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二步法：EnVision SystemEnVision显色系统是将二抗和酶通过一个多聚葡聚糖骨架联接成一个多聚体（即EnVision）直接放大信号40-50倍，把传统的二抗、三抗分别孵育合为一次孵育。特点：敏感、省时、方便、背景低（避免了内源性生物素干扰）。EnVision工作程序：1） 脱蜡、水化组织切片。2） 预处理组织切片（据一抗具体说明而定）3） 蒸馏水漂洗，置于TBS中。4） 阻断内源性过氧化物酶（仅用于EnVisionTM/HRP） ...

免疫组化问题及解决办法1、染色过强原因 解决办法抗体的浓度过高或抗体孵育时间过长降低抗体滴度（一般指浓缩性抗体），抗体孵育时间：室温1小时或4℃过夜孵育温度过高，孵育温度超过37℃一般室温20-28℃DAB显色时间过长或DAB浓度过高显色时间不能超过5-10分钟，以显微镜下观察为准2、非特异性背景染色原因 解决办法操作过程中冲洗不充分每步冲洗3×5组织中含过氧化物酶未阻断可再配置新鲜3%H2O2封闭，孵育时间延长组织中含 ...

在现代生物医学研究及临床应用领域，酶联免疫吸附检测术（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA）的使用越来越广。在免疫学研究中，常见的ELISA应用包括检测体液或培养液中抗原（如细胞因子）或抗体的浓度。虽然ELISA技术的操作流程因具体实验目的不同而有差异，其基本思路均是先将已知抗体（或抗原）固定于酶联反应板上，利用抗原-抗体特异性结合的特点，使待检测样本中相应的抗原（或抗体）联结在酶 ...

ELISA中常见问题及解决方法ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。下面分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法1 选择试剂 选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将 ...

ELISA技术的-操作要点　优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点，珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与特殊仪器配合应用，两者均有详细的使用说明，严格遵照规定操作，必能得出准确的结果。4.1 标本的采取和保存可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清 ...

ELISA即酶联免疫吸附试验，是一种常用的固相酶免疫测定方法。Engvall 和Perlmann于1971年最先应用该法进行了IgG定量测定，并命名为"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。 ELISA的基本原理是：①使抗原（或抗体）结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；②使抗原（或抗体）与某种酶联结成酶标抗原（或抗体），而且此酶标抗原（或抗体）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；③测定时将受检 ...

2006年五月份ELISA检测相关帖子总汇做ELISA设置复孔的意义http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=6097268&sty=1&tpg=21&age=0ELISA TMB配方http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=5538863&sty=1&tpg=21&age=0兔抗APC抗体与APC抗兔抗体有什么区别？http://www.dxy.cn/bbs/ ...

ELISA检测系统可谓是免疫学反应应用到科研生产中最为广泛最为灵敏的技术手段。可是在新老手操作过程中总是会出现或大或小的问题,本人在刚开始做ELISA时就面临很多困难,虽然有师兄师姐铺路,但还是常常做得一塌糊涂,比如说花板,假阳性,全显色,全部显色,显色比空白还低......自己也为此苦恼过很长一段时间,随着自己技术水平得提高,或多或少地也掌握了ELISA体系的脾气,也是熟能生巧吧,现在做方阵,做ELISA已是轻车熟 ...

ELISA原理与分类1.　ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶 ...

一、免疫荧光组织化学技术的发展史概述免疫荧光组织化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一，是由Coons和他的同事(1941)建立，免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞(或组织)化学。它与葡萄球菌A蛋白(SPA)、生物素与卵白素、植物血凝素(ConA等)相结合拓宽了领域；与激光技术、电子计算机，扫描电视和双光子显微镜等技术结合发展为定量免疫荧光组织化学技术；荧光激活细胞分类器Fluorescin acti ...

石蜡切片免疫组化染色步骤1、载玻片的处理：抗原修复过程中，由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响，极易造成脱片。为保证试验的正常进行，可选用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂，对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下：1.1 APES：现用现配。将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的APES中，停留20~30秒钟，取出稍停片刻，再入纯丙酮 ...

免疫组化是一项简单而常用的实验技术，但要想获得良好的染色结果却也不是很容易，影响染色结果的因素有很多，现就我的实验过程总结如下：一．抗原修复　组织在福尔马林或其它固定液中固定会引起位于蛋白或蛋白间的亚甲基桥的桥连,引起许多抗原决定簇被封，抗原修复以暴露抗原决定簇十分必要。足够的抗原修复是影响免疫组化染色结果最重要的因素,有时候甚至较检测系统更为重要。如在组织切片前未进行某种形式的抗原修复,免疫染色果将不能令人满 ...

免疫组化常用方法二步法：EnVision SystemEnVision显色系统是将二抗和酶通过一个多聚葡聚糖骨架联接成一个多聚体（即EnVision）直接放大信号40-50倍，把传统的二抗、三抗分别孵育合为一次孵育。特点：敏感、省时、方便、背景低（避免了内源性生物素干扰）。EnVision工作程序：1） 脱蜡、水化组织切片。2） 预处理组织切片（据一抗具体说明而定）3） 蒸馏水漂洗，置于TBS中。4） 阻断内源性过氧化物酶（仅用于EnVisi ...

有好几个同仁发消息问CD31染色，刚工作比较忙，今天分享一下我做的是免疫荧光，也试做过免疫组化，都可以做出来抗体：小鼠抗CD31单克隆抗体英国Abcam公司（CD31抗体说明书里面有说多聚甲醛会掩盖抗体，所以推荐速冻切片，也尝试过速冻切片，不使用多聚甲醛，但是这个技术个人掌握不好，所以还是用了多聚甲醛固定）二抗：山羊抗小鼠488单克隆抗体美国CST公司特别说明：我是从同学那里得到的经验，可能绿光稍微好做些，之前做 ...

一、标本制作　　可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片，经适当固定或不固定，作免疫荧光染色用。　　二、荧光抗体染色方法　　（一）直接法　　1．染色 切片经固定后，滴加经稀释至染色效价如1：8或1：16的荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等），在室温或37℃染色30min，切片置入能保持潮湿的染色盒内，防止干燥。　　2．洗片 　倾去存留的荧光抗体，将切片浸入pH7.4或pH7.2PBS中洗两次，搅拌，每次5min，再用蒸馏水洗1m ...

这种技术是把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持体，并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测之。Western使用的探针是抗体，它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。这种技术的作用是对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特异蛋白进行鉴别和鉴定。仪器：高压锅、玻璃匀浆器、高速离心机、分光光度仪、—20℃低温冰箱、垂直板电泳转移装置、恒温水浴摇床、多用脱色摇床。试剂：单去污剂裂解液、0 ...

Novo Nordisk China R&D center 委托丁香园网站招聘3位免疫学相关高级人才，待遇优厚，职位详情请参看以下说明，有意者请尽快发送简历至zj@dxyer.com丁香园负责对报名人进行初筛，并将合格简历提交给Novo Nordisk China R&D center 。岗位介绍：Scientist/Senior Scientist/Research DirectorNovo Nordisk China R&D centerZhongguancun Life S ...

Cellular ELISA ProtocolFormalin Fixed Cell Plates1. Trypsinize confluent flasks2. Pool and count cells3. Centrifuge at 1500 rpm for 10 minutes4. Resuspend to the appropriate concentration in complete medium4 x 105 cells/ml for epithelial cells2 x 105 cells/ml for fibroblast cells5. ...

Immunoassays: A Practical Approach (Practical Approach Series)Author: James P. Gosling (Editor)Publisher: Oxford University Press(UK)Publication Date: 2000-07-15Number Of Pages: 304Format: dvjuSize: 5.94MBSummary:Immunoassays is the first practical volume desi ...

Review"This is a valuable addition to the literature and will be of benefit to research scientists and clinicians whether they be experienced or new to the methodology." - Cell Biochemistry and FunctionFrom Reviews of the First Edition..."...a well and precisely written collection of protoc ...