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您有巧妙的思路，意义重大的课题，但是您是否因缺少相关实验技术支撑而感到茫然呢？或者您只是刚刚入行，根本不知道该如何进行科研，开展课题研究。为了解决这些问题，南方医科大学广东省功能蛋白质组学重点实验室和中医药学院实验室近期联合推出《实用分子生物学实验技术》学习班，为您带来系统的分子生物学基本技术和一些前沿技术及其理论的学习和实践机会，为您搭建走向创新的桥梁。届时，“973”计划项目首席科学家将与您面对面，开拓科研视 ...

您有巧妙的思路，意义重大的课题，但是您是否因缺少相关实验技术支撑而感到茫然呢？或者您只是刚刚入行，根本不知道该如何进行科研，开展课题研究。为了解决这些问题，南方医科大学广东省功能蛋白质组学重点实验室和中医药学院实验室近期联合推出《实用分子生物学实验技术》学习班，为您带来系统的分子生物学基本技术和一些前沿技术及其理论的学习和实践机会，为您搭建走向创新的桥梁。届时，“973”计划项目首席科学家将与您面对面，开拓科研视 ...

相信如何提高目的重组蛋白的诱导表达量是很多同学在研究中都会遇到的问题。记得小编在读书的时候就经常在研究这个问题，泡了无数论坛，看了无数帖子，尝试过IPTG的诱导浓度、培养基成分、诱导温度、诱导时间，甚至让别的公司帮忙做密码子优化（将目的片段通过全基因合成的方式合成出来）。总的来说，提高IPTG浓度是可以提高目的蛋白的诱导表达量的，但一般也就用到1mM的浓度，再高对细胞有毒性； 培养基营养越丰富，表达量越高，所以如果追 ...

要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟，作为一种有活性的生物大分子，抗体和抗原的反应毕竟不象1+1 ...

“蛋白质双向电泳技术应用高级研讨班”通知随着分子生物学的发展和蛋白质组学研究的开展和深入，蛋白质这个生命活动的主要承担载体的表达和功能研究已成为21世纪生命科学的重要研究课题。蛋白质是基因功能的实施的载体，对蛋白质结构、定位和蛋白质-蛋白质相互作用的研究将为阐明生命现象的本质提供直接的基础。要对蛋白质进行上述研究，首先需要将蛋白质从其复杂的体系中分离纯化出来。在众多蛋白质研究的技术中，双向电泳技术为科学家了 ...

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Nondenature PAGE）主要是根据蛋白质分子的电荷性质、电荷多少和分子的大小来进行蛋白质分离。虽然它的分辨率不高，但它不像变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）那样使蛋白质变性，电泳后的蛋白质保持其生物活性，可以进行进一步的蛋白质分子结构与功能的测定.1 材料1.1设备 低温台式离心机（德国Beckman公司），高速台式离心机 TGL-16C（上海安亭科学仪器厂），DYY-10型三恒电泳仪（北 ...

我们读研究生也许为了找个好工作，也许是为了出国。时常大家都在关注高校，中科院，但我所了解的NIBS更接近美国。NIBS：北京生命科学研究所一个中国政府旨在挑战西方生命科学权威独霸天下而做出的重大举措。一个盛产SCIENCE、NATURE、CELL、PNAS等世界顶极杂志论文的地方，研究生的学术环境和生活待遇都非常好，从这里走向Harvard, Princeton , MIT, Stanford, Pennsylvania,Colum ...

最近很郁闷,非常郁闷!!!明天就要去考博了,现在实验出现这种奇怪的事,郁闷啊!大家别急,我详细的说说我遇到的问题.一直在表达纯化蛋白.一共两种,都是一起做的.其中有一个没什么问题,顺顺利利.没什么好说的.现在说说另一个.这个问题蛋白呢,基因是我们实验室自己克隆的,genebank登录号AF188239.338个氨基酸.预测有两个跨膜域.其中这个蛋白有19个半胱氨酸残基!!!!!!(这是我后面发现有问题,自己一个一个去对发现有 ...

首先申明：这是一个非常成功的工业化规模从包含体生产集落刺激因子的工艺，价值连城。比现在的，比如张江的XX公司的柱上复性，以及西北工大的耿老师的色谱饼工艺好得多，方便得多，产率高得多。希望有有心人关注，不为啥，为中国的患者，成本这么低，却卖。。。。，二为给各位提供包含体复性研究的参考。。。 闲话不说。集落刺激因子的基因构建、表达是非常容易的，在上海花个万把快钱就可以搞定。原核做包含体表达，各种表达载体都行，小菜一碟。最大的问题是 ...

应用SDS-PAGE显示小分子多肽SDS-PAGE在分离、鉴定和纯化蛋白质方面有着广泛应用，其有效分离范围取决于聚丙烯酰胺的浓度和交联度，其孔径随着双丙烯酰胺与丙烯酰胺比率的增加而减小，比率接近于1：20时，孔径达到最小值。分子量低于10kD的小分子肽类，即使用较高浓度的聚丙烯酰胺凝胶的SDS-PAGE也不能完全分离，或是显不出色，或是显带较弱，带型弥散。且分子量越小，效果也越差。为了能在SDS-PAGE上显示测定 ...

生物芯片技术的应用与展望自1998年美国宣布正式启动基因芯片计划以来,生物芯片技术的理论研究与实际应用在国内外迅速发展,已经成为人们高效、准确、大规模地获取相关信息的重要手段之一,生物芯片技术是生命科学研究中继基因克隆技术、基因自动测序技术、PCR技术后的又一次革命性技术突破。生物芯片技术通过微加工和微电子技术在固体芯片表面构建微型生物化学分析系统,即通过缩微技术将生命科学研究中许多不连续的分析过程集成于 ...

目的将复杂的细胞分子混合物加入有机溶媒，除去蛋白质及其它成分，就可以纯化DNA。一般常用酚及氯仿(phenol/chloroform)可使蛋白质变性(denaturaion)的特性来进行萃取的步骤，DNA和RNA不溶于有机溶媒中，而溶于水层。另外，分子选殖(molecular cloning)常利用洋菜胶(agarose)来分离不同大小的DNA片段或用以纯化DNA。DNA经限制酶反应、自胶体中溶离或任何酵素反应后，常常 ...

一、样品提取：三氯醋酸—丙酮沉淀法（1） 在液氮中研磨叶片（2） 加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1 小时）弃上清。（3） 加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。（4） 上样前加入裂解液，室温放置30 分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。（5） 用Br ...

要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟，作为一种有活性的生物大分子，抗体和抗原的反应毕竟不象1+1 ...

原理和应用：Ettan DIGE荧光差异蛋白表达分析系统在传统双向电泳技术的基础上，结合了多重荧光分析的方法，在同一块胶上共同分离多个分别由不同荧光标记的样品，并第一次引入了内标的概念，极大地提高了结果的准确性，可靠性和重复性。在DIGE技术中，每个蛋白点都有它自己的内标，并且软件全自动根据每个蛋白点的内标对其表达量进行校准，保证所检测到的蛋白丰度变化是真实的。DIGE技术可检测到样品间小于10%的蛋白表达差异， ...

蛋白表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。越来越多的基因被发现，其中多数基因功能不明，利用蛋白表达系统表达目的基因是研究基因功能及其相互作用的重要手段。常见的蛋白表达系统包括大肠杆菌/原核蛋白表达系统、酵母/真核蛋白表达系统、哺乳动物细胞蛋白表达系统、昆虫细胞蛋白表达系统、植物蛋白表达系统。在此针对一些常见的问题进行总结，与大家共享，共同学习。Q1：为什么蛋白表达出来了，SDS-PAGE检测时大小不符？A1：进行 ...

　在制造蛋白质类药物时,蛋白质分子受到物理或化学因素的影响,性质常有所改变,这类变化统称为变性。蛋白质在变性过程中,伴随有下列现象 : ① 生物活性的丧失; ② 一些侧链基团的暴露; ③ 一些物理化学性质的改变; ④ 生物化学性质的改变。为防止蛋白质变性,目前广泛应用的是冷冻干燥技术(freeze2drying) 。冷冻干燥技术是将含水物质在低温下冻结, 然后在真空条件下通过对冻干物料加热使冰升华,再除去物料中部分吸附水,得到干制品。用这种方法制造的药品所希 ...

亲和层析中，化合物通过酰胺键与琼脂糖凝胶偶联的例子，或者：怎样把酰胺基团转变成羧酸或酯，急用，谢谢各位！4 亲和层析4.1 原理 亲和层析是应用生物高分子与配基可逆结合的原理，将配基通过共价键牢固结合于载体上而制得的层析系统。这种可逆结合的作用主要是靠生物高分子对它的配基的空间结构的识别。常用的生物亲和关系有酶-底物、底物类似物、抑制剂、激活剂、辅因子，抗体-抗原，激素-受体蛋白、载体蛋白，外源凝集素-多糖、糖蛋白、细胞表面受体，核酸 ...

Western Blot详解－主要试剂主要试剂1、 丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。2、 十二烷基 ...

新的不能再新的菜鸟，没有师兄师姐带，也没有实验室老师带，完全自己摸索，到各个同学那里蹭经验。马上要做western，故将总结的western经验步骤po上来，一为求各位坛子里的大神垂怜，可以给予指导解惑，二来，也可与各位即将做western的新人一起交流心得，分享失败教训经验。若有不当之处，还请各位前辈、同仁给予指出，叩谢。明日开始从提蛋白开始，今先po一部分步骤，明天晚上来汇报结果。一、细胞总蛋白提取：1、PIPA（ ...