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1. 对每个基因设计并检测两到四个siRNA序列为了找到潜在靶位点，扫描靶基因中的AA序列。记录每个AA 3’端19个核苷酸作为潜在siRNA靶位点。潜在靶位点需通过GENBANK数据库的BLAST分析，去除那些与其它基因明显同源的靶位点。如果可能，siRNA应根据mRNA低二级结构的区域设计。美国著名RNA产品公司Ambion提供网上在线设计工具，帮助您更快地完成这项工作。网址为：www.ambion.com/tec ...

　　一旦生物样品被收集采摘，它的RNA会立刻变得非常不稳定，极易被降解。由于特异及非特异的RNA降解，或者由于应激反应产生新的RNA都会引起RNA状态的改变。对于生物芯片、基因表达矩阵分析（Array Analysis）、定量RT-PCR等实验来说，采 样后立即稳定样品里的RNA以保存当时RNA的表达状态，是精确/定量研究基因表达分析的重要前提。为了达到这个目的，往往需要将液氮或者干冰带到采样现场，采样后立即运回实验室保存。 ...

设计原则：1.克隆到shRNA表达载体中的shRNA包括两个短反向重复序列，中间由一茎环（loop）序列分隔的，组成发夹结构，由polⅢ启动子控制。随后在连上5-6个T作为RNA聚合酶Ⅲ的转录终止子。2.两个互补的寡核苷酸两端须带有限制性酶切位点。3.Stratagene发现29个寡核苷酸较之原先推荐的23个寡核苷酸可以更有效的抑制目的基因。4.在启动子下游的酶切位点下方紧连一个C，使插入片段和启动子有一定空间间隔 ...

2，3－DPG：2，3－diphosphatidylglyceric acid，2，3－二磷酸甘油酸2－CdA：2-chlorodeoxyadenosin,cladribine，2－氯去氧腺苷3H－TdR：tritiated thymide，氚标记胸腺嘧啶核苷5－Aza：5-azacytidine，5－氮（杂）胞苷a2-PI：a2-antiplasmin, a2－纤溶酶原抑制物AA：aplastic anemia，再生障碍性贫血AAV：aden ...

1：DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克 ...

1．溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强 ...

芯片实验设计要点作为一种高通量的实验平台，基因芯片可以同时对多至上万个基因进行表达水平的监测。考虑到芯片实验本身的高成本，实验前对整个实验方案的认真设计就显得非常重要。影响芯片结果的主要方面包括被检测实验材料本身，芯片实验过程，数据处理过程。实验材料实验材料的选用直接影响到最后结果的解释。在选择时要注意以下几点：1.根据实验需要达到的目的，首先要求实验材料具有代表性，如临床标本的取材部位，病人的临床诊断是否明确 ...

PCR问题的总结pcr产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　pcr反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及活性 ④pcr循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模板核酸变 ...

活体电穿孔法介绍1、什么是活体电穿孔活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用,并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单,在直流电场作用的瞬间,细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～115μm ,这种通道能维持几毫秒到几秒,然后自行恢复。在此期间生物大分子如DNA 可通过这种微小的通道进入细胞 。近年来活体 ...

我做质粒小量提取,刚开始的几次实验都没有理想的结果,分析来分析去发现问题可能是培养时间的问题:将菌种从-70度接到LB培养基37度过夜,再用此菌液涂平板获得单克隆,用EP管取1.5毫升LB培养基,用接种环每挑一个菌落每接种一管(将挑到的菌落全洗下去),37度培养约13个小时,直接按照"分子克隆"提供的碱裂法提,结果一无所获.后来在师兄的提醒下我想到是否是因为培养时间过长而使质粒缺失?于是我测了此菌的大致生长曲线,发 ...

1．目的学会用限制性内切酶切割质粒DNA。2．原理II型限制性内切酶能识别双链DNA内部的特殊序列并在识别位点处将双链切断，形成粘性末端或齐平末端，通过电泳酶切后的DNA混合物能够确认和分离酶切片段。3．器材旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml微量离心管，双面微量离心管架，水漂，恒温水浴。4．试剂Pinpoint™xa-3质粒，EcoR V，BamH I，内切酶缓冲液（10×），10×电泳加样缓冲液，荧光染料。5．实验 ...

一，酵母表达系统毕赤酵母表达系统（invitrogen公司）：分泌型质粒pPIC9K，宿主菌毕赤酵母GS115分泌型质粒pPICZalpha （甲醇诱导）宿主菌毕赤酵母x33分泌型质粒pHIL-S1二，原核表达质粒表达宿主菌为BL21(DE3)系列带His标签（N端）：PET5-(a)氨苄抗性带His标签（N端）：PET28-(a)卡那抗性带His标签（C端）：PET24-(b)卡那抗性带His标签（C端）：PET21-(a)氨苄抗性 ...

一、防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿冲洗（注意：有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀，故不能使用）。3. 有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗涤，双蒸水冲洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2 室温10min，然后用0.1% DEPC水冲洗，晾干。4. 配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC，在37℃处理12hr以上。然后用高压灭菌除去残留的DEPC。不能高压灭菌 ...

1．目的学习SDS-PAGE的基本操作，学会用SDS-PAGE检测蛋白。2．原理蛋白质在加热变性以后与SDS结合，带上负电荷，在电场的作用下，向正极移动，结果按分子量大小排列在胶板上，含量多的蛋白带纹粗。3．器材旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，台式冷冻离心机，制冰机，超声波破碎仪，电磁炉，电泳仪，垂直电泳槽及配套的玻璃和密封条、梳子等。4．试剂SDS（十二烷基磺酸钠），Acr（丙烯 ...

甲基化特异PCR（Methylation-specificPCR）资料大全关键词：甲基化特异PCR、DNA甲基化、Methylation-specificPCR、甲基化特异PCR文献、甲基化特异PCR引物设计、甲基化特异PCR实验注意事项第一部分：甲基化特异PCR文献5 undefined A! Y" w1 g8 \$ W9 E8 {/ undefined V; t! Z: undefined Q6 ^+ Q4 c( l7 U( F' g, b8 o. K- j: w% a. ?: o7 第二部分：实验protocol第三部分：甲基化引物设计http://www.urogene.org/methpr ...

丙烯酰胺凝胶电泳　　聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。在这种支持介质上可根据被分离物质分子大小和分子电荷多少来分离。聚丙烯酰胺凝胶有以下优点：①聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N，N'甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝胶有 格子是带有酰胺侧链的碳-碳聚合物，没有或很少带有离子的侧基，因而电渗作用比较小，不易和样品相互作用。②由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质，在聚合前可调节单体的浓度比，形成 不同程 ...

本人有大量的资料资源，有需要的朋友欢迎来交换，邮箱：1739507720@qq.com：质粒类别抗性详细信息pGEX4T-1大肠杆菌质粒AmppGEX4T-2大肠杆菌质粒AmppGEX4T-3大肠杆菌质粒AmppGEX-6P-1大肠杆菌质粒AmppGEX-6P-2大肠杆菌质粒AmpPGEX-KG大肠杆菌质粒AmppGEX-6p-Caspase大肠杆菌质粒AmppET3a大肠杆菌质粒AmppET3b大肠杆菌质粒Am ...

ReviewNature Reviews Genetics 8, 573-587 (August 2007) | doi:10.1038/nrg2141Engineering targeted viral vectors for gene therapyReinhard Waehler1, Stephen J. Russell2 & David T. Curiel1 About the authorsTop of pageAbstractTo achieve therapeutic success, transfer vehicles ...

Amaxa Nucleofector转染平台一览表高级平台96孔平台高通量平台基础平台设备4D Nucleofector 系统96孔 shuttle转染仪HT Nucleofector系统Nucleofector II 转染仪通量低-中通量（1-16孔）低-中通量（1-96孔）高通量（384孔）低通量（1孔）体积20μl+100μl20μl20μl100μl电极材料导电聚合物导电聚合物导电聚合物铝离子小细胞数(20μl)2 x 104 --- 1 x 1062 x 104 --- 1 x ...

光度计测量的转换:双链DNA (ds DNA)：A260 = OD260 = 1 相当于50 µg/ml溶液单链DNA(ss DNA)：A260 = OD260 = 1相当于33 µg/ml溶液RNA：A260 = OD260 = 1相当于40 µg/ml溶液参考文献：Freifelder, D., Physical Biochemistry: Applications to Biochemistry & Molecular Biology, W.H. Freeman and Company, CA, 1982, p. 494-536.核酸分子量计算方程式：吸光度 ...