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        多肿瘤标志物液态芯片技术检测恶性肿瘤的临床应用价值

        互联网

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        一、资料与方法

        1. 检测对象:研究对象来自武汉协和医院2003年3月-2004年10月的住院患者或门诊体检人群。恶性肿瘤组:经临床手术和病理检査确诊为肺癌、肝癌、前列腺癌、乳腺癌、消化道肿瘤和妇科肿瘤等患者121例,其中男74例,女47例,平均年龄56.5岁;

        疾病对照组:临床确诊为胆囊炎、胰腺炎、前列腺炎(增生或肥大)、肝炎或肝硬化等良性疾病患者的血清样本作为良性疾病对照组,共42例,其中男25例,女17例,平均年龄46.2岁;正常对照组:选择体检健康者39例,其中男18例,女21例,平均年龄45.3岁。三组对象间的年龄、性别比较,均无显著性差异。

        2. 标本采集:均于清晨空腹采集静脉血3 ml,分离血清后于-70℃保存待测。

        3. 仪器与试剂:仪器采用Luminex 100多功能流式点阵分析仪。

        4. 检测方法:严格按照仪器说明书及试剂盒说明书操作,同时检测9种肿瘤标志物:血清中甲胎蛋白(APF)、癌胚抗原(CEA)、糖原125(CA125)、糖原242(CA242)、前列腺特异性抗原(PSA)、游离前列腺特异性抗原(f-PSA)、β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)。

        二、讨论

        为早期发现、诊断和治疗肿瘤,目前临床已广泛开展肿瘤标志物的检测。

        血清肿瘤标志物的测定方法主要有放射免疫分析、酶免疫分析、化学发光免疫分析、电化学发光免疫分析等,这些方法都是单指标的检测方法;而对肿瘤进行单一标志物的检测始终存在着特异性不强、灵敏度低等不足,特别是对早期肿瘤的检出率不高,因此可能会造成部分患者漏诊。

        若想避免这种情况而对每份标本进行多指标分析费用又很昂贵,而且需要的血清量较大。

        鉴于这种情况,国内孔宪涛等较多专家认为应从分析技术入手,发展能够同时、快速、准确检测多种肿瘤标志物的综合技术,从而提高肿瘤诊断的敏感性。多肿瘤标志物液态芯片定量检测方法即是顺应该要求,利用液态芯片的原理和特点建立的一种新型肿瘤标志物检测方法。

        液态芯片检测方法是基于美国Luminex公司硏发出的多功能悬浮点阵仪技术平台。

        其原理是把微小的聚苯乙稀颗粒(Beads,微球)分别染成不同的荧光色,然后再把针对不同检测物的抗体或核酸(互补链)分别以共价方式交联到荧光编码微球上,再加入被检测物(被测物可以是血清中的抗原、酶或PCR产物等),在悬液中微球与被检测物特异性地结合。


        最后加上荧光标记(藻红蛋白),在检测系统中微球成单列通过两束激光。一束判定微球的颜色从而决定被测物的特异性(定性);另一束测定微球上的荧光标记强度从而决定被测物的量(定量),所得到的数据经计算机处理后可以直接用来判断结果。

        本试验利用该技术对121例肿瘤患者、42例良性疾病患者和39例正常人血清标本进行了检测。


        结果显示,液态芯片法对肿瘤的检测有较好的灵敏度和特异性(分别为81.8%和76.5%),而且该方法对肺癌、肝癌、结直肠癌、胃癌、卵巢癌、胰腺癌和前列腺癌等几种常见肿瘤进行9项指标联合检测的阳性率均显著高于单一标志物的检测(P均<0.05)。

        这其实也印证了肿瘤标志物在肿瘤中的分布特点:对于大多数肿瘤来说,某一种肿瘤可能存在多种肿瘤标志物,而同一种肿瘤标志物也可能出现于多种肿瘤中。

        所以联合检测肿瘤标志物就具有了单一指标检测无法替代的优势。本试验的结果在一定程度上证实了对多种肿瘤标志物进行联合检测可以提高恶性肿瘤诊断的敏感性,与国内外的研究基本相

        液态芯片技术作为近年来才发展起来的新技术,有些方面还需要不断改进,但其在肿瘤标志物检测上的优势正得到了国内外越来越多的研究证实。随着该方法的进一步完善,必将为肿瘤的早期诊断、疗效监测和预后判断提供更多的有用的信息。

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