肽电泳资料

应用SDS-PAGE显示小分子多肽
SDS-PAGE在分离、鉴定和纯化蛋白质方面有着广泛应用，其有效分离范围取决于聚丙烯酰胺的浓度和交联度，其孔径随着双丙烯酰胺与丙烯酰胺比率的增加而减小，比率接近于1：20时，孔径达到最小值。分子量低于10kD的小分子肽类，即使用较高浓度的聚丙烯酰胺凝胶的SDS-PAGE也不能完全分离，或是显不出色，或是显带较弱，带型弥散。且分子量越小，效果也越差。
为了能在SDS-PAGE上显示测定小分子量的多肽，通常采取两种方法：一是增加凝胶的浓度和交联度，在制胶时加入一些可以降低聚丙烯酰胺凝胶网限孔径的溶质分子，使用尿素、甘油或蔗糖等物质；二是选择缓冲液中的拖尾离子的种类和浓度以达到改善多肽的分离效果。

操作步骤
1．电泳缓冲液的配制如下表所示

缓冲液  Tris
(mol/L)  Tricine
(mol/L)  pH  SDS
(%)
阳极缓冲液
阴极缓冲液
胶缓冲液  0.2
0.1
3.0  —
0.1
—  8.undefined
8.2undefined~Kbr_~H~M~2~18.undefined  —
0.1
0.3
~undefined 用HCl调pH
~undefined_pH约为8.25

2．丙烯酰胺贮存液的配制
单丙-双丙混合物  单丙的百分数  双丙的百分数
49.5% T, 3%C
49.5% T, 6%C  48
46.5  1.5
3.0
T：丙烯酰胺的总浓度
C：交联度

3．胶的制备，与一般SDS-PAGE相似，按下表配制分离胶和浓缩胶
组 份  分离胶
16% T，6%C  浓缩胶
6% T，3%C
49.5% T, 3%C丙烯酰胺溶液（ml）
49.5% T, 6%C 丙烯酰胺溶液（ml）
胶缓冲液（ml）
脲（g）[甘油（ml）]
水（ml）
10%过硫酸铵（μl）
TEMED（μl）
总体积（ml）  —
3.3
3.3
3.6[2.4]
1
40
4.0
10.04  0.48
—
1.00
—
1.50
25
2.5
3.03
4．样品缓冲液
4% SDS
12%甘油
50mmol/L Tris
2%巯基乙醇
0.01% Serva blue
多肽样品与样品缓冲液混合沸煮2min（或40℃温浴30min）。
5．将灌胶的玻璃板固定在电泳装置上，用1%琼脂糖封边，倒入阴极缓冲液，依次加样。
6．将电泳装置放入电泳槽内，倒入阳极缓冲液，将正负极与电泳仪相接，恒电压50~60V，待指示剂进入分离胶后，电压可升至70~90V，恒压约3h待指示剂走出凝胶下缘停止电泳。
7．染色、脱色及胶的保存同SDS-PAGE。