鼠肝细胞原代培养实验方法
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一、 实验材料：
6-8周龄大小鼠；剪刀，镊子，灌流用针头，连接管，玻璃平皿，细胞筛，冰盒
二、实验方法：
1. 培养用液
洗涤培养基：DMEM
基础培养基：DMEM/F12
2. 消化用液
前灌流液T1 ;后灌流液T2
3. 培养基本操作方法
a. 将小/大鼠进行麻醉，待其进入深度麻醉状态后迅速将其固定于解剖板上，于超净台中解剖，暴露肝脏；
b. 沿肝门静脉插管固定，灌流前灌流液T1（37℃下预热），流速5ml/min，待肝脏膨胀后迅速剪断下腔静脉, 灌流15min；
c. 前灌流液灌流完后，立即灌流后灌流液T2（37℃下预热），流速3ml/min，5-10min；
d. 取下肝脏，置于平皿中，冰上剪碎肝组织，200目滤网过滤；用基础培养基清洗网上组织；
e. 收集滤液，600rpm 离心2min；重复一次；
f. 弃上清，往沉淀中加2ml完全培养基，重悬细胞后，台盼蓝染色计数，将细胞接种至鼠尾胶原包被的25cm2培养瓶中，37℃ 5%CO2培养箱中培
