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一、细胞复苏和接种 1. 37℃预热小鼠间充质干细胞培养液和基础培养液。 2. 从液氮中取出细胞产品管，快速将其置入37℃水浴中解冻，直到管中只剩下最后一片结晶（注意：不要让水没过产品管）。 3. 在生物安全柜中，用75%的酒精擦拭产品管外壁。 4. 将产品管中的细胞移至15ml无菌离心管中，慢慢逐滴加入预温的37℃基础培养液4－5 ml混匀，边滴加边摇匀。 5. 用1ml基础培养液冲洗产品管， ...

单克隆抗体在现代生物医学中的作用越来越大，它不仅被广泛应用于生化和免疫检测，而且治疗癌症和自体免疫疾病的单抗药物也逐渐批准上市。因此单抗的制备和筛选具有其内在的重要性。 动物免疫 取4只6周龄雌性BALB/c小鼠皮下注射抗原（20 μg/只），第一次免疫与等量弗氏完全佐剂乳化，0.2 mL/只；两周后进行第二次免疫，抗原与等量弗氏不完全佐剂乳化，皮下注射，0.2 mL/只；两 ...

来源于：ACROBiosystems USA 细胞因子简介 细胞因子(CytokineCK)是一类能在细胞间传递信息、具有免疫调节和效应功能的天然活性蛋白质，可以有效促进免疫细胞(如DC细胞，CIK细胞等)、干细胞的体外生长。根据细胞因子主要的功能可分为以下几类： 1，白细胞介素（InterleukinIL)由淋巴细胞、单核细胞或其它非单个核细胞产生的细胞因子，在细胞间 ...

总的说来，荧光检测技术可大致分为两大类：通用型的荧光染料检测法和高特异性的荧光探针 法。前者主要是利用荧光染料(如SYBR Green I)与双链DNA分子结合发光的特性来指示扩增产物的增加，优点是：无需另外设计荧光探针 ，无需特别优化条件，简便易行，成本较低，能适用于任何一款定量PCR仪，缺点是专一性不如探针法；而后者则利用荧光标记的特异性探针或者引物来识别模版，优点是特异性更高，适用于扩增序 ...

蛋白质是生命活动的执行者，细胞内的生理变化都是通过蛋白质来实现的。但是生命活动中各项功能和行为不是由单一的蛋白质来完成的，需要蛋白质与蛋白质，蛋白质与核酸之间的相互作用来实现的。蛋白-蛋白互作网络与转录调控网络对调控细胞及其信号有重要意义。于是对于蛋白之间相互作用的研究也变的很重要，关于研究方法也是层出不穷。 在我们实验研究的过程中主要用到以下几种技术： 1.酵母双杂交（Y2H） ...

一、酶消化法 1、胰酶。这是用得最多的。一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据细胞种类、作用温度等因素而变化很大，从几分钟到几十分钟不等。0.25%的胰酶作用于单层贴壁的细胞，在37度条件下，一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于细胞间。配制时不能用含钙、镁的平衡液，否则影响活性。保存于-20度。 2、胶原酶。这种方法比较少，一般是用原代培养时，从组织消化下细胞。这种方法作用温 ...

1. 冷冻管应如何解冻？ 取出冷冻管后， 须立即放入37 ℃水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。 2. 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？ 除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含 ...

我虽博士论文盲审和答辩均以全优通过，文章也发了不少（IF 总和约20），但回头看，还是有很多不尽如意的地方，在此将个人经验与各位XDJM 交流，望批评、鼓励和讨论。 1、要脚踏实地，但目标不能太低。“欲得其中，必求其上；欲得其上，必求上上”，口里可以说只求达到学校规定的最低标准就可以了，但心里一定不能限于此。 2、学会做人，做一个大家欢迎的人。 ...

1、如果细胞状态不好，可能是消化或者培养基的原因，细胞胞浆会出现空泡，一旦出现过多，细胞基本不能用。 2、心肌细胞不能传代。 3、心肌细胞有聚集生长的特性，培养时间长点，一般超过4天后，细胞会聚集成小岛状，以小岛为中心搏动，当然有小岛说明细胞密度较小。 4、心肌细胞的状态与细胞密度有很大关系，一般细胞密度越大，心肌细胞相对来说越容易长好，达到同步搏动的时间也快。 5、心肌细胞同步搏动不难 ...

众所周之，每次给细胞换液体的时候都需要把细胞拿出来，然而就这一拿，“学问”就在里面：我们要尽量缩短细胞在培养箱外面的时间，尽量增加细胞在最适环境中的时间。 换液流程： 1.将培养基放在37度水浴锅内，准备好废液缸、吸管、酒精棉球，干棉球，在超净台上，将照相机放在显微镜旁边，然后开超静台紫外，开培养室紫外，开培养室风机，空调。 2.30 min后 ...

1. 当PCR结果不满意时考虑以下几个方面 (1)将PCR反应的试管与反应板紧贴 (2)使用50ul或更少反应体系时勿使用AmpliWax两个反应混合液=的操作方式在大多数情况下很有效 (3)当酶反应混合物以70度"热启动"开始循环时切记在加入酶后稍微振荡一下因为在0.2ml的PCR管不能均匀传热. (4)不要随意减少dNTP的用量必需与其他成分保持平衡. &nb ...

条条大路通罗马，纯化之路千万条。本篇是写给蛋白质纯化新手的，就一些最常用的纯化工艺、概念方法作一些列举。以起始原料的不同来进行分类，分为：大肠杆菌、酵母、细胞培养、腹水、血清、生物组织六个板块。 板块一、大肠杆菌 （这里讨论的大肠杆菌为非分泌到培养基中的重组蛋白，是否有重组蛋白分泌到培养基中的工程菌我没有见过。） 一、关于菌体的量 大肠杆菌表达的基因工程蛋白是纯化人员最方便获得的 ...

1、 物质在体内氧化和体外氧化有什么异同？ 体内氧化即是生物氧化。它是在细胞内的由酶催化的氧化反应，几乎每步反应都由酶来催化进行。不需要高温，也步需要强碱及强氧化剂的协助，在体温和中性pH环境中即可进行；是逐步进行、逐步完成的，不会骤然放出大量的热量。更不会产生高温、高热。另外，反应中逐步释放的能量相当一部分可使ADP生产ATP，储存在ATP分子中，以供生理生化活动的必需 ...

1. 何谓必需脂肪酸？ 有些脂肪酸不能由机体合成，如亚麻酸，亚油酸和花生四烯酸等。需从食物中摄入，故称必需脂肪酸。 2. 何谓载脂蛋白？何谓酰基载体蛋白(ACP)？ 脂类不溶或微溶于水，而正常人血浆中脂类含量高达500 mg/dl，但血浆仍清澈透明。这表明血浆中的脂类不是以自由状态存在的。而是以一种可溶的形式存在和运输的，血浆中游离脂肪酸（非酯化 ...

1. 糖除了供能外，还有何功用？ 糖类不只是能量的来源，它也是组织细胞的重要组成成分，如，核酸，蛋白聚糖，糖蛋白，糖脂等。 2. 葡萄糖是如何在缺氧条件下转变为乳酸？有什么意义？ 葡萄糖在糖酵解途径中产生的还原当量(NADH+H+)要重新氧化为NAD+，酵解才能继续进行。因为细胞中NAD+含量甚微。因此，缺氧条件下，丙酮酸可以作为氢受体，接受氢 ...

摘自张迺衡编著的（北京医科大学，第二版) 1. 用紫外吸收法测定溶液中蛋白质含量时，波长是多少？用此波长的依据是什么？ 色氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸在280nm附近有最大吸收，多数蛋白含有这tyr， trp残基。所以在紫外分光中用280nm对它们进行检测。 2. 氨基酸有哪些成色反应？哪些是肽，蛋白质共有的？各 ...

先介绍一下His Tag，为5-15 His 串在一起的小肽， 在表达纯化中用的较为普遍的一种Tag 从本质上说它是一种亲和性Tag，但也个案证明其也能做一些兼职工作：增加蛋白可溶性，提高蛋白稳定性。但它的本质工作是与IMAC亲和，使纯化过程变的更加程序化，更具可控性。 相对与其他亲和Tag如 GST Flag Strep 它的特点可谓鲜明： 一，小，浓缩的都是精华， ...

Glutathione S-transferase omega 1 (GSTO-1) exists as both a wild-type (wt) and a mutant (mut) enzyme due to a polymorphism in a single amino acid Ala140Asp. (1) The role that this gene product plays ...

养细胞是医学研究生的基本功。我养过骨髓MSC、心肌细胞、心肌成纤维细胞、AD293腺病毒包装细胞、PA317逆转录病毒包装细胞。养得最多的是MSC。有三个小经验和大家分享一下： 1. 不要烧瓶口 大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子，觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑？知道为什么吗？烧瓶口烧的。培养基一般都是用碳酸/碳酸氢跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的 ...

pET 是目前应用最为广泛的原核表达系统，已经成功地在大肠杆菌中表达了各种各样的异源蛋白。经pET系统过与使用过和正在使用这个系统的科学家的交流，我们发现了一些在使用pET系统的过程中以及原核表达中的一些常见问题。在此，我们选取了其中一些比较有代表性的问题，附上我们的建议改进方案，并期待和你一起分享成功的喜悦。 1.目的蛋白总是以不可溶的形式出现真是令人烦恼 在大肠杆菌中表达 ...