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从同学那里copy的，与大家共享：增加PCR的特异性：1. primers design这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些条件a. 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量b. GC% 40%~~~~60% c. 5'端和中间序列要多GC,以增加稳定性d. 避免3'端GC rich, 最后3个BASE不要有GC,或者最后5个有3个不要是GCe. 避免3'端的互 ...

做了快7年的分子克隆，从加样加不好，到现在轻松PCR，我想分子生物学这块还是有很多经验可以分享一下的。或许很多人会说分子克隆过程中出现问题最多的大概就是连接了，大家抱怨的也最多，我也陷入在个步骤上很久。经过长时间的摸索我在连接这个问题上有一些体会，我认为连接的问题多集中在连接的体系、DNA的用量、vector和insert的比例、连接酶等。但是我认为，连接不成功，问题并不一定出在连接这步上。有很多环节影响连接的 ...

问题 原因 解决办法DNA带模糊1) DNA降解避免核酸酶污染 2) 电泳缓冲液陈旧电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液 3) 所用电泳条件不合适 电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃；巨大DNA链电泳，温度应＜15℃；核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力 4) DNA上样量过多 减少凝胶中DNA上样量 5) DNA样含盐过高电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐 6) 有蛋白污染 电泳前酚抽提去除蛋白 7) DNA变性 电 ...

小硕，刚进实验室不久，自己想的课题，外加老婆的建议和帮助下，RT-PCR外加琼脂糖电泳顺利跑了下来，前两天标本的目的基因及内参都P出来了，内心小高兴一把。图未上，等拷回来补传上来。虽然还有小毛病，但是起码还是有点结果了。说说肺组织提RNA，是癌旁5CM以及肿瘤组织切下来放液氮中冷冻，后转-80度冷藏。标本是守在手术室里面，一切下来就取的，不存在RNA降解问题。前期的标本是直接放进2ml离心管里面的，后来在从2ml离心 ...

molecular biology of the gene第五版及英文原版配套光盘下载开放中！：http://www.helixnet.cn/bbs/thread-9081-1-1.html基因8完全中文PDF版（纳米盘连接）：http://www.helixnet.cn/bbs/thread-9071-1-1.html基因8英文原版http://www.helixnet.cn/bbs/thread-1327-1-2.html最新分子生物学实验技术( ...

专注于一站式科研实验服务外包的亿鸣复兴生物科技 ---承接科研课题实验设计，代做实验，数据分析 1. 建DGGE变性梯度凝胶电泳 细菌和真菌多样性分析 2. Western Blot项目 3. SNP项目 4. STR项目 5. Footprinting项目 6. 分子克隆 7. 菌种鉴定 8. 细/真菌等微生物多样性分析 9.QPCR项目 10. 重组慢病毒/腺病毒载体包装 11. 稳定细胞株筛选 12. 全基因合成 等分子生物学方面的实验把珍贵的创意留给自己，把繁琐的实验交给亿鸣复兴！ 周德清 北京亿鸣复兴生物科技有限公司 手机： 1 ...

因农民的儿子在【旧帖整理】-RNA抽提（第一个积极响应）中整理很全面，本贴也鉴签其法1, Protocol for Northern blottingNorthern Blot完全步骤NORTHERN BLOT PROTOCOL 试剂盒步骤2, 关于Northern的一些问题关于Northern Blotting的几个问题1关于Northern Blotting的几个问题2反NORTHERN杂交的问题northern blotting染色问题North ...

Introduction to Biotechnology and Genetic Engineering by A. J. Nair | Publisher: Infinity Science Press | English | ISBN: 1934015164 | 1000 pages | 2008 | PDF | 7 MbDescription: Biotechnology is a rapidly-developing 21st century technology and interdisciplinary science that has already ma ...

Optimizing RNA interference for application in mammalian cells来源：http://www.biochemj.org/bj/imps_x/pdf/BJ20040260.pdf是一篇34页的综述，自己感觉不错就推荐给大家上传不了，自己下吧AbstractOver the last two years the scientific community has rapidly embraced novel technologies th ...

转染求助http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/204073_1.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/thread/719072http://www.dxy.cn/bbs/thread/1153373http://www.dxy.cn/bbs/thread/501069http://www.dxy.cn/bbs/thread/1479097共转染问题http://www.dxy.cn/ ...

请大家讨论一下piRNA!奉献最新的一篇摘要：An epigenetic activation role of Piwi and a Piwi-associated piRNA in Drosophila melanogasterHang Yin1,2 & Haifan Lin1,2Department of Cell Biology, Duke University Medical School, Durham, North Carolina 27710, USAYale Stem Cell Center and Department ...

网上有两种pGEX-KG序列，请各位准备使用该质粒的朋友们注意啊！SEQ1Addgene_VectorDB_5100 pGEX-KG 5006 base pairsacgttatcgactgcacggtgcaccaatgcttctggcgtcaggcagccatcggaagctgtggtatggctgtgcaggtcgtaaatcactgcataattcgtgtcgctcaaggcgcactcccgttctggataa ...

This is latest verion of Current Protocols in Molecular Biology, which is best book on Protocols in Molecular Biology. The total page is more than 4000 pages with pdf files (not scan version). More introduction could be found in http://www.does.org/masterli/cpmb.html. Price in dollar is $775.00 ...

带绦虫.ppt Download url: http://www.fs2you.com/files/53c9ffdc-1c06-11dd-abc6-0014221f3995/黑热病.ppt Download url: http://www.fs2you.com/files/95b8bf4f-1c06-11dd-90b5-0014221f3995/棘球蚴绦虫.ppt Download url: http://www.fs2you.com/files/8c6d1ee6-1c ...

Southern Blot ProtocolsSouthern Blot Protocol Southern blot和Northern blot （交流）精彩southernblot FLASH Southern 杂交操作规范及污染防护 要Southern PPT吗？Southern Blot 问题 Southern 杂交的高手之见 Southern转膜的方法求助 用southern blot鉴定转染基因时遇到的一些问题 转基因检测老是失败，可能原因有那些呢？ 请教southern blot ...

NORTHERN BLOT OF RNA GELBuffers:20XSSPE (500 ml):3.6M NaCl : 105.2 g0.2M phosphate buffer pH 7.0: 100mL of 1M20mM EDTA: 20mL of 0.5MPhosphate buffer pH7.0 (500ml):NaH2PO4 (monobasic) 140 mL of 1MNa2H2PO4 (Dibasic) 360 mL of 1MpH to 7.0 after both are addedHybridization buffer =HB (100mls):5X SSPE: ...

Methylation-Specific PCRProtocol written by James HermaundefinedMethylation-specific PCR (MSP) is a simple rapid and inexpensive method to determine the methylation status of CpG islands. This approach allows the determination of methylation patterns from very small samples of DNA, i ...

本版面公共邮箱已经收录:ng_dxy@163.com_____________________________________________Vector NTI User's Manual前言（INTRODUCTION） ....................................................................3第一章 DISPLAY WINDOWS..............................................................4一. 顯示DNA 序列及圖形........................................................... ...

RNA分离与鉴定实验指南：RNA研究方法内容简介 　　《RNA分离与鉴定实验指南：RNA研究方法(原著第3版)》包括RNA与细胞生物学，真核基因的转录与组织，信使RNA，核糖核酸酶，RNA分离策略，从组织中提取RNA，多聚腺苷酸RNA的分离，RNA制备的质量控制，斑点印迹分析，电泳等共26章内容。目录 第1章　RNA与细胞生物学第2章　真核基因的转录与组织第3章　信使RNA第4章　核糖核酸酶第5章　RNA分离策略第6章　从组织中提取RNA第7章　多聚 ...

郑重声明：本《实用手册》的内容仅供参考！如果有自然人或单位进行转载本《实用手册》或者本《实用手册》的部分内容，都请注明来源“上海交通大学饮水思源”，但不得将本《实用手册》用于任何商业、营利或者其它违法用途，否则后果自负。　　　　　　§1. 1 投稿的方式　　 投稿主要有三种方式：纸质投稿、EMAIL投稿和网上投稿。纸质投稿一般需要将稿件打印几份，邮寄给期刊编辑部，有的期刊还要求需要论文的软盘或光盘；EMAIL投稿就是将论文以附件形式发给编辑；网上投稿 ...