5%； 2. 收集培养的肿瘤细胞，用无血清的培养基洗涤1 次，将细胞沉淀重悬于1.5%藻酸钠溶液中； 3. 将上述肿瘤细胞悬浮液用 1 ml 加样枪缓慢滴入磁力搅拌的 250 mMCaCl2 溶液中，形成乳白色的藻酸盐小珠。继续静置于 250 mMCaCl2 中 30 min 即可 使用。以上操作步骤均在无菌条件下进行； 4. 将第 4 ...

1. 将 15-20cm 长的新生儿脐带放入无菌的 PBS 溶液中储存。（注：4℃下最多贮存 24 小时，室温下不超过 6 小时，否则废弃） 2. 用一个钝头的针头扎入脐带静脉管中，用无菌的 PBS 溶液冲洗 3-5 次，将污血冲洗干净为止。 3. 用手术钳夹紧脐带下端，加入 15ml 的胶原酶（1mg/ml）室温下消化 15-20分钟，并不时上下摇动脐带。 4. 消化完后，将下端手术钳松开，消 ...