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组织培养试剂 一般提示：优化您的细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基（如，RPMI 1640和DMEM）。培养基的成分包括营养物质（氨基酸，葡萄糖），维生素，无机盐，和缓冲物质。有些成分非常不稳定，因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物质 ...

微小RNA（microRNA，简称miRNA）是生物体内源长度约为20~23个核苷酸的非编码小RNA，通过与靶mRNA的互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行负调控，导致mRNA的降解或翻译抑制。在近期的《细胞》杂志上，两个研究小组的成员发现了miRNAs与靶mRNA之间的新关系：他们提出miRNAs将靶基因mRNA的水平调整到了一种最佳水平，并用不同的实验进行了证明。 在第一篇 ...

自荷兰癌症研究院（The Netherlands Cancer Institute）肿瘤生物学部、德国马克斯·普朗克生物物理化学研究院（Max-Planck-Institute for Biophysical Chemistry）、丹麦哥本哈根大学等多国研究人员组成的研究团队，发现了一种进化上保守的RNA结合蛋 ...

微小RNA (microRNA，简称miRNA)是生物体内源长度约为20~23个核苷酸的非编码小RNA，通过与靶mRNA的互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行负调控，导致mRNA的降解或翻译抑制。到目前为止，已报道有几千种miRNA存在于动物、植物、真菌等多细胞真核生物中，进化上高度保守。 一般而言，编码miRNAs的基因最初产生一个长的pri-RNA分子，这种初期分子还必须被剪切成约70 ...

一、资料与方法 1. 检测对象：研究对象来自武汉协和医院2003年3月-2004年10月的住院患者或门诊体检人群。恶性肿瘤组：经临床手术和病理检査确诊为肺癌、肝癌、前列腺癌、乳腺癌、消化道肿瘤和妇科肿瘤等患者121例，其中男74例，女47例，平均年龄56.5岁；疾病对照组：临床确诊为胆囊炎、胰腺炎、前列腺炎（增生或肥大）、肝炎或肝硬化等良性疾病患者的血清样本作为良性疾病 ...

一、材料和方法 1. 标本来源：156份临床病理确诊的消化系统肿瘤患者（男92例，女64例，年龄12~85岁，平均年龄53岁）血清标本来自北京天坛医院和中国医学科学院肿瘤医院，其中，肝癌50份、胰腺癌33份、肠癌32份、胃癌41份。健康体检者（男70名，女57名，年龄16~68岁，平均年龄46岁）血清标本127份。消化系统炎症患者（男47例，女48例，年龄18~70岁， ...

一、仪器和试剂 Luminex200流式荧光检测仪(美国Luminex公司）；流式荧光多肿瘤标志物联合检测试剂（上海透景生命科技有限公司）； E170电化学发光分析仪及配套肿瘤标志物检测试剂（罗氏公司）。 二、标本来源 2007年5月~6月，200名患者空腹静脉血，每人采集4 ml，血样分别置于美国BD公司分离胶试管中，-20℃下保存待检。 三、操作与评价方法 试剂盒测定参数设置和仪器操作严 ...

LucidaGrande Lucida Helvetica Arial sans-serif;"Gibson Assembly is a high-efficiency DNA end-linking technique developed by Daniel Gibson at the JCVI in 2009 83 106); font-family: 'Lucida Grande' Lu ...

一、荧光原位杂交技术发展历史 1969年，Gall，Pardue和John等人，分别独立建立了同位素原位杂交技术。 1974年，Evans，第一次将染色体显带技术和原位杂交技术结合起来，提高了基因定位的准确性。 1975年，Manning等人，最先在溶液的分子杂交中，使用非放射性标记，通过细胞色素c将生物素与RNA分子连接起来。 1977年，Rud ...

一、荧光原位杂交（FISH） 是一种简单、敏感、而容易操作的方法，结果迅速，并能在同一标本上检测多个不同的基因，可应用于细胞培养、染色体分裂像、冰冻切片和石蜡切片。 FISH技术是利用特异的DNA探针，标记了生物素，地高辛、或荧光素，对检测细胞进行DNA-DNA原位杂交，并用荧光法显示。 FISH实验步骤 试剂配制： （1）变性液（70%甲酰胺 + 2×SSC，pH7.0）：4 ...

一、预处理 1. 脱蜡至水 （1）二甲苯5分钟，2次 （2）100%酒精1分钟，2次 （3）95%酒精1分钟，1次 （4）85%酒精1分钟，1次 （5）双蒸水1分钟，3次 2. 加热预处理 （1）热预处理液（试剂盒内带）加热至98-100℃时，放入切片，15-20分钟。 （2）双蒸水洗1分钟，3次 3. 胃蛋白酶消化 （1）将胃蛋 ...

一、地高辛（Dig）标记DNA探针在石蜡切片上的检测方法 1. 组织切片的预处理 （1）固定：组织以10%中性福尔马林液，常规石蜡包埋，切片厚4-6 μm，最好用硅化玻，60℃烤片6-8 h。 （2）脱蜡至酒精。 （3）入0.2 mmol/L HCl 20 min 去除蛋白。 （4）50℃2×SSC，含5 mmol/L EDTA溶液中30 min。 （5）蛋白酶K（ ...

一、基本原理 是指运用寡核苷酸等探针检测细胞和组织的RNA表达的一种原位杂交技术。其基本原理是：在细胞或组织结构保持不变的条件下，用标记的已知RNA核苷酸片段，近核酸杂交中碱基配对原则，与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合（杂交），所形成的杂交体经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的Mrna、rRNA 和tRNA分子。 RNA原位杂交不同于DNA原位杂交主要有： （1）使用的 ...

1. 电泳图谱不齐或分离不良 这是电泳分析中最常见的问题，多数是由于血清滴加不均匀或滴加过多，也有因薄膜质量不合要求所致。点样这一步非常关键，一定要按操作步骤进行。首先选择质匀、孔细、染料吸附少的薄膜充分浸透缓冲液至湿度均匀无干白点。然后将滤纸吸去薄膜表面的多余水份，使薄膜含水量饱和均匀，这样才能防止薄膜表面液体含量不均，水份移动而引起标本移位。 点样前注意关闭门窗和风扇，因空气流 ...

一、原理 带电粒子在电场中向着与其自身带相反电荷的电极移动的现象，称为电泳。控制电泳条件（如pH 等），使混合试样中的不同组分带有不同的净电荷，各组分在电场中移动的速度或方向各不相同，从而达到分离各组分的目的，这就是电泳分析法。以醋酸纤维素薄膜作支持物进行电泳分析的方法称为醋酸纤维素薄膜电泳法。 在pH4.8 电泳缓冲液条件下，带有不同量磷酸基团的AMP、ADP、ATP 解离之后，带有负电荷量 ...

一、原理 血清中各种蛋白质的等电点大都低于pH7.0，在pH8.6巴比妥缓冲液中，它们均电离成阴离子，在电场中向阴极泳动。由于各种蛋白质在同一pH环境中所带电荷多少及分子大小不同，所以在电场中的泳动速度不同。一般所来，蛋白质分子量小而带电荷多者，泳动速度快，分子量大而带电荷少者泳动速度慢，因此可以利用其泳速不同将之分开。 血清中含有清蛋白、α-球蛋白、&be ...

火箭电泳实际是一种定量免疫电泳。其原理为：在电场作用下，抗原在含定量抗体的琼脂介质中泳动，二者比例在合适时在较短时间内形成状似火箭或锥形的沉淀线，而此沉淀线的高度常与抗原量成正比关系，因此本法可以测定样品中抗原的含量。 一、材料 1. 诊断血清（抗体）：抗人IgG或IgA免疫血清。 2. 待检血清（抗原）：人血清。 3. 参考血清。 4. &nb ...

免疫电泳实验是先将抗原物质在琼脂凝胶中做电泳分离，然后于凝胶槽中加入抗体血清。使抗原抗体进行双向扩散，在比例适宜部位形成特异的抗原抗体沉淀弧线。 每条沉淀弧线代表一组抗原抗体复合物，故可用抗原成分分析；且可以根据其迁移率与抗体所出现的特异反应进行鉴定。 一、材料 1. 待检标本（抗原）：正常人血清。 2. 抗体：正常人血清的家兔免疫血清。 3. 1.5%离 ...

对流免疫电泳是在琼脂扩散基础上结合电泳技术而建立的一种简便而快速的方法。此方法能在短时间内出现结果，故可用于快速诊断，敏感性比双向扩散技术高10-15倍。 血清蛋白在pH8.6条件下带负电荷，所以在电场作用下都向E极移动。但由于抗体分子在这样的PH条件下只带微弱的负电荷，而且它的分子量又较大（为r球蛋白）。所以游动慢。更重要的是抗体分子受电渗作用影响较大，也就是说点渗作用大于它本身的迁移率。所 ...

琼脂扩散是抗原抗体在凝胶中所呈现的一种沉淀反应。抗体在含有电解质的琼脂凝胶中相遇时，便出现可见的白色沉淀线。这种沉淀线是一组抗原抗体的特异性复合物。 如果凝胶中有多种不同抗原抗体存在时，便依各自扩散速度的差异，在适当部位形成独立的沉淀线，因此广泛地用于抗原成分的分析。琼脂扩散实验可根据抗原抗体反应的方式和特性分为单向免疫扩散、双向免疫扩散、免疫电泳、对流免疫电泳、单向及双向火箭电泳实验。 一 ...