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2011年上海药物所与芝加哥大学Ben May癌症研究所赵英明教授合作，组建化学蛋白质组学研究中心，开展高效、灵敏、可靠的蛋白修饰调控酶靶标发现及生物标记物鉴定新技术的研究工作，探索更为快速和有效的新药研究途径。中心成立后，赵英明教授、谭敏佳博士等研究人员即开展相关研究工作，并取得重要进展，他们与上海药物所叶阳研究员及相关国际团队通力合作，发表在国际顶尖杂志《细胞》上关于组蛋白翻译后修饰系统研究的论文，近日被《细胞》 ...

1材料和试剂:1.1.1包被液:碳酸盐缓冲液，PH9.61.1. 2洗涤液:PBS-Tween20,PH7.41.1.3稀释液:0.5%BSA-PBS-Tween20,PH7.41.1.4底物缓冲液:柠檬酸-磷酸盐缓冲液,PH5.01.1.5底物液:邻苯二胺8mg溶于底物缓冲液20ml,30%H2O230ul1.1.6终止液:1mol/LH2SO41.1.7兔抗大肠杆菌抗体1.1.8 HRP酶联兔抗大肠杆菌抗体1.1.9菌体蛋白标准:中国药品生物 ...

比色杯比色杯也叫样品池，吸收器或比色皿，用来盛溶液，各个杯子壁厚度等规格应尽可能完全相等，否则将产生测定误差。玻璃比色杯只适用于可见光区，在紫外区测定时要用石英比色杯。不能用手指拿比色杯的光学面，用后要及时洗涤，可用温水或稀盐酸，乙醇以至铬酸洗液（浓酸中浸泡不要超过15分钟），表面只能用柔软的绒布或拭镜头纸擦净。比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根据不同的测量体积，有比色杯和毛细比色杯等。一般测试核酸 ...

中肽生化技术系列 Stapled Peptides 杭州中肽有限公司α-螺旋是蛋白二级结构最常见的一种，将其用于药物研发受到了大量关注。多肽的不稳定构象导致易被酶水解以及生物利用率低，这些都可以通过α-螺旋结构构象的稳定化来解决。Hydrocarbonstapled peptides是在特定位点引入化学交联的一种全烃化装订，将迷你蛋白锁定在他们的生物活性的α-螺旋构象中。多肽装订的理念是用于克服两大类治疗试剂的靶向细胞内蛋白相互作用的局限性：小分子和蛋白生物制剂。作为一类新兴的下一代药物，Stapled Peptide应该具备易于合成和容易进入细胞的能力，以及能够多靶标识别的生物活性。有两种构象化策略用于引入和稳定α-螺旋结构，即α双取代（甲基化螺旋骨架）和巨环桥形成（约束构象）。在多肽内装订从而使两个合适的空隔合并：α-甲基化，α-alkenylglycine残基，有确定的立体化学构象和烯烃链长度，然后在树脂上进行钌介导的烯烃复分解反应，从树脂上切割并去保护后便可产生Stapled Peptide。下图显示了在多肽中产生稳定α-螺旋的三种不同的全烃装订类型。α-甲基化和α-alke

FDA、SFDA对重组蛋白、vero细胞疫苗等生物制品的DNA残留均有严格要求，近年来包括大牌进口产品在内的狂犬疫苗DNA残留超标问题，引起了社会和业界的广泛关注。为什么一个看似简单的问题，却给众多专业人员带来如此大的困扰？一方面是由于DNA超强的化学稳定性，另一方面是由于DNA其带有大量的电荷易与其他生物大分子结合从而产生聚集（吸附）、包裹作用而难以完全除去。DNA的去除方法主要有层析、膜过滤、离心、沉淀、酶解等方法。这里对工业上应该最广泛和有效的离子交换层析、鱼精蛋白沉淀、酶解三类方法进行比较。1. 离子交换层析DNA带有大量的负电荷，可以被阴离子交换剂吸附而除去（或用阳离子交换剂负吸附）。离子交换层析在生物制品的生产中广泛使用，负载量大、成本低廉，尤其工艺中本身具有这些步骤的情况，不需单独增加去除DNA的步骤，通过控制吸附、洗脱条件，就能取得良好的去除DNA的效果。其缺点是在DNA残留要求较高的情况下难以达到。原因在于，当目标产物与DNA带有同种电荷时，分离较为困难；而当目标产物与DNA带相反电荷时，两者会发生聚集和包裹现象，影响去除效果。2. 鱼精蛋白沉淀鱼

关键词：标准物质 食品成分检测 化学试剂 分析试剂 一、双指示剂甲醛滴定法 1．原理 氨基酸具有酸性的一COOH基和碱性的一NH2基。它们相互作用而使氨基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液 时一NH。基与甲醛结合，从而使其碱性消失。这样就可以用强碱标准溶液来滴定一COOH基，并用间接的方法测定氨基酸总量。 2。试剂 ①40％中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示剂用氢氧化钠40％甲醛中和至淡蓝色。 ②0．1％百里酚酞乙醇溶液。 ③0．1％中性红50％乙醇溶液。 ④O．1mol·L-1氢氧化钠标准溶液，标定后使用。 3．操作步骤 移取含氨基酸约20～30 mg的样品溶液2份，分别置于250 mL锥形瓶中，各加50 mL蒸馏水，其中1份加人3滴中性红指示剂，用O．1mol·L-1氢氧化钠标准溶液滴定至由红变为琥珀色为终点；另1份加入3滴百里酚酞指示剂及中性甲醛20 mL，摇匀，静置1 min，用O．1mol·L-1，氢氧化钠标准溶液滴定至淡蓝色为终点。分别记录两次所消耗的碱液体积。 4．

一：公司介绍 武汉明皓生物科技股份有限公司（http://www.moonbiochem.com）坐落于武汉东湖高新技术区光谷生物城, 是由一批在生命科学领域具有相当丰富经验的归国博士及经验丰富的专家共同创办的专业的生物公司。武汉明皓生物始终以“一切以客户为本”为理念，致力于为从事生命科学研究的科研人员提供高质量的化合物，多肽，蛋白及抗体产品以及高效优质的生物技术外包服务。 武汉明皓生物科技股份有限公司重在以高品质高质量为基础，以高满意度的客户服务为立命之本。我们坚信我们良好的发展前景和不断完善的经营模式，会为更多的客户提供更完美的,更贴心的服务。二：我们的专长（1）普通线性肽，链长至120个氨基酸，毫克至克级，纯度可达99%（2）简单修饰肽：免费提供N端乙酰化，末端酰胺化（3）C端：酰胺化（NH2），生物素标记 (用赖氨酸侧链连接)，PEG2(用赖氨酸侧链连接)， C-FITC(用赖氨酸侧链连接)，C-AMC N端：乙酰化（AC），生物素标记（Biotin），脂肪酸修饰(Pal, Myr)，罗丹明标记， N-FITC，N-5

［转载]个人整理 Western Blot（步骤简略，但注意事项、经验总结、基本原理很全面）螺旋网1、 丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。2、 十二烷基硫酸钠SDS溶液:10%(w/v)0.1gSDS，1mlH2O去离子水配制，室温保存。3、 分离胶缓冲液:1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积。过滤后4°C保存。4、 浓缩胶缓冲液:0.5mmol/LTris-HCL(pH6.8):6.05gTris溶于40mlH2O中，用约48ml 1mol/L HCL调至pH6.8加水稀释到100ml终体积。过滤后4°C保存。这两种缓冲液必须使用Tris碱制备，再用

下面是一些分子生物学基础知识，有助于某些实验的理解。E. coli is a Gram-negative, rod-shaped bacterium about 2.5 micrometers long that contains flagella and a genome of 4,639,221 base pairs encoding at least 4000 genes。 The K12 strain was first isolated in 1921 from the stool of a malaria patient and it has been maintained ...

1.在设计RNAi实验时，可以先在以下网站进行目标序列的筛选：http://www.ambion.com/techlib/misc/siRNA_finder.htmlhttp://katahdin.cshl.org:9331/RNAi/http://www.ic.sunysb.edu/Stu/shilin/rnai.html2.RNAi目标序列的选取原则：（1）siRNAs with lower G/C content (35-55%) are more active ...

最近由于实验需要, 需要查阅载体图谱, 到园子里搜罗一番, 发现虽然有人问载体图谱阅读的问题, 也有前辈回答, 但都不详细, 借自己也在琢磨这个问题的机会, 将我学到的东西整理一下, 于大家分享, 也算我对 DXY 的一点小小贡献!载体主要有病毒和非病毒两大类, 其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素1、复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。2、抗生素抗性基因 可以便于加 ...

本书有29章，全是英文，经翻译成中文，首次在此公开，就是说还未出过正式的中文版，请珍惜。 现将第1章放上，因内容太多，打成文本将超过千页，将会陆续放上，当然，首先是大家都喜欢！第1章 基因就是DNA早在一个世纪以前，孟德尔(Mendel)定义了基因的基本属性。在他的两个定律中将基因归纳为一种“特殊因子”。在它从亲代传给子代的过程中是不改变的。同一个基因可能以不同的形式存在（突变）。在二倍体的植物中，含有两个染色体组。每个子代从两个母代中各遗传到一组染色体。这同基因的行为相同。相当于发现染色体是基因的载体。下一步是证明每条染色体是由线性排列的基因组成。孟德尔定律预测不同染色体上的基因将各自独立分开。然而在同一染色体上的基因表现为连锁遗传。基础观察显示不同染色体上的基因是以随机重组的方式代代相传，然而连锁性基因重组的几率下降，就是说它们有在一起不分离的趋势。通过基因分析可以绘制出基因连锁图的结构，包含了1条染色体上携带的所有基因。连锁群的基因图与自然存在的染色体相一致。在二十世纪前五十年建立高等生物的遗传图。基因被组合成像一个带子上的珠子。它们出现在固定的位置上，基因的重组包括同

概述microRNA(miRNA)是一类由大约22 个核苷酸组成的非编码小分子RNA，广泛存在于真核生物中。miRNA 在个体发育的不同时期及不同组织中有不同的表达模式，都表明了其在发育和分化中起有重大的调控作用。迄今为此，对miRNA 的检测方法主要有Northern Blot 等基于分子杂交的方法，这些方法敏感度低、耗时长、RNA 的用量较大。miRNA Q-PCR Detection Kit 采用了国际上公认的核酸检测标准技术――Real-Ti ...

近期发现连接转化的问题特别多,希望各位战友能把自己的问题和意见解答都交流出来,只要有建设性的不管问题还是解答,打分从宽,以促进各位战友共同进步,不至于在这些常规问题上浪费时间和精力.同时也希望发问的战友尽量在后面跟帖而不是另开帖,也希望各位战友能把自己以前的有建设性的问题及解答粘贴过来,互相交流.近期的链接如下(1.10-1.5.可以直接在链接下面讨论):【求助】急救!关于重组质粒构建的问题.http://www.dxy ...

克隆心经——一套帮助新手快速作出克隆的Protocol本方法的核心部分是医科院基础所的生化脂蛋白组的吴刚老师所创，我在其基础上进行了一些改动，主要是DNA回收上采取了更简单的方法。（本方法最适用于双酶切制作片断并进行克隆的情况。对于分步酶切制作片断，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。）一、片断平移的克隆（也适用于多片断连接）简介：将用作载体的质粒A（制作大片断）酶切3μL ，要切出小片断的质粒B酶切7μL ...

RNA 真不好提取,这是我在网上看到的,和大家共享!!对大部分实验人员来说，RNA 抽提比基因组 DNA 抽提要困难得多。事实上，现有的 RNA 抽提方法/试剂，如果用于从培养细胞中抽提 RNA，比抽提基因组 DNA 更方便，成功率也更高。那为什么同样的方法用于组织 RNA 的抽提，总会碰到问题呢？组织 RNA 抽提失败的两大现象是： RNA 降解和组织内杂质的残留。关于降解问题，首先看一下为什么从培养细胞中抽提 RNA 不容易降解。现有的 RNA 抽提试剂，都含有快速抑制 Rnase 的成分。在培 ...

（前面的几个帖子太长了，看一遍所花时间长到逆历史潮流，只能新开一帖，希望快餐一点。本帖不回答求助，先致歉。）1：苯酚保存条件的实验苯酚的保存条件，正统的说法：避光、4C、上覆一层液体、密闭，可保存 1 个月。下面是我的一个实验：3 月 10 日，取 Tris 饱和苯酚 (加入 beta-Mercaptoethanol 抗氧化) 到 6 个透明 1.5ml 离心管中，其中 3 管再覆盖少量液体。取一管未加液体的和一管加液体的放入 4C 冰箱，其余 4 管置于室温。室温的 4 管有两管 (加液和不加液各一管) 用刀子将离心 ...

因为看到园子中使用NEB T4 DNA连接酶的老师和同学比较多，也经常就一些连接的问题进行讨论和沟通。今天发一个关于NEB T4 DNA连接酶的一个专题，就使用过程中一些常见问题跟大家讨论一下。也希望各位老师同学能够踊跃参与，如果大家有什么疑问或者好的建议欢迎。一、关于NEB M0202 T4 DNA 连接酶的使用方法和常见问题及解答1、产品特性和使用方法产品说明：该酶催化契合的双链DNA或RNA的5'-磷酸末端和3'-羟基末端形成磷酸二酯键 ...

第一章 质粒DNA的分离、纯化和鉴定第一节 概 述　　把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。　　质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达 ...

SNP（single nucleotide polymorphism），单核苷酸多态性。指在基因组的DNA链上，由于单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。SNP数量很多，既可能发生在编码序列上，也可能发生在非编码序列上。发生在编码序列内的SNP，既有不改变氨基酸的同义突变，也有改变了氨基酸的非同义突变。那种改变了氨基酸的非同义SNP就改变了生物性状。由于SNP能稳定的遗传下去，所以在同一个群体当中，那些具有相同SN ...