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        细胞骨架的光学显微镜观察

        互联网

        12362

        一、实验目的
          掌握植物细胞骨架的光镜标本制作方法。
          细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构,按组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。光学显微镜下细胞骨架的形态学观察多用1% Triton X-100处理细胞,可使细胞膜溶解,而细胞骨架系统的蛋白质被保存, 再用考马斯亮兰R250染色,使得胞质中细胞骨架得以清晰显现。

        二、材料、试剂和 仪器
          1. 材料
            新鲜洋葱鳞茎、人口腔上皮细胞
          2. 试剂
            1) M缓冲液(pH 7.2)各成分终浓度为:
              50mmol/L咪唑(MW:68.08),
              50mmol/L KCl(MW:74.55),
              0.5mmol/L MgCl2?6H2O(MW:203.30),
              1mmol/L EGTA(MW:380.36),
              0.1mmol/L EDTA-Na2(MW:372.24),
              1mmol/L DTT(MW:154.3)
            2) 6mmol/L PBS磷酸缓冲液 (pH 6.5):
              KH2PO4 : Na2HPO4?2H2O = 7:3 (见附录3 查磷酸缓冲液的配置)
            3) 0.7% NaCl生理盐水
            4) 1% Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚) 溶于 M-缓冲液
            5) 3% 戊二醛100mL: 25% 戊二醛取12mL ,PBS 88mL
            6) 0.2% 考马斯亮蓝R250染液 200mL:
              考马斯亮蓝R250 0.2g,
              甲醇 46.5mL,
              冰乙酸 7mL,
              蒸馏水46.5 mL
          3. 仪器
            光学显微镜,镊子,剪刀,试管,表面皿,滴管,载玻片,盖玻片,灭菌牙签,1.5mL 离心管 ,1mL 吸头 ,1mL取液器,酒精灯,染色缸

        细胞骨架动画

        三、实验程序
          

        四、结果与分析
          洋葱鳞茎外层与内层的表皮细胞比较(放大倍数10×20)
          

        五、思考题
          1.光镜下观察到的细胞骨架有何形态特征?
          2.请设计一个实验鉴定你所观察到的细胞骨架是哪一类型。

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