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RNA探针的合成方法和合成效率检测

在RNA的杂交检测实验中,应用标记的RNA 探针将获得高灵敏度的杂交检测结果,与DNA 探针相比,检测灵敏度提高10-100倍。因为对于不同的杂交体类型来说,RNA-RNA杂交体的结合强度高于RNA-DNA和DNA-DNA杂交体。对于通过Northern blots检测低浓度mRNA,以及原位杂交的核酸定位检测等应用,RNA探针是一种理想选择。RNA探针同样也适用于Southern blots,文库筛选,斑点杂交等应用。但是,在RNA探针制备过程和整个杂交实验过程中,必须注意RNAse的防污染操作。

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鼠肝细胞原代培养实验方法

一、 实验材料: 6-8周龄大小鼠;剪刀,镊子,灌流用针头,连接管,玻璃平皿,细胞筛,冰盒 二、实验方法: 1. 培养用液 洗涤培养基:DMEM 基础培养基:DMEM/F12 2. 消化用液 前灌流液T1 ;后灌流液T2 3. 培养基本操作方法 a. 将小/ ...

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细胞因子和重组蛋白溶解必读(一)

我们知道,PeproTech的所有细胞因子和蛋白均为冻干粉,这使得运输非常便捷,只要常温即可。而且,细胞因子和蛋白冻干粉非常稳定,在-20oC或-80oC条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解,然后以液体形式加到培养体系或注射入动物体内。溶解步骤非常关键,因溶解不好会导致细胞因子或蛋白的失活,这也是很多用户在实际使用中经常遇到的问题。

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常见缓冲液最新配制方法

磷酸盐缓冲液,Tris缓冲液和柠檬酸缓冲液等是生物学实验中常用的缓冲液,也是PeproTech重组细胞因子和蛋白溶解所需的常用缓冲液。然而,这些缓冲液的配制比较麻烦,尤其当要获得特定pH值的缓冲液时,调节pH值是费力、费时的事情。对于Tris等缓冲液等,pH计是无法准确测量其pH值的。

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临床检验常见标本的收集与保存

临床检验常见的标本一般包括血液(指血,静脉血),尿,粪便,脑脊液,胸腹水,前列腺液,精液,阴道分泌物等,这些标本收集的时间、方法和保存都有一定的要求。一、血液标本有些生理因素,如吸烟、进食、运动、情绪波动、妊娠、体位等均可影响血液中某些成分的变化,有些甚至还有昼夜变化。因此血液标本的采集应尽量避免生理因素干扰,以条件一致为宜,如无法避免,应在标本上注明该因素。1.外周血一般选取左手无名指内侧采血, ...

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免疫血清制备方法

免疫血清的制备是一项常用的免疫学实验技术。高效价、高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂(如用于制备免疫标记抗体等),也可供特异性免疫治疗用。免疫血清的效价高低取决于实验动物的免疫反应性及抗原的免疫原性。如以免疫原性强的抗原刺激高应答性的机体,常可获得高效价的免疫血清。而使用免疫原性弱的抗原免疫时,则需同时加用佐剂以增强抗原的免疫原性。免疫血清的特异性主要取决于免疫用抗原的纯度。因此,如欲获得高特异性的免疫血清,必须予先纯化抗原。此外,抗原的剂量、免疫途径及注射抗原的时间间隔等,也是影响免疫血清效价的重要因素应予重视。

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没有IRT的DNA样品或许会很脏

很多研究者因样品DNA很脏,转而求助于我们。问题样品主要集中在土壤、粪便和血液。样品富含腐植酸、多糖类、亚铁血红素和色素等,与DNA交联严重抑制下游PCR扩增等酶实验和测序。MO BIO拥有一项专利抑制因子去除技术®(IRT),应用在多款试剂盒上能高效去除抑制因子却极少影响DNA得率。这项技术真的有用吗?负责任的研究者需要看到实验数据。最近我们接到下面的一个问题:Q:你们有使用与不使用抑制 ...

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快速检测茶叶中30种农药残留的QuEChERS-GC-MS法

近日,家喻户晓的立顿绿茶、茉莉花茶、铁观音袋泡茶叶均被曝出含有17种禁用农药。事实上,这已经是一个月内国际环保组织绿色和平处第二度向国内市场的茶叶“发难”了。4月11日,其发布了《2012年茶叶农药调查报告》, 声称包括吴裕泰、张一元、天福茗茶在内的九个茶叶品牌共计18+个茶叶样本上农药残留问题严重,不但有多种混合农药残留,更有超过半数样本检测出国家明令禁止使用在茶树上的高 ...

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反相色谱分析粮食中的有机酸

概述一般而言,反相,离子交换/尺寸排阻色谱方法常用于粮食中的有机酸分析。反相色谱中,常用ODS柱,使用酸性洗脱液抑制有机酸和固定相之间的离子相互作用。尽管采用了这种洗脱条件,当实际样品直接注入色谱柱时,在色谱图上也常出现异常的峰形。我们调查了在TOSOH IC-2010离子色谱系统有机酸峰形异常的问题。本文讨论了在不同的实际样品中色谱条件对提高有机酸峰形的影响。实验色谱柱分析柱:TSKgel OD ...

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“走进动物细胞体外培养技术”----德国Memmert CO2培养箱

细胞培养是指从体内组织取出细胞,模拟体内环境,在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下,使期生长繁殖,并维持其结构和功能的一种培养技术。动物细胞体外培养主要用来获得细胞群或得到其次生代谢产物,如人造皮肤、人造耳朵、克隆抗体,或者进行药物药效、有毒物质鉴定等。动物细胞培养需要严格的条件:A) 无菌无毒培养环境—保证细胞在体外培养成功的首要条件。在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防 ...

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用于石蜡切片的骨相关酶(TRAP、ALP)的双重染色法

1. 前言了解活体的骨代谢状态是研究相关细胞生理活性的一个有效方法。对骨组织进行碱性磷酸酶(ALP)染色后可以了解成骨细胞的骨形成情况,对骨组织进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色可以了解破骨细胞的骨吸收情况。若在同一切片上进行双重染色就能同时了解两者的情况。另外,它有一个优点是在脱钙标本里,只要可以双重染色,无需专用的设备,仅用一般的设备就可以方便地观察到骨代谢。在此前提下,我们需 ...

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DNA的Feulgen染色法

1.目的与原理实验目的:学习DNA的Feulgen染色方法,观察染色结果,了解反应原理。实验原理:DNA经弱酸(1mol/L HCl)水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开,使脱氧核糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚硫酸溶液)反应,形成紫红色的化合物,使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应。紫红色的产生,是由于反应产物的分子内含有醌基,醌基是一个发色团,所以具 ...

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细胞短串联重复序列鉴定的重要性

短串联重复序列(short tandem repeat,STR),又称为微卫星DNA ,重复单位为2-6bp,重复次数10~60多次,在DNA复制过程中的滑动、复制、修复过程中滑动链与互补链的碱基错配,从而导致一个或几个重复单位的缺失或插入,形成STR的多态性,主要应用于遗传连锁图谱分析、家系鉴定、身份认证 ...

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单核苷酸多态性检测方法—SNapShot

SNP(Single Nucleotide Polymorphisms),即单核苷酸多态性,是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性,它是人类可遗传的变异中最常见的一种,并作为第三代遗传标志。人体许多表型差异、对药物或疾病的易感性等等都可能与SNP有关,因此被广泛用于群体遗传学研究和疾病相关基因研究。目前,SNP检测技术已经很成熟,主要有以下几种检测方法:TaqMan探针法、H ...

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小鼠骨髓细胞微核试验

微核试验是用于染色体损伤和干扰细胞有丝分裂的化学毒物的快速检测方法。微核是指存在于细胞中主核之外的一种颗粒,大小相当于细胞直径的1/20~1/5,呈圆形或杏仁状,其染色与细胞核一致,在间期细胞中可以出现一个或多个。一般认为微核是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有丝分裂后期滞留在细胞核外的遗传物质。所以,微核试验能检测化学毒物或物理因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离 ...

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病毒的鸡胚培养

一、目的要求掌握鸡胚尿囊腔接种培养新城疫病毒的操作技术。二、器材1.鸡胚 应选用健康鸡群的受精蛋,接种鸡的鸡胚应无母源抗体,以免影响病毒在胚胎中的增殖。实验用的鸡胚多采用9—10日龄的活胚。2.接种材料 新城疫I系疫苗3.各种器械 孵卵器、照蛋箱、蛋架、打孔器、1ml结核菌素注射器、41/2号注射针头、镊子、3%碘酊、75%酒精棉球、铅笔、酒精灯、剪刀、眼科镊子、灭菌的疫苗瓶、灭菌滴管 ...

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限制性片段长度多态性(RFLP)分析

限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphismRFLP)分析技术是分子生物学的重要分析方法之一,用于检测DNA序列多态性。PCR-RFLP 是将PCR 技术、RFLP 分析与电泳方法联合应用,先将待测的靶DNA 片段进行复制扩增,然后应用DNA 限制性内切酶对扩增产物进行酶切,最后经电泳分析靶DNA 片段是否被切割而分型。 本实验将应用R ...

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分子标记——AFLP原理和操作步骤

一、原理AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接连接后的粘末端顺序和接头顺序就作为以后PCR反应的引物结合位点。实验中根据需要通过选择在末端上分别填加了1~3个选择性核苷 ...

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PCR-SSP分析实验原理和步骤

PCR 序列特异性引物(sequence specific primerSSP)分析法是使用能够特异识别特定等位基因的引物通过PCR 扩增检测序列多态性的方法,也称作等位基因特异性引物PCR 法。本实验是应用PCR-SSP 法检测MN 基因型。根据决定某等位基因的碱基性质,设计3′端第一个碱基分别与各等位基因的特异性碱基相匹配的序列特异性引物,在PCR 反应过程中,只有引物3&prim ...

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PCR法检测乙肝病毒(HBV)

多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种模拟天然DNA复制过程,在体外扩增特异性DNA(或RNA)片段的新技术。本实验是将待检双链DNA经94℃高温变性成单链作模板,然后加入一对人工合成的寡核苷酸引物,引物分别与待扩增DNA片段的两端互补,经55℃ 低温退火,引物与模板互补结合。在72℃条件下,结合于模板上的引物在DNA聚合酶的催化下,利用反应体系中的4种d ...

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