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各位好！我是分子生物学实验的新手。我的课题的第一步是要用RT-PCR获得全长的cDNA（接到pMD-18上）,我用如下引物的话是不是无法得到所要的目的序列？因为primer5.0的评分很差的。各位好朋友能否帮帮我？Genebank Accession Number :AF144325gene:1...1758cds: 100....17311 aggagaaaag ggcgctgggg ctcggcggga ggaagtgcta gagctctcga ct ...

Ambion公司的protocol:将合成的DNA(长度约55nt)溶解成1ug/ul,各取2ul,加46ul退火缓冲液(100mM乙酸钾，30mMHEPES-KOH pH7.4,2mM乙酸镁)，90度30min,37度1h,然后可以用来联接，或贮存于-20度。我们实验室有人按此方法成功了,我正在做。其他的非RNAi专用的退火条件有：TaKaRa:1.用STE缓冲液(10mM Tris pH8.0,50mM NaCl, 1mM EDTA)溶解DNA ...

几十年来生物学上最重要的进展，也许是关于RNA分子能调节基因表达的发现。RNA 干涉（RNAi）是指双链RNA分子使基因表达沉寂的现象，是在线虫中发现的，在 1998年的一篇Nature论文中被公诸于众。此后，科学家们明白，RNAi还有其他形式，它既是一种了解基因功能的强大工具，又是很多生物的基因组所采用的一种在演化上来讲很古老的防卫方法。RNAi肯定有很多新用途，RNAi还可能具有一些仍然有待去发现的天然功能。在本期 ...

pEGFP-N1质粒图谱及信息多克隆位点区Restriction Map and Multiple Cloning Site of pEGFP-N1. (Unique restriction sites are in color or bold.) The Not I site follows the EGFP stop codon. The Xba I site ~undefined) is methylated in the DNA provided by CLONTECH. If you wish to digest the vector with this enzyme, you will need to transf ...

最近想从cDNA文库中钓一个基因出来，但是在PUBMED上搜索，出现很多的序列。以前我也遇见过这样的情况，但是没怎么注意，只是找到自己想要得，但是今天一个同学和我说，他找的序列结果发现没注意仔细鉴别，可能是别的基因。那么就是说，用PUBMED搜索的结果里有的不是这个基因了。不知道应该怎么确定哪个基因序列是你要的??(?)另外，打开一个序列，里面除了序列以外有很多别的东西，有的能明白，有的不知道是什么，比如：（1）STS 95 ...

转基因动物基本概念转基因老鼠的命名1转基因老鼠的命名2外源基因导入方式及检测flox/cre recombination system 转基因动物基因打靶与核移植结合生产乳腺反应器转基因动物BALB/C小鼠质粒转基因EGFP转基因小鼠的检测转基因检测失败的原因细胞转基因丁酸钠增强基因表达bFGF的问题1bFGF的问题2AAV转基因植物转基因植物基因组DNA Southern Blot农杆菌介导的水稻转基因程序载体马铃薯 ...

此方法是我在国外的一个实验室工作时所用的。简单、批量、转化效率高。Simple and Efficient Method (SEM) to Make Competent CellsPreparation of Frozen Competent of DH5α1) 250 ml TB solution10mM Pipes or 10 mM Hepes, 0.65g15 mM CaCl2, 0.55g250 mM KCl, 4.66undefined55 mM MnCl2, 2.47gAll the components except for MnCl2 were mixed and the ...

资料太多，时间有限，只整理了这些，才知道分子生物学何其博大精深。第一次整理，经验不足。申请加分。;)分子生物学理论和书http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=1205089&sty=3&keywords=%B7%D6%D7%D3%C9%FA%CE%EF%D1%A7http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=105&id=552642&sty=3&keywords=%B7%D6%D ...

Procedure for Transfection of Mammalian CellsMaterials:LipofectamineIMDM containing 10% fetal bovine serum, 1% glutamine, 1% aaIMDM containing 1% glutamineIMDM containing 20% fetal bovine serum, 1% glutamine, 1% aa(1)In a six-well or 35 mm tissue culture plate, seed ~2x 105 cells per well ...

这是我的引物在ncbi上blast的部分结果，我看不懂。是不是说我的引物和以下的都是同源的？这些都不是同一个基因？也就是说我的这个引物不能用了？:(为什么会有这么多的同源片段那？我想找到全长的基因，这个引物是前面的和后面的一段，我想我都的要，怎么办那？1，Homo sapiens protein translocase, JM26 protein, UDP-galactosetranslocator, pim-2 protooncogene homo ...

虽然是老东东了，虽然too old，但是我加上了我自己的整理：）http://www.postharvest.net.cn/films/UploadPhotos/molecular/在膜上杂交.rm　http://www.postharvest.net.cn/films/UploadPhotos/molecular/用磁珠法从总RNA中分离mRNA的原理.rm　http://www.postharvest.net.cn/films/Uploa ...

DNA芯片技术基因芯片（又称DNA芯片、寡核苷酸芯片等）最早由E． Southern在1989年提出。其突出特点在于高度并行性、多样性、微型化和自动化。高度的并行性 可大大提高实验的进程，有利于DNA芯片技术所展示图谱的快速对照和阅读。多样性 在单个芯片中可以进行样品的多方面分析，提高了分析的精确性，避免因不同实验条件产生的误差。微型化 可以减少试剂用量和减小反应液体积，从而提高样品浓度和反应速率。高度自动化 可以降低制造芯片的成 ...

这里是2010年1月份回复为0的帖子，由于各种原因沉淀了下去。为了发挥DXY的资源优势和互助传统，特此整理，请各位战友积极应助，加分从优！如果您是发帖者，并且有了很好的解决办法，也最好能发帖上来，这样，便于后来者再遇到类似问题的时候能够向您学习！thanks！1.请站友们推荐一个可免疫筛选cDNA表达文库方案。http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=16306123&sty=1&t ...

基因工程的诞生基因工程是分子水平对生物遗传作人为干预，要认识它，我们先从生物工程谈起：生物工程又称生物技术，是一门应用现代生命科学原理和信息及化工等技术，利用活细胞或其产生的酶来对廉价原材料进行不同程度的加工，提供大量有用产品的综合性工程技术。生物工程的基础是现代生命科学、技术科学和信息科学。生物工程的主要产品是为社会提供大量优质发酵产品，例如生化药物、化工原料、能源、生物防治剂以及食品和饮料，还可以为人类提供 ...

碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。每个曾经用碱法抽提过质粒朋友，希望你看本文后能有所收获。 为了方便理解，这里罗列一下碱法质粒抽提用到三种溶液：溶液I，50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 8.0；溶液II，0.2 N NaOH / 1% SDS；溶液III，3 M 醋酸钾 / 2 M 醋酸。让我们先来看看溶液I的作用。任何生物化学反应，首先要控制好溶液的pH，因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液，是再自然 ...

细菌基因组DNA的提取方法综述1 快速微量提取法A.取1.5ml菌体培养物于一灭菌Ep管中，12000rpm离心1min, 丢去上清夜，收集菌体。B.加入400ul裂解液（40mMTris-醋酸，20mM醋酸钠,1mMEDTA,1%SDS,pH7.8）混匀,置于37oC水浴1hr。C.然后加入200ul5mol/L的氯化钠溶液，混匀后于13000rpm离心15min。D.取上清液，用苯酚抽提2次，氯仿抽提1次。E.加两倍体积无水乙醇 ...

国庆七天乐，积分多多，奖励多多【公告/领奖】在本版参与过讨论并得分的战友请进为感谢各位战友长期以来对核酸版的支持，将给予额外的积分奖励，以表心意，祝大家国庆快乐。条件：在任意连续的30天、60天、90天...内在本版得分≧5、10、15...的战友请跟帖领取 “奖金”（加1、2、3、4、5分，最多5分），此外，如果国庆期间（2008.10.01开始-2008.10.08上午截止）在本版得分超过3分的（本次活动奖金除外），可以再跟帖加1分。如某 ...

1．目的学会PCR操作的基本技术。2．原理是将待扩增的DNA模板加热变性，与其两侧互补的寡聚核苷酸引物复性，然后经过耐热的DNA聚合酶延伸。再进入下一轮变性—复性—延伸的循环，n次循环后DNA可被扩增（1+X）n倍。其中

a．将0.1μl载体ＤＮＡ转移到无菌微量离心管中，加等摩尔量的外源ＤＮＡ。b．加水至7.5μl，于45℃加温５分钟以使重新退炎的粘端解链，将混合物冷却到０℃。c．加入：10xT4噬菌体ＤＮＡ连接酶缓冲液 １μlＴ４噬菌体ＮＤＡ连接酶 0.1Weiss单位５mmol/L ATP 1μl于16℃温育１－４小时10xT4噬菌体ＤＮＡ连接酶缓冲液200mmol/L同Tris.Cl(pH7.6)50mmol/K MgCl250mmol/L二硫苏糖醇5 ...