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最近要开展新的实验，对其中的Proteinase K 很感兴趣。对园子里的相关帖子进行里归纳整理，大家共同学习，进步。【求助】请问蛋白酶K买哪里的好？http://www.dxy.cn/bbs/thread/6533303请教：蛋白酶K配方http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/862901_1.html在线求助： 蛋白酶K 的配置http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive ...

进行中的核转录分析nuclear run on transcription assay在细胞和提取物中加入放射性核素标记的核苷三磷酸，使其掺入到正在转录的mRNA分子中。通过核酸分子杂交的方法，即可以同时鉴定出多种不同基因是否转录以及其转录的量。该方法作为一种比较可靠的测定转录活性的方法，排除了northern blot等方法中mRNA的半衰期对实验结果的影响，可同时分析多种基因的转录活性。The idea of this assay is to i ...

摘要：微小RNA基因和小的干涉RNA是小RNA的最主要组成部分，它们的相关性密切，既具有相似性，又具有差异性。它们功能的重要性提示我们基因组非蛋白编码区的序列蕴含着极为重要的信息。对小RNA的深入研究将使我们更深一步了解生命的奥秘。关键词：小RNA，siRNA，miRNA，非蛋白编码区引言长度大小为二十几个核苷酸的小片段RNA在近年得到了极大的关注，这些小RNA中有些可直接调控某些基因表达，进而调控细胞发育、决 ...

分光光度计分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸在波长 260 nm处有最高吸收峰。吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质，不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性。但紫外法不能区分DNA和RNA，只能用来 ...

最近总是看到一些战友发帖求助有关酶切方面的问题，因为它影响到了后续的重组质粒构建，而且似乎都无从说起。但我认为考虑全面了还是有章可循的。1 ：目的载体的控制无论它是空载体还是已经插入片段的载体，都必须保证：A ：质粒最好新鲜抽提，且抽提后电泳显示正常。质粒的长期保存形式建议以平板上的单克隆置于四度或者冻干状态于负20度，菌种尽可能以高浓度甘油状态置于负80度。B ：质粒的多克隆位点经测序后显示正确，尤其是表达载体，需要用 ...

刚开始做慢病毒。在此慢慢归纳总结。慢病毒载体（Lentiviral vector, LVs）是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统，它能高效的将目的基因（或RNAi）导入动物和人的原代细胞或细胞系。慢病毒载体基因组是正链RNA，其基因组进入细胞后，在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录mRNA，回到细胞浆中，表达目的蛋白；或产 ...

在设计siRNA时，人们总是关心如何地提高siRNA的效率，实际上我认为研究为什么siRNA没有效率也是一个很有意义的问题，它可以从反面给人们以启发。在思考这个问题的同时，我查到一篇文献，说是单链RNA也是可以激发RNAi途径的，这对我很新鲜，因为一直把dsRNA引发RNAi当作经典范式。文章认为，单链RNA和双链RNA都是只有一条链同RISC (rna induced silencing complex)相结合，所以其机理 ...

真假GelRed风波目前，美国Biotium中国区唯一总代理商接到一些客户投诉，声称从某些经销商那里买到了假货GelRed产品，实验效果很不理想。由此，总代理公司受美国总公司方面委托，一方面致电新老客户当心假货，建议从正规渠道购买原装产品；另一方面安排实验部门开展核酸凝胶电泳实验，帮助广大客户鉴别真假GelRed。目前市场上几种代表性的核酸染料：GelRed是一款集高灵敏度、低毒性和光稳定性于一体的核酸凝胶染 ...

本月旧帖整理活动专题: T-A克隆技术大家可以在以下基础上进行整理或对具体问题进行讨论(1)如何筛选合适的宿主菌株◇ 所选的宿主菌株应对所用质粒的抗生素抗性基因敏感。◇ 如进行蓝/白斑筛选，宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽编码区应在染色体或附加体上缺失掉（lacZΔΜ15）。TOP10和DH5α都能用于蓝/白斑筛选。◇ 要表达重组蛋白，可使用带有可诱导的T7 RNA聚合酶基因的菌株，如BL21（DE3）。◇ 使用pGEM载体克隆大片段时（7-8 kb）， ...

【CRISPR/Cas9系统的发现历史和应用-@华夏凯奇】-兼谈八卦。水平有限，不准确和班门弄斧之处，还望大家斧正。一、CRISPR系统的发现-从细菌的获得性免疫说起CRISPR系统实际是细菌的一种获得性免疫系统。细菌被phage侵染之后，可以获得phage的DNA片段整合进基因组形成记忆，当再次遭到入侵时，从对phage形成免疫。1） 早在1987年，日本人在大肠杆菌中发现有串联间隔重复序列。但一直不清楚功能。后来的研 ...

对于在本版出现的零回复求助帖，享有10天的置顶求助。站友回复这类帖子，加分从优！注意：被斑竹标为“★★★不规范发帖，请修改！！★★★★ ”的帖子，不在这个置顶处理之内。请站友们在原贴下回复，并在这个帖子下回帖给出链接，以便版主及时、区别加分。多谢合作！截至到2005-05-11【求助】合成c-myc、c-myb、pcna的as-odn求助 【求助】有关非变性聚丙烯凝胶回收ＤＮＡ！ 【求助】诸位战友,帮忙设计个"功能研究"的实验吧!谢谢 【求助】请问有谁 ...

大家都对单核苷酸多态性（SNP）不陌生了，学理学生物的、学医学的、学农学的对此都算是有了一定的了解，这玩意在我的概念中就是检测碱基的变化状况而已（似乎太白话了），虽然只是检测，但是检测方法却是多种多样，如何选择合适的检测方法对整个实验来说确实是个重要的问题，选择无外乎三样：时间、钱、文章档次。目前来说，SNP检测应用比较多而且真正实用的，用来发文章的有测序、限制性片段长度多态性（RFLP）检测、质谱检测、Taqman检测 ...

核糖核酸酶保护实验(Ribonuclease protection assay，RPA)是近十年发展起来的一种全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是将标记的特异RNA探针(32P或生物素)与待测的RNA样品液相杂交，标记的特异RNA探针按碱基互补的原则与目的基因特异性结合，形成双链RNA；未结合的单链RNA经RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸，而待测目的基因与特异RNA探针结合后形成双链RNA，免受RNA ...

好久没有来发帖了。今日偶然看到一个小tips。帖出来和菜鸟分享。1．溶液I—溶菌液：溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基） ...

质粒提取的原理因为觉得对新人很重要，所以再转贴一次。碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。可是我收研究生十几年了，几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实验操作步骤，而没有对原理进行详细的论述。这是导致我的学生误入歧途的主要原因。后来我发现其实是整个中国的相关领域的研究生水平都差不多 ...

2013年诺贝尔生理或医学奖落花落“基础研究”，无疑给了大家一剂兴奋：在最基础的研究上，坚持下去；在小实验室里，自由探索。丁香通试用中心为助力科研，特推出申请试用装，送丁当的活动。活动时间：2013.10.9-10.30活动形式：跟帖附上申请的试用装，每申请一件，送2个丁当。格式：我申请：动物组织总RNA提取试剂盒重点推荐：5款PCR、RNA提取试剂盒产品特点简介：1. 动物组织总RNA提取试剂盒：去除DNA污染；无需担心RNA ...

欢迎您到核酸基因技术讨论版！如果您是新手，在发贴前先明确目的！丁香园的原则是互相帮助，共同进取。如果觉得可以帮助他人，回帖即可。====1.我如何在这个版块得到我需要的信息？===如果你要在本版获取资料，请先检索本版，以节约您的时间和资源，不要盲目发帖，忽视【搜索本版】以及【精华区】的功能，另外请注意旧帖整理和FTP资源为你提供了便利，相信可以节省你的宝贵时间，上面可能有您急需的资料。如果你想了解其他地方你可以了解得更详细。== ...

SAGE 技术在理论上来说可以检测到一个细胞内所有转录体的表达，而且可以给每一个转录体定量，不管它是低丰度还是高丰度。SAGE和基因芯片技术一样，具有高通量、平行性检测细胞内基因表达谱的特点。但SAGE可在未知任何基因或EST序列的情况下对靶细胞进行研究，这一点是基因芯片技术所不具备的。目前关于SAGE技术的文章在国外发表很多，但感觉国内搞SAGE研究的不是很多。本版特地在继10月份推出基因芯片技术大讨论之后， ...

以Trizol说明书介绍的方法，将RNA和DNA的提取方法进行组合，同时提取RNA和DNA，RNA的纯度较高，可过1.9-2.0，而DNA的OD比值仅为1左右，请问各位有什么建议吗？以下是我的实验步骤，请各位指教。1.将培养板置于冰上，吸去培养液2.直接加入TRIZOL试剂(1ml/10cm2)，反复吹打3.将细胞裂解液转移到新的1.5ml Ep管中，室温放置5min4.加氯仿(0.2ml/1mlTrizol)，剧烈混匀15秒5 ...

丁香园专访：《生物实验室安全故事手记》主编孟博《生物实验室安全故事手记》主编孟博主编简介：孟博，华东师范大学脑功能基因组学研究所工作。丁香园荣誉版主Biowind。1978年12月出生，汉族，工程师，在读博士。教育经历：1996、9—2000、6：哈尔滨工业大学生命科学与工程专业，获学士学位。学位论文：以反义RNA技术研究鸡GDF-8基因功能2000、9—2002、6：哈尔滨工业大学生化与分子生物学专业，获硕士学位。学位论文 ...