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一、实验原理 蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织生活条件易于掌握，在任氏液的浸润下，神经肌肉标本可较长时间保持生理活性，因此，在生理学实验中常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观察神经肌肉的兴奋性、兴奋过程以及骨骼肌收缩特点等。 二、实验设备 蛙类手术器械和药品1套，包括：蛙板、小玻板各1块，粗剪刀、直剪刀各1把，大镊子、小镊子各1把，眼科 ...

一、实验原理 高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收 ...

一、实验试剂 10% (v/v) Household Bleach Callus Induction Medium Gamborg's B5 Basal Medium 0.5 g/liter MES pH 5.7 0.05 mg/liter Kinetin 0.5 mg/liter 24-dichlorophenoxyacetic Acid (24-D) 0.8% (w/v) Agar ...

按现代的观念，凡是混入培养环境中对细胞生存产生有害的成分和造成细胞不纯的异物都应该视为污染。根据这一概念，组织培养污染物应包括生物（真菌、细菌、病毒和支原体）、化学物质（影响细胞生存、非细胞所需的化学成分）、细胞（非同种的其他细胞）。其中一微生物最为多见。另外，随着使用细胞种类增多，不同细胞交叉污染，尤其是Hela细胞的污染也时有发生，从而造成细胞不纯。 1. 污染途径 ...

1. 原理：细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。 单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞计数法等，这里介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。 BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷） ...

1. 原理：体外培养细胞生长、分裂繁殖的能力，可用分裂指数来表示。它与生长曲线有一定的联系，如随着分裂指数的不断提高，细胞也就进入了指数生长期。分裂指数指细胞群体中分裂细胞所占的百分比，它是测定细胞周期的一个重要指标，也是不同实验研究选择细胞的重要依据。 2. 仪器、用品与试剂 （1）仪器与用品：CO2培养箱、普通显微镜、细胞培养血、盖玻片、吸管 （2）试剂 ...

为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑，考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异，有时因寄赠、交换和购买，培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室，最佳的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(－70℃~－196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是：在－70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键 ...

1. 从原代组织中分离细胞 将组织块分离（散）成细胞悬液的方法有多种，最常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。 从原代组织中获得单细胞悬液的一般方法是酶解聚。细胞暴露在酶中的时间要尽可能的短，以保持最大的活性。下列步骤可以解聚整个组织，获得较高产量的有活性细胞。 （1）胰蛋白酶 (Trypsin) ●在去除不需要的组织后，使用无菌的解 ...

一、 培养细胞的细胞生物学 1. 基本概念通常，体外培养的生物成分无外乎两种结构形式： 其一是小块组织或称为组织块（tissue block），一般称为外植块； 其二是将生物组织分散后制成的单个细胞，一般称为分离的细胞(isolated cell)或者分散的细胞(dissociated cell)。 分散的过程通常在培养液或平衡盐溶液中进行，分散的细胞被悬浮于培养液或平衡盐溶液中。 ...

1. 如何选用特殊细胞系培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。 2. 何时须更换培养基？ 视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。 3. 可否使用 ...

一、溶剂处理方面的潜在危险 A、溶剂无水处理前，一定要预处理 对于低沸点的溶剂，如乙醚，正戊烷等一定要先用干燥剂预先干燥，然后再加入钠丝进行回流，并且加热不能过快过高。因为，一旦溶剂里面的含水量过大，那么生成氢气很剧烈的话，溶剂极易冲出体系，然后遇见明火或正在加热的电阻丝，发生爆炸。这一点在有机所是有先例的，当时的惨状是，爆炸的冲击波从三楼冲到顶楼，把通风装置炸的粉碎。包 ...

一、试剂与材料 1. 鲑鱼精DNA（Invitrogen） 2. 45 μm 孔径滤器（USAScientific） 3. 96孔板（BD Biosciences） 4.10×PBS-Tween20（0.1 M PBS，0.5%Tween20，pH7.4）： （1）Na2HPO4（无水），10.9g ...

一、材料和试剂 1. PVDF或硝酸纤维素膜（Amersham，GEhealthcare） 2. 透析袋（PierceCat#68035） 3. 丽春红S（Sigma，Cat#P7170） 4. 脱脂奶粉（Carnation，any your favorite brand in local store） 5. 吐温-20（Sig ...

IFN-γ（干扰素-γ）主要产生于激活的T细胞和NK细胞。TH1型响应的特点是通过辅助T细胞和细胞毒T细胞产生IFN-γ，所以高水平IFN-γ的产生是由于寄主应对细胞内的病原体产生了有效的防御。酶联免疫斑点法通常用于评估抗原特异的T细胞的功效，即检测IFN-γ的释放。酶联免疫斑点法是一种非常灵敏的免疫检测方法，它可以在单细胞水平检测细胞 ...

一、材料与试剂 1. 第一抗体 2. 第二抗体（Invitrogen） 3. 100%冰冷丙酮 4. 马血清（SantaCruz;sc-2483） 5. Hoechst 33342荧光染料（Invitrogen;H1399） 6. ProLong Gold抗褪色试剂（Invitrogen;P36934） 7. & ...

一、材料 1. Resazurin细胞活力检测试剂盒（Biotium，Inc.30025） 2. 细胞：在本试验中，使用了三种人类前列腺癌细胞系进行检测。 （1）DU145（ATCC，HTB-81） （2）PC3（ATCC，CRL-1435） （3）LNCap（ATCC，CRL-1740） 二、仪器 1. SpectraPLUS酶标仪 &n ...

一、材料和试剂 1. 抗体 （1）Ratanti-mouseCXCR5-biotin（BP Pharmingen 551960） （2）Goatanti-ratIgG-biotin（BP Pharmingen 554014） （3）Straptavidin-PECy7（B PPharmingen 557598） （4）Ratanti-mous ...

一、材料与试剂 1. 抗体 （1）鼠抗人CD56FITC（BD340410） （2）鼠抗人CD2FITC（BD555326） （3）鼠抗人CD19FITC（555412） （4）鼠抗人CD14PerCP（InvitrogenMHCD1431） （5）鼠抗人CD16PacBlue（BD558122） （ ...

腹膜内注射巯基乙酸盐可以稳定诱导大量的中性白细胞到腹腔中。对这些细胞的运输被认为是通过CXCL1，CXCL2，和CXCL8等炎症趋化因子介导的（1，2）。因此这一模型可以用于在生物工程小鼠（例如敲除或转基因小鼠）中检测中性白细胞向这些炎症趋化因子移动，或者能够用于检测确定的分子（例如一些小分子或者抑制类抗体）抑制这些因子的化学活性.这一实验方法被作者成功的用于鉴定病毒的多重的趋化因子抑制剂的功能 ...

带有水疱性口炎病毒（vesicularstomatitisvirusG，VSV-G）蛋白的假型逆转录病毒载体已被证明可将基因高效递送到各种细胞中。其效率受相对细胞的生长速度以及细胞膜上的磷脂酰丝氨酸的水平影响。 一、材料与试剂 1. DMEM（GIBCO，11995-065） 2. 胎牛血清FBS（GEMBIO900-108） 3. 青霉素/ ...