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首先要感谢DXY上的neohjh等几位热心的战友，没有他们的经验我不会这么快做出该实验引物设计与说明书中不一致，我是参考“An efficient one-step site-directed and site-saturation mutagenesis protocol”这篇文献设计的。Site-directed Mutagenesis Method1. Primer designThe primer design was according to “QuikChang ...

RNAi的实验原理与方法近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。一、RNAi的分子机制通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effe ...

miRNA和siRNA的基本介绍及区别1998年，Andrew Fire和Craig Mello提出了一项新技术：通过dsRNA诱导特异基因的沉默，即所谓RNAi。2000年，Amy Pasquinelli等将lin-4和let-7作小时序RNAs(stRNAs，mall temporal RNAs)。RNA干涉（RNAi）在实验室中是一种强大的实验工具，利用具有同源性的双链RNA（dsRNA）诱导序列特异的目标基因的沉寂，迅速阻断 ...

为了响应ftp资源讨论版不再处理站友的上传申请而由各专业讨论版的版主负责的举措，现做出以下说明：1.有关核酸基因技术的资源希望通过ftp共享，请在本版发新帖申请，一般有五人以上需要后即发给上传密码。是否加分鼓励，由本版的版主根据情况决定。对于不易界定专业的资源，以及部分比较难得的精品，仍然在ftp资源讨论版发帖申请。2.老赵一号ftp上实验技术专业组暂由lvzanlv协助版主管理。考虑到ftp的空间有限，所上传 ...

Let-7与肿瘤的关系，一个经典实例的完整再现，一次实战演习microRNAs完整解决方案暨国内首次生物美学技术培训班广州莱德尔生物科技有限公司与您相约2009年3月9日-2009年3月18日不容错过的理由：专业的品质，丰富的经验，莱德尔带您步入小分子的殿堂，与您分享microRNA研究最完整的解决方案。群雄逐鹿的战场上一块仅存的处女地，microRNA研究最后一次不容错过的良机：microRNA启动子的表 ...

如有遗漏之处，请跟进，谢谢！1　ProtocalRNA-isolation protocalhttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=686034&sty=3&keywords=RNA%CC%E1%C8%A1抽提经验谈http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=596203&sty=3&keywords=%B3%E9%CC%E1%BA%CB%CB%E1RNA提取（网友总结 ...

几乎所有的siRNA都不可避免的产生off-target效应，好一点的也许只会off-target几个基因，差一点的甚至可以off-target几十个基因。关于off-target的机制，以前认为是siRNA的sense strand对于其他基因mRNA的干扰造成，对于这个效应，可以利用最新的化学修饰方法削弱sense strand与RISC的结合，同时增强anti-sense与RISC的结合力，按照这个原理虽然也可 ...

请问大家，用地高辛标记和用放射性标记做实验，各有什么优缺点？实验过程和实验试剂有什么特殊的要求，拜**答案。。。。做过的请介绍介绍失败的和成功的经验，大家分享，谢谢附文章一篇:原位杂交实验原理与方法一、目的本实验的目的是学会原位杂交的使用方法。了解各种原位杂交的基本原理和优缺点。二、原理原位杂交组化（简称原位杂交，in situ hybridization histochemistry；ISHH）属于分子杂交的一种，是一种应用标 ...

基因工程所用的克隆载体常称之为分子克隆载体（molecular cloning vector），它是一类可供外源DNA插入并携带重组DNA分子进入适当宿主细胞的DNA分子。如果打一个十分浅显的比喻，分子克隆载体犹如航天技术中的运载火箭，外源DNA分子就如火箭上搭载的卫星，宿主细胞则如外部深邃的空间。分子克隆载体的主要功能就是将外源基因携带入宿主细胞，并在宿主细胞中进行DNA扩增和使外源基因得以高效表达。在这一点上又 ...

最近要开展新的实验，对其中的Proteinase K 很感兴趣。对园子里的相关帖子进行里归纳整理，大家共同学习，进步。【求助】请问蛋白酶K买哪里的好？http://www.dxy.cn/bbs/thread/6533303请教：蛋白酶K配方http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/862901_1.html在线求助： 蛋白酶K 的配置http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive ...

进行中的核转录分析nuclear run on transcription assay在细胞和提取物中加入放射性核素标记的核苷三磷酸，使其掺入到正在转录的mRNA分子中。通过核酸分子杂交的方法，即可以同时鉴定出多种不同基因是否转录以及其转录的量。该方法作为一种比较可靠的测定转录活性的方法，排除了northern blot等方法中mRNA的半衰期对实验结果的影响，可同时分析多种基因的转录活性。The idea of this assay is to i ...

摘要：微小RNA基因和小的干涉RNA是小RNA的最主要组成部分，它们的相关性密切，既具有相似性，又具有差异性。它们功能的重要性提示我们基因组非蛋白编码区的序列蕴含着极为重要的信息。对小RNA的深入研究将使我们更深一步了解生命的奥秘。关键词：小RNA，siRNA，miRNA，非蛋白编码区引言长度大小为二十几个核苷酸的小片段RNA在近年得到了极大的关注，这些小RNA中有些可直接调控某些基因表达，进而调控细胞发育、决 ...

分光光度计分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸在波长 260 nm处有最高吸收峰。吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质，不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性。但紫外法不能区分DNA和RNA，只能用来 ...

最近总是看到一些战友发帖求助有关酶切方面的问题，因为它影响到了后续的重组质粒构建，而且似乎都无从说起。但我认为考虑全面了还是有章可循的。1 ：目的载体的控制无论它是空载体还是已经插入片段的载体，都必须保证：A ：质粒最好新鲜抽提，且抽提后电泳显示正常。质粒的长期保存形式建议以平板上的单克隆置于四度或者冻干状态于负20度，菌种尽可能以高浓度甘油状态置于负80度。B ：质粒的多克隆位点经测序后显示正确，尤其是表达载体，需要用 ...

刚开始做慢病毒。在此慢慢归纳总结。慢病毒载体（Lentiviral vector, LVs）是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统，它能高效的将目的基因（或RNAi）导入动物和人的原代细胞或细胞系。慢病毒载体基因组是正链RNA，其基因组进入细胞后，在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录mRNA，回到细胞浆中，表达目的蛋白；或产 ...

在设计siRNA时，人们总是关心如何地提高siRNA的效率，实际上我认为研究为什么siRNA没有效率也是一个很有意义的问题，它可以从反面给人们以启发。在思考这个问题的同时，我查到一篇文献，说是单链RNA也是可以激发RNAi途径的，这对我很新鲜，因为一直把dsRNA引发RNAi当作经典范式。文章认为，单链RNA和双链RNA都是只有一条链同RISC (rna induced silencing complex)相结合，所以其机理 ...

真假GelRed风波目前，美国Biotium中国区唯一总代理商接到一些客户投诉，声称从某些经销商那里买到了假货GelRed产品，实验效果很不理想。由此，总代理公司受美国总公司方面委托，一方面致电新老客户当心假货，建议从正规渠道购买原装产品；另一方面安排实验部门开展核酸凝胶电泳实验，帮助广大客户鉴别真假GelRed。目前市场上几种代表性的核酸染料：GelRed是一款集高灵敏度、低毒性和光稳定性于一体的核酸凝胶染 ...

本月旧帖整理活动专题: T-A克隆技术大家可以在以下基础上进行整理或对具体问题进行讨论(1)如何筛选合适的宿主菌株◇ 所选的宿主菌株应对所用质粒的抗生素抗性基因敏感。◇ 如进行蓝/白斑筛选，宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽编码区应在染色体或附加体上缺失掉（lacZΔΜ15）。TOP10和DH5α都能用于蓝/白斑筛选。◇ 要表达重组蛋白，可使用带有可诱导的T7 RNA聚合酶基因的菌株，如BL21（DE3）。◇ 使用pGEM载体克隆大片段时（7-8 kb）， ...

【CRISPR/Cas9系统的发现历史和应用-@华夏凯奇】-兼谈八卦。水平有限，不准确和班门弄斧之处，还望大家斧正。一、CRISPR系统的发现-从细菌的获得性免疫说起CRISPR系统实际是细菌的一种获得性免疫系统。细菌被phage侵染之后，可以获得phage的DNA片段整合进基因组形成记忆，当再次遭到入侵时，从对phage形成免疫。1） 早在1987年，日本人在大肠杆菌中发现有串联间隔重复序列。但一直不清楚功能。后来的研 ...

对于在本版出现的零回复求助帖，享有10天的置顶求助。站友回复这类帖子，加分从优！注意：被斑竹标为“★★★不规范发帖，请修改！！★★★★ ”的帖子，不在这个置顶处理之内。请站友们在原贴下回复，并在这个帖子下回帖给出链接，以便版主及时、区别加分。多谢合作！截至到2005-05-11【求助】合成c-myc、c-myb、pcna的as-odn求助 【求助】有关非变性聚丙烯凝胶回收ＤＮＡ！ 【求助】诸位战友,帮忙设计个"功能研究"的实验吧!谢谢 【求助】请问有谁 ...