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        【共享】 DNA电泳常见问题分析

        丁香园论坛

        4729

        DNA带模糊

        1) DNA降解 避免核酸酶污染

        2) 电泳缓冲液陈旧 电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液

        3) 所用电泳条件不合适 电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃;巨大DNA链电泳,温度应<15℃;核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力

        4) DNA上样量过多 减少凝胶中DNA上样量

        5) DNA样含盐过高 电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐

        6) 有蛋白污染 电泳前酚抽提去除蛋白

        7) DNA变性 电泳前勿加热,用20mM NaCl缓冲液稀释DNA

        不规则DNA带迁移

        1) 对于λ/Hind III片段cos位点复性 电泳前于65℃加热DNA 5分钟,然后在冰上冷却5分钟

        2) 电泳条件不合适 电泳电压不超过20V/cm;温度<30℃;经常更换电泳缓冲液

        3) DNA变性 以20mM NaCl Buffer稀释DNA,电泳前勿加热

        带弱或无DNA带

        1) DNA的上样量不够 增加DNA的上样量;聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高,上样量可适当降低

        2) DNA降解 避免DNA的核酸酶污染

        3) DNA走出凝胶 缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度

        4) 对于EB染色的DNA,所用光源不合适 应用短波长(254nm)的紫外光源

        DNA带缺失

        1) 小DNA带走出凝胶 缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度

        2) 分子大小相近的DNA带不易分辨 增加电泳时间,核准正确的凝胶浓度

        3) DNA 变性 电泳前请勿高温加热DNA链,以20mM NaCl Buffer稀释DNA

        4) DNA链巨大,常规凝胶电泳不合适 在脉冲凝胶电泳上分析

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