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一、细胞冷冻保存1、材料：生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO（Sigma D-2650）、无菌塑料冷冻保存管（Nalgene　5000-0020）、0.4％（w/v）trypan blue（GibcoBRL15250-061）、血球计数盘与盖玻片、等速降温机（KRYO10SeriesII）。2、冷冻保存方法：（1）传统方法：冷存管置于4℃10分钟→ -20℃30分钟→ -80℃16～18小时 ...

一、目的要求学习诱导植物器官外植体形成愈伤组织的方法。二、基本原理已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化状态，转变为具有分生能力的胚性细胞，这个过程称为脱分化（dedifferentiation）。来自于植物各种器宫的外植体在离体培养条件下，细胞经脱分化等一系列过程，改变了它们原有的特性而转变形成一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团，即 ...

一、红细胞膜的制备(一)原理随着生物膜研究的迅速发展，在膜的结构及功能的研究中分离和鉴定生物膜常常是必要的。为进行膜结构的生物化学分析，必须首先分离出纯净的细胞膜。哺乳动物的红细胞膜在分离状态下。一般称为”血影”，其没有通常真核生物细胞内所含有的任何细胞器，经过制备，容易得到纯粹的细胞膜，并且在取材方面来源方便，因此哺乳动物的红细胞膜是研究细胞膜的好材料。从哺乳动物红细胞中分离细胞质膜，第一步，将 ...

一、 实验目的 （1） 了解透射电子显微镜的主要结构、功能与基本工作原理； （2） 了解扫描电子显微镜的主要结构、性能与基本工作原理。 二、 实验步骤（讲解演示） 1）透射电镜样品超薄切片常规制作规程 1．取材：根据实验目的取材，要求部位准确，体积小于2mm3 2．醛类固定：用2%-3%的戊二醛固定2小时； 3．清洗：用磷酸缓冲液清洗3次，每次10min； 4． ...

一、实验目的　　1 了解和学习两类核酸显示的原理及操作程序。　　2 了解细胞中DNA和RNA的分布。二、反应原理1．Feulgen反应：　　DNA经弱酸（1mol/L HCl）水解后，嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打开，并且使脱氧核糖与磷酸间的磷酯键断开，在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。醛基在原位与Schiff（无色品红亚硫酸溶液）试剂结合，形成紫红色化合物，使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应 ...

一、目的要求通过实验掌握诱导植物多倍体的方法和技术，观察多倍体的特点及染色体加倍后的细胞学表现。利用染色体分析的方法对多倍体的细胞作出准确判断。二、基本原理生物体的细胞核中都有相对稳定的染色体数目，这是物种的基本特征之一。如玉米的体细胞具有20 条染色体，人类则具有46 条染色体，但是这些细胞核内的染色体并不是杂乱无序的，而是组成一个或多个染色体组（genome)，或称基因组。在同一染色体组内所有 ...

一、实验目的 　　掌握植物细胞骨架的光镜标本制作方法。　　细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构，按组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。光学显微镜下细胞骨架的形态学观察多用1% Triton X-100处理细胞，可使细胞膜溶解，而细胞骨架系统的蛋白质被保存， 再用考马斯亮兰R250染色，使得胞质中细胞骨架 ...

动物细胞大规模培养已成为生物制药领域最重要的关键技术之一，并以其研究的深入和进展推动生物技术产业的迅速发展。专家预言：蛋白治疗药物如糖蛋白、抗体和多肽药物仅仅只是刚刚开始进入市场，预计在下一个10年或20年会有更为快速的发展。届时，蛋白治疗药物的迅速增长和市场需求将远远超过全世界的生产能力。动物细胞规模化生产重组蛋白和抗体的工艺选择可考虑使用当前较成熟的工业化支持技术平台，以缩短产品工艺研发的时 ...

实验目的 了解新生牛血清在细胞培养中的作用，掌握血清筛选技术。 实验原理 牛血清是细胞培养基中的中药成份之一。在培养基中加入适量血清（10%），首先可以补充细胞生长所需的生长因子、激素、帖附因子等，其次它具有解毒作用，能解除脂肪酸、重金属和某些蛋白酶的毒性；再次，它还能中止胰酶的作用，并保护细胞免受机械损伤等。但是血清成分复杂，不同来源、不同批号生产的血清对细胞生长作用的差异较大。血清的保存期 ...

实验目的 1.能独立的进行细胞技术，会绘制生长曲线，了解细胞生长的发育特性。 2. 学习在科研中如何应用生长曲线。 实验原理 生长曲线的测定（计数法）是测定细胞绝对生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，为培养细胞生物学特性的基本参数之一。一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。在细胞达到饱和密度后，停止生长，进入平顶期，然后退化衰亡。 ...

1．培养IL-2依赖细胞株CTLL-2细胞或HT-2细胞（检测IL-2），或者IL-3依赖细胞株FDC-P1细胞或FL5.12细胞（检测IL-3）到对数生长期。2．取96孔细胞培养板，每孔加0.1ml含1×104～2×104上述细胞之一的DMEM培养液（加10％小牛血清）。3．每孔加0.1ml系列稀释的待测细胞因子（IL-2或IL-3）样品或细胞因子标准品，在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳 ...

1．用含10％小牛血清和抗生素的RPMI-1640培养液将K562细胞配成1×105/ml浓度。用同样培养液将PBMC配成1×106/ml浓度。 2．取96孔圆底细胞培养板，每孔加0.1ml K562细胞悬液；每孔加适量PBMC使效靶比为1：1～5：1，每种处理3个复孔；3个对照孔只加效应细胞；8个对照孔只加靶细胞；4个对照孔只加细胞培养液。每孔加20μl Alamar Blue；每孔总量为0.2 ...

1．取96孔细胞培养板，每孔中加0.1ml含2×104～10×104靶细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养2～3小时让细胞帖壁（如果是悬浮细胞可直接进行下一步）2．用RPMI-1640培养液2～10倍递次稀释细胞因子标准品，根据情况2～5倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品和待检样品，每个稀释度3个重复孔。对照 ...

1）用淋巴细胞分离液分离PBMC 1．抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸盐（PBS）悬浮细胞。将此悬液小心加在淋巴细胞分离液上，400×g离心30分钟。 2．离心后红细胞在管底，PBMC在血浆和淋巴细胞分离液的交界面。收集PBMC，用PBS洗涤细胞两次，每次离心150×g 10分钟。低速离心可以减少血小板沉淀，但细胞沉淀物较松散，去上清液时注意丢弃细胞。 3．将细胞悬浮于含2％～5％人 ...

一、实验目的：初步掌握供体-受体原生质体融合产生胞质杂种的方法，了解胞质杂种产生的原理和意义。二、实验原理：体细胞杂种有核杂种（nuclear hybrid）和胞质杂种（cybrid）之分。前者指双亲完整原生质体的融合产物，后者是指一亲本的去核原生质体，（即胞质体cytoplast）与另一亲本完整原生质体融合的产物，胞质杂种一般只具有一个亲本的细胞核，而具有两个亲本细胞质的遗传物质，胞质杂交可用来 ...

靶细胞的制备（分离肿瘤细胞和TIL） 1．无菌摘取肿瘤，置预冷的含抗生素的RPMI-1640培养液中，剪去结缔组织，剪碎瘤体至1～2mm大小。放置2～10分钟让组织块沉淀，吸去上清液。 2．将沉淀的组织块置5～10倍体积的消化液中，37℃中搅拌或振荡1～4小时或室温过夜。用力吹打组织块，即可得到单个细胞悬液。 3．离心400×g 10分钟，除去消化液。用5倍体积的RPMI-1640培养液悬浮细胞。 ...

一、 实验目的 观察各种组织细胞的切片，注意联系细胞形态和功能之间的关系； 通过观察显微结构，熟悉显微镜的原理和正确使用方法，提高分析、思考和解决问题的基本能力。 二、 实验用品 双目显微镜，动植物显微装片，擦镜纸。 三、 实验步骤 一切有机体的生命活动都是在细胞内或由细胞与细胞协同完成的。在细胞内，一切生理生化过程都代表着或影响到机体的生命活动，这些活动表现为极其严格的程序化和自动控制性 ...

1）铕荧光检测法标记靶细胞1．EuCl3的制备：称取58.08mg Eu2O3，用少量1N HCl搅拌至溶解，再用1N NaOH调节pH至4.0。加双蒸水配成33～100mmol/L的保存液，4℃保存备用。2．用预冷的标记液将靶细胞浓度调整到5×106/ml，加50μl 10mg/ml硫酸葡聚糖，置冰浴中20分钟，其间摇晃数次。3．加入30μl 100mmol/L CaCl2溶液终止反应5分钟。4 ...

根据调亡的生化特征的检测方法 一、琼脂糖凝胶电泳 1）常规的琼脂糖凝胶电泳 方法一： 1．收集细胞（5×106）1000r/min，离心5min，去上清。 2．PBS洗一次，1000r/min，离心5min，去上清。 3．加细胞核裂解液500μl重悬细胞，50℃水浴，3～5h，不时振摇或37℃过夜。 4．加0.5ml平衡酚抽提，上下颠倒几次混匀，6000r/min，离心5min。 5．上清移至另一 ...

　　材料与方法　　1. 主要试剂：MTT、XTT、PMS、DMSO（Sigma公司产品)，RPMI　　1640（Gibco公司），氟尿嘧啶（上海旭东海普药业有限公司），注射用盐酸阿霉素（深圳万乐药业有限公司)，注射用丝裂霉素Ｃ（协和发酵工业株式会社），新生小牛血清（杭州四季青公司提供）。　　2. 细胞与细胞培养：人肝癌细胞系 BEL-7402置含10%新生小牛血清的RPMI　　1640培养液中，于 ...