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～～～热烈欢迎GE公司於莉女士光临蛋白版～～～通过我版热心战友baiy引荐，我们有幸邀请到GE公司专门从事蛋白质科学研究的於莉女士光临蛋白版进行专题讲座。在此丁香园蛋白质技术讨论版全体版主代表蛋白版会员对于於莉女士的到来表示热烈的欢迎，并对於莉女士带给我们的精彩的讲座致以由衷的谢意。本次讲座将开设两帖：1. 本帖： 於莉女士将在本帖进行讲座； 广大战友可以在本帖跟贴提问。2. 答疑贴： 我们将定期收集整理战友提问统一开贴，於莉女士将 ...

本帖姐妹篇：【原创】蛋白质纯化武器－设备篇（欢迎补充）http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=15120322&sty=3&keywords=%B4%BF%BB%AF%CE%E4%C6%F7（这篇小文可是上过丁香园的头版哦，还曾给配了个好看的图片，感谢）【资源】蛋白质纯化武器－资料篇（欢迎补充）http://protein.dxy.cn/bbs/topic/17703087条条大路通罗马，纯化之路千万 ...

下载帐号密码见以下链接：http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=154&id=4513198&sty=2丁香园生化与分子生物学FTP资源列表(9 folders, 0 files, 0 bytes, 9.71 GB in total.)├─软件(3 folders, 6 files, 32.18 MB, 49.30 MB in total.)├─常见分子生物学参考书(3 folders, 6 files, 46.86 MB, 1.10 GB in total.)│?│?蛋白质技术手册.pdf5.94 MB│?│?Molcular ...

最近在做原核表达，包涵体。以前也做过，但经验不多。从园子里也学到不少。一点失败的教训以及纯化过程中的体会，贴出来与大家共享，同时希望得到同行们的指正:)1. 首先介绍一下背景。载体是novagen公司的pET22b，Amp抗性。菌株是Invitrogen的BL21 star DE3，是一个蛋白降解酶突变菌株，也就是说是一种优化表达菌株。2. 第一次失败。第一次做诱导的时候，重复了很多次，但总是诱导不出来。PCR，酶切都正确。但没等测序 ...

发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology标　题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（一）发信站: Unknown Space - 未名空间 (Thu Apr 28 14:37:18 2005) WWW-POST本文献给YL引子　2000年5月6日，我一个人在合肥三孝口书店闲诳,希望买点参考书带出国去。我注意到有一本翻译过来的书，书名叫做《蛋白质纯化与鉴定实验指南》。这本书很奇怪，里面列出了很多具体实验的步骤和解释。我很快意识到，这本书实际上是冷泉港实验室开设的 ...

聚乙二醇具有较广的分子量分布，随着平均分子量的不同，性质也产生差异，当分子量小于1000Da时，聚乙二醇是无色无臭粘稠的液体，高分子量的聚乙二醇则是蜡状白色固体，固体聚乙二醇的熔点正比于分子量，逐渐接近67℃的极限。毒性随分子量的增加而减少，小于400Da的 PEG在体内会经乙醇脱氢酶降解成有毒的代谢物，而分子量大于1000 Da的PEG经过多年应用于食品业、化妆品业和制药业证明没有毒性。聚乙二醇分子中含有大量乙氧基， ...

个人整理 Western Blot（步骤简略，但注意事项、经验总结、基本原理很全面）1、 丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配 ...

由于大型串联质谱的飞速发展， 双向电泳目前已经逐渐让位给其他的各种非胶系统分析手段，但是双向电泳在很长一段时间内仍然会是我们在蛋白质组学领域中不可缺少的一种分析手段。 这个专题希望能够给大家在2D中遇到的一些问题提供一个快速索引，并且共同讨论您在2D中遇到的问题及解决方案！个人进入蛋白质组学领域也有6-7年的时间了， 对于双向电泳技术，从最开始的花篮式电泳到2D-IPG-PAGE， 再到现在的2D-DIGE技术都比较熟悉。 使用 ...

一直以来，园子里一直有很多战友在关于包涵体蛋白的纯化以及透析复性这块存在很多疑问。我从事包涵体蛋白的纯化以及复性这块的时间比较长，有一些经验，希望能与大家一起分享、讨论。大家有什么问题和经验也可以提出来，共同探讨一下。我先把园子里关于包涵体纯化和蛋白复性这块非常有价值的帖子整理出来供广大战友参考。包涵体纯化与复性：色谱柱纯化包涵体包涵体纯化的方法与肝素有亲合力的包涵体的纯化包涵体纯化复性的一篇文章HIS包涵 ...

近来看到好多“熟悉”的问题，不断的被询问。猜测是因为丁香园不断的壮大，好多新的战友不断加入。但是可能大家一时并没有养成搜索的好习惯，于是许多问题不断的被翻出。其中蛋白表达问题是问的最多的，虽然关于这个问题的帖子园子里是汗牛充栋了。建议大家在询问之前能养成搜索的好习惯，毕竟高手们并不是时时都在的。在这里我把关于蛋白表达问题做一个总结。这里的帖子都是含有加分的回答，很有参考价值。普通的帖子没有整理。一、原核蛋白表达问 ...

近几天回答了蛋白版几个有关压片和显影的帖子，发现在这一块还没有比较系统的论述。特贡献了western显影常见问题及解决方案，是我的经验总结，以供大家参考。其中绝大部分问题是我所遇到过的，其他个别我没遇到过的是参照pierce公司的说明书。限于字数，语言比较简洁，如对其中内容有疑问或建议可跟帖。Western荧光检测取决于抗原含量—一抗敏感度—二抗敏感度—底物敏感度—显影和定影效率这一系统。我的经历认为确保万无一 ...

开始做酵母双杂交了，计划用一个膜蛋白去筛库，已经做好了工作量大，而预期结果要靠点小运气的心理准备，面前真是一条很长的路要走！在丁香园学习了很久，希望能将我这次试验过程中遇到的困难和思索记录下来，跟大家一同讨论，共同学习。今天先说说实验之前的试剂准备，为了保证实验能顺利进行，我选择了clontech的matchmaker gold系统，订购了人脑cDNA文库（标准化的），还有培养基也是订的商品化的，再有一个提酵母质粒的 ...

1、 丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。2、 十二烷基硫酸钠SDS溶液:10%(w/v)0.1gSDS ...

完成《WB实战指南》后，朋友曾央分享点免疫共沉淀方面的咚咚；当时不得不回绝。因为，WB指南是基于这些年的回复的汇总，基本上方方面面的问题都有提及，只需要做些串联；而论及coIP，目前在国内还不太普及，尽管它已经是生化领域最基本的技术之一。因此，再想写这么个长篇颇耗时间，于我的时间和精力太为难；不过，今天是个特殊的日子，凑凑热闹吧。——人，如果在某些方面成功了，必然在另外一面有亏欠，也许这就是上帝的公允吧。——在自己最擅长的 ...

最近我们实验室想做这个试验，以前也没有做过，如果有战友做过这个试验，希望介绍点经验和教训，谢谢乐。应战友要求，在网上找乐一下基础资料，方便大家查看，虽然下面也列出了试验方法，但在实际实验室可能并不一样，希望战友们较少些自己的亲身体会，让大家和我本人在即将进行的试验中少走弯路。先谢谢各位了免疫共沉淀　　免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用 ...

由于上次求助无人回应，一气之下遍找资料，汇总出菌体/细胞裂解的常用方法和配方，希望能对其它求助兄弟有所帮助。菌体/细胞裂解法汇总一、反复冻融法：1、将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。http://cache.baidu.com/c?word=%B4%F3%B3%A6%3B%B8%CB%BE%FA%2C%C1%D1%BD%E2&url=http%3A//www% ...

常用的实验用溶液、试剂常用缓冲液的配制方法常用试剂的配置方法常用试剂配制手册分子生物学实验常用试剂配制常用试剂的配置方法【分享】分子生物学常用试剂的配制方法还有一些实验当中需要的比较重要的资料参考实验室常用技术参数资料实验仪器名称中英文对照表实验室常用技术参数资料1实验室常用技术参数资料2实验室常用技术参数资料3http://www.biox.cn/UpLoadFiles/Biox/Files/solutio ...

推荐一个网站，可以下载如下分子生物学图书，都是精品：• 斯坦福大学分子生物学讲义http://www.foodmate.net/ziliao/sort/14/3219.html• 普通生物学——生命科学通论http://www.foodmate.net/ziliao/sort/14/4590.html• 分子克隆实验指南http://www.foodmate.net/ziliao/sort/14/7540.html• 分子生物学技术和食源性致病菌的快 ...

先说一下Tricine胶的好处。Tricine胶比较容易将样品压平，具体原因我也没有搞清楚，但可以肯定的是这种胶跑出来的Marker又细又直，同样，显出来的条带也压的很好。与普通的SDS-PAGE胶跑出来的结果相比，Marker扩散没有那么厉害，各泳道条带间隔明显，不像普通胶的条带容易连到一起。反正跑出来的条带就是很漂亮。Tricine-SDS-PAGE胶的配方：（我一直用的就是10%这个浓度，把8KD和280KD ...

1,关于使用三氯醋酸沉淀法后蛋白质难于重悬的问题Q:1,Hi !I have been trying to clean and concentrate proteins form eucariotic cell culture medium in order to analyse them in 2D. I’ve read some papers were TCA precipitation was used and recommended for this purpose but I have not been able to redissolve my samples. I have u ...