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是该公司结合自己产品的一个说明，但其中有些知识我自己认为很有用，转下来。下面的步骤适用于通过Xcell Ⅱ转印系统进行蛋白印记的大部分应用。为达到最佳效果，用户的优化是必要的。I. 所需材料： • Xcell SureLock™或Xcell Ⅱ™ Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001, EI9001及EI9051）• 电泳后的迷你胶（mini-gel）（最大的尺寸9cundefined9cm）• 预先切割好的印记膜：硝酸纤维素（Cat. no. LC20 ...

友情整理06年3月份无人应助贴，希望大家积极应助！ 核酸理化常数测定方法http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5777507&sty=1&tpg=22&age=0 请教顺乌头酸酶活性的测定方法！！http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5684366&sty=1&tpg=38&age=0 求助NCBI上的一个问题.http://www.dxy.cn/bbs/post/ ...

下列方法已在本实验室验证，复性任何包涵体，必定能得到目的蛋白：菌体为超声法裂解，裂解溶液中含50mM Tris-HCl, pH 8.0，100mM NaCl，5mM EDTA，0.1% NaN3，0.5% Triton-X100，在使用前加入 0.1mM PMSF每250毫升裂解液中加入约50克菌体，工作15s，间隔15秒，超声破碎45分钟，超声后加入10mM MgSO4 和0.1mg/ml 的溶菌酶和Dnase 0.01mg/ml，室温放置20分钟，6000RPM离心15分 ...

原核表达将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点：易于生长和控制；用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵；有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择。但是，在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工，常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活性 ...

一、名词解释1、 基因：能够表达和产生蛋白质和RNA的DNA序列，是决定遗传性状的功能单位。2、 基因组：细胞或生物体的一套完整单倍体的遗传物质的总和。3、 端粒：以线性染色体形式存在的真核基因组DNA末端都有一种特殊的结构叫端粒。该结构是一段DNA序列和蛋白质形成的一种复合体，仅在真核细胞染色体末端存在。4、 操纵子：是指数个功能上相关的结构基因串联在一起，构成信息区，连同其上游的调控区（包括启动子和操纵基因）以及下游的转录终止 ...

（一）第一向等电聚焦（用自制溶液）1. 从冰箱中取 -20 ℃冷冻保存的水化上样缓冲液（ I ）（不含 DTT ，不含 Bio-Lyte ）一小管（ 1ml/ 管），置室温溶解。2. 在小管中加入 0.01g DTT ， Bio-Lyte 按照如下表格 1ml 的量加，充分混匀。IPGpH RangeBio-Lyte Ampholyte(Stock)Range Conc.(w/v)Sample Solution VolumePer 1ml per 5ml per 50ml3-103-1040%5ul25ul250ul4-74-640%2.5 ...

实验过程：1. 将SIGMA公司HRP标记的羊抗兔1：10，000开始，5倍稀释。点1ul到NC膜上，点完后迅速泡到PBS里。2. 配好发光底物后取出膜，将SuperSignal West Pico与ELC prime 分别加200ul到两块膜上。1min后，在膜表面覆盖塑料膜。3. 照相4. 将照相后的膜使用蒸馏水冲洗，然后加入TMB显色底物显色，看两膜显色深浅有无差别。结果：1. 发光情况30s结果1m30s5m30s20m30s从以上图片可以看出 ...

蛋白质的检测与分析——Western blot 操作步骤一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质（或酶）。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除ELISA法外，也可用与检测DNA和RNA相类似的吸印方法。前两法有“南”和“北”之意，故本法遂被延伸称为Western（西）印迹法，该法能用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨出与专一抗血清结合的专一性蛋白质。将聚丙烯酰胺凝胶上分辨出的蛋白质转移到硝酸纤维素膜上并 ...

看到坛子里最近有好多朋友发贴问膜蛋白的相关问题，尤其是一些新手。其实坛子里以前就有过不少这方面的讨论，只有你搜索一下就会发现好多有用的信息，肯定比你在那焦虑的等待别人回帖效果好。而且好多新人常常迫不及待的就重复发贴，造成了一定程度的资源浪费，而且这也是版规所不容许的。正好本人最近也在准备这方面的课题，所以顺手总结一下过往的一些帖子，希望对大家有所帮助。（数字仅为标号，绝非排名:P）小弟抛砖引玉，冀望各位不吝拍玉:) 小 ...

Current Opinion in Chemical Biology 2000, 4:489-494蛋白质组学对一个细胞或组织所表达的蛋白质进行的系统分析，而质谱是它的关键性分析工具。在过去的两年中，标准蛋白质组技术中的进展增进了更高水平自动化和敏感性的蛋白质识别技术。另外，新的技术促成了鉴定蛋白质功能相关特性的里程碑性的进展，包括它们的定量和在蛋白质复合物中复杂情况。缩写2DE two-dimensional gel electropho ...

质谱在肽和蛋白分析中的应用　　质谱已成为肽和蛋白分析的重要工具，主要归功于一些软电离技术的应用，如电喷雾(ESI)和基体辅助激光解吸电离(MALDI)。生物大分子多为极性、难挥发化合物，不易气化，用传统质谱无法测定。但随着新的离子化技术的广泛应用，现已能高效地电离一些完整或片断的大分子生物聚合物，从而进行质谱测定。本文对质谱在肽和蛋白分析的几个领域中的应用进展进行评述。1　软电离技术1.1　电喷雾电离(ESI)　电喷雾电离利用位于一 ...

试剂配制（一）母液1.0mol/L Tris·HCl Tris (MW121.14) 30.29g蒸馏水 200ml溶解后，用浓盐酸调pH至所需点（见下所示），最后用蒸馏水定容至250ml，高温灭菌后室温下保存。 PH HCl7.4 约17ml7.5 约16m7.6 约15ml8.0 约10ml1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF PMSF 0.174g异丙醇 100ml溶解后，分装于1.5ml离心管中，-20℃保存。0.2mol/L NaH2PO4 NaH2PO4（MW119.98） 1 ...

欢迎您的到来。如果您是初访本版，希望如下信息对您有帮助：1、本版是丁香园 “实验技术讨论区” 的一员，以讨论蛋白质相关的实验技术为主旨。您可以提出您的实验疑问，讨论实验方法，介绍基础理论等等。您的参与是对蛋白质技术版块最大的支持。2、在本版发贴有如下建议：（1）题目请尽量写清要问的问题，以便网友浏览；（2）问问题尽量写清要问的细节，并注意不要重复发贴；（3）所有丁香园友的劳动都是义务的，请尽量使用文明用语，以感谢网友的帮助；（4）与 ...

Western Blot一．配胶1．注意一定要将玻璃板洗净，最后用ddH2O冲洗，将与胶接触的一面向下倾斜置于干净的纸巾晾干。2．分离胶及浓缩胶均可事先配好（除AP及TEMED外），过滤后作为储存液避光存放于4℃，可至少存放1个月，临用前取出室温平衡（否则凝胶过程产生的热量会使低温时溶解于储存液中的气体析出而导致气泡，有条件者可真空抽吸3分钟），加入10%AP（0.7~0.8:100, 分离胶浓度越高AP浓度越低，15%的分离胶 ...

前段时间，美国赠送给我一个质粒，经联邦快递到达深圳海关，公司通知我要根据货物情况到相关行政职能部门办理入境申请，或者是省卫生厅科学教育处办理《人体物质出入境申请表》或《科研样品出入境申请表》 和《医用特殊物品准出入境证明》，或者是农业厅检疫处办理相关入境申请，然后报送深圳海关，再由海关办理其他清关手续（海关还要请专家审查，非常麻烦）。听起来很简单，等我请本单位出函给卫生厅，卫生厅说不是医学用品不归他们管，到农业厅，农业厅 ...

因版面内无人应助帖比较多，但并不能及时整理出来（一个月整理一次周期太长了），导致大量帖子沉降，好多站友的问题得不到及时的解答，极大打击了新战友的积极性，而且也使版面质量下降。因此本版特招聘无人应助帖整理人员2名。 而且我们会以1分欢迎您的到来！！要求：招聘条件如下：年龄：至少2个月（从注册日期算起）分数：至少10分以上（主要是为了招对论坛操作比较熟练的人）热情度：在本版发帖超过30帖。因整理无人应助帖是一个比较麻烦的事，故 ...

原核表达标准　　目前世界上， pET 系统已成为在大肠杆菌中蛋白表达的首选。该系统成功的一个主要原因是目标基因被克隆到不为大肠杆菌 RNA 聚合酶识别的 T7 启动子之下，因此在加入 T7 RNA 聚合酶之前几乎没有表达发生。克隆到 pET 载体的基因实际上是被关闭的，不会由于产生的蛋白对细胞有毒性而引起质粒不稳定。重组质粒转移到染色体上含有一拷贝由 lacUV5 控制的 T7 RNA 聚合酶基因的表达宿主中，并通过加入 IPTG 诱导表达；也可通过 l CE6 感染原始克隆宿主菌来提供 T7 RNA 聚 ...

由michael 战友上传并编写其简介！资料已转移至:老赵一号航母:/基础医学区/蛋白质技术专业组/pub/ 人物介绍：贺福初老师，中国蛋白质组学绝对的number 1(y)(y)毕业于复旦大学生物系，1985年在军事医学科学院放射医学研究所获硕士学位。现为中国科学院院士、军事医学科学院放射医学研究所所长、研究员、博士生导师，技术4级，大校军衔，同时，为复旦大学生物医学研究院院长。2002年初，作为首席科学家，领衔了在未来5年内资助 ...

1.【求助】有关流式细胞仪http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=4532636&sty=1&tpg=14&age=02.求购DEAE Sephadex A 25http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=4532181&sty=1&tpg=14&age=03.紧急求助：请教一个蛋白质测序的问题http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=4 ...

Western-Blot操作流程试剂配制（一）母液1.0mol/L Tris·HCl Tris (MW121.14) 30.29g蒸馏水 200ml溶解后，用浓盐酸调pH至所需点（见下所示），最后用蒸馏水定容至250ml，高温灭菌后室温下保存。 PH HCl7.4 约17ml7.5 约16m7.6 约15ml8.0 约10ml1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF PMSF 0.174g异丙醇 100ml溶解后，分装于1.5ml离心管中，-20℃保存。0.2mol/L NaH2PO4 ...