HER2显色原位杂交法
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一、预处理
1. 脱蜡至水
（1）二甲苯5分钟，2次
（2）100%酒精1分钟，2次
（3）95%酒精1分钟，1次
（4）85%酒精1分钟，1次
（5）双蒸水1分钟，3次
2. 加热预处理
（1）热预处理液（试剂盒内带）加热至98-100℃时，放入切片，15-20分钟。
（2）双蒸水洗1分钟，3次
3. 胃蛋白酶消化
（1）将胃蛋白酶先放入37℃温箱预热，然后滴加至组织上。
（2）室温，5-30分钟（其间用显微镜观察，如果出现细胞核向外突出，有荷包蛋样改变即可停止，此步较为关键，消化不足和消化过了，都会导致假阴性或只有少量阳性）
（3）双蒸水1分钟，3次
4. 酒精脱水
（1）85%酒精1分钟，2次
（2）95%酒精1分钟，1次
（3）100%酒精1分钟，1次
（4）室温或37℃温箱干燥5分钟
二、变性和杂交
1. 滴加探针：在组织中央滴加探针（约法10-15 μl），将盖玻片轻轻的盖在组织上，避免产生气泡。
2. 将玻片放在原位杂交仪或原位PCR仪上，如没有也可平放于铝制饭盒等底平的器皿底部。
3. 95℃变性5分钟，如没有原位杂交仪或原位PCR仪，可将水烧开，拔去插座，放入铝盒，将水温控制在95℃-98℃，6分钟；也
可以放入95℃烤箱内，5分钟。
可以放入95℃烤箱内，5分钟。
4. 快速冷却至37℃（如没有原位杂交仪或原位PCR仪，可将铝盒移至冰水中冷却），并将玻片移至湿盒内，37℃温箱孵育12小时。
5. 杂交后，小心除去玻片，放入CAS-BlockTM阻断液或TBS/Tween20（0.025%）液内洗1分钟，然后放入75℃的CAS-BlockTM阻断液洗5分钟，TBS/Tween20（0.025%）液洗也可达到同样的效果。
6. 双蒸水1分钟，3次
三、免疫显色
1. 滴加3%甲醇双氧水液5-10分钟（室温）。
2. TBS/Tween20（0.025%）液1分钟，3次。
3. 滴加封闭液5-10分钟（室温）。
4. 擦去多余封闭液，滴加小鼠抗地高辛抗体室温30分钟。
5. TBS/Tween20（0.025%）液1分钟，3次。
6. 滴加HRP-抗鼠抗体室温30分钟。
7. TBS/Tween20（0.025%）液1分钟，3次。
8. DAB显色5-30分钟（镜下控制，以组织芯片同时达到预期强度为标准）。
9. 自来水洗。
四、衬染和封片
1. 苏木素浅染10-30秒
2. 水洗，蓝化，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
