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        【共享】核酸吸光度、分子量、摩尔浓度之间的相互换算

        丁香园论坛

        8320
        光度计测量的转换:
        双链DNA (ds DNA):A260 = OD260 = 1 相当于50 µg/ml溶液
        单链DNA(ss DNA):A260 = OD260 = 1相当于33 µg/ml溶液
        RNA:A260 = OD260 = 1相当于40 µg/ml溶液
        参考文献:Freifelder, D., Physical Biochemistry: Applications to Biochemistry & Molecular Biology, W.H. Freeman and Company, CA, 1982, p. 494-536.
        核酸分子量计算方程式:
        吸光度(A)=摩尔消光系数×浓度×长度
        500 bp的双链DNA=325,000 Daltons
        500 nundefined的单链DNA=162,500 Daltons      nt_~L_nucleotide~Kbr_~H~M~2~1dNMP的平均分子量=325 Daltons
        寡聚体定量:
        20-mer,A260 = 1的贮存液含有5 nmol寡聚体:5 nmol = 33 µg/(20×325)
        40-mer,A260 = 1的贮存液含有5 nmol寡聚体:2.5 nmol = 33 µg/(40×325)
        pmol为单位的引物转换为µg为单位的引物:
        (X pmoles×长度bp×325)/ 1,000,000
        例:10pmoles的25-mer,则为
        (10pmol×25bp×325)/ 1,000,000 = 0.081 µg primer
        µg为单位的引物转换为pmol为单位的引物:
        (X pmoles×1,000,000)/(长度bp ×325)
        例:0.1µg的20-mer,则为
        (0.1µg×1,000,000)/(20bp×325)= 15.4 pmoles primer
        PCR扩增反应引物浓度的计算:
        引物毫摩尔浓度(mM)= pmoles/µl
        例1:100µl PCR反应体系中有20pmol的引物 = 0.20 mM
        例2:引物为24bp,并溶解于0.1ml µl H2O中;
        10µl溶液稀释至1.0ml测定其A260为:A260 = OD260 = 0.76;
        则贮存液在260nm(A260)的吸光度为76;
        0.1ml的贮存液含有7.6个单位的A260;
        引物碱基组成为:A=6, C=6, G=6, T=6;
        260nm引物的摩尔消光系数 = a(16,000) + b(12,000) + c(7,000) + d(9,600)
        注:a、b、c、d分别是 A's、G's、C's、T's的碱基个数;
        PCR引物的摩尔消光系数= 6(16,000) + 6(12,000) + 6(7,000) + 6(9,600) = 267,600
        则PCR引物贮存液的摩尔浓度为:76/267,600 = 284 mM
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