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莲芯 请教各位高手,我做的侵袭实验,小室在倒置显微镜下怎么放呢,是正置即内膜朝上,还是倒置即外膜面朝上?我两者均看了,只能正置时看到细胞即内膜面,外膜面什么也看不到.请高手指点,我这是没穿过?还是在倒置显微镜下观察看到的就是穿到外膜面的细胞?谢谢!很急!sharpjyz 内膜面的细胞擦掉后看到的就只有穿到外膜面的细胞了shaverwoo 可以取出小室正置放于6孔板内，湿棉签把内膜上的细胞擦掉，就能看到穿过膜的细胞了。lwjs ...

ZHJOSHUA 想检测PI3K的激活程度，利用什么方法比较好啊？或者有什么比较好用的试剂盒吗？谢谢了littleniu 直接测还是比较难得，我们测一般用FP或者Zlyte平台酶反应测，一般测下游AKT等的激活会比较容易一点ZHJOSHUA 用FP或者Zlyte平台酶反应测,怎么测的呢?能讲的详细一点吗?或者有相关的文献吗?谢谢了birano 强烈推荐美国Echelon，PI3K活性检测试剂盒，通过对PI3K代谢物PIP2， ...

dyqin 请问PMA的作用是什么？和MAPK信号通路的关系？谢谢哦littleniu PMA是经典的PKC激活剂，可通过PKC信号通路进而激活MAPKdyqin 非常感谢dyqin 非常感谢本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

zhanghaopeng 请教各位：JAK-STAT通路中上下有分子哪下在脑缺血损伤中伴有主要角色的呢、是如何调节的？研究切入点应该在哪里呢？谢谢！zfyyzz00 张建议先了解jak－stat的转导途径，目前已知jak有jak1、jak2和jak3等，stat已经发现有stat1到stat7，一般来讲研究stat1和stat3的比较多，但在各个组织器官表达的激活可能有差异。zhanghaopeng zfyyzz00 wro ...

nopain 近日做了p-erk的WB：不加药和加药5min的蛋白表达没有什么差别！且内源性pERK表达很高。16小时的撤血清对其表达似乎没有影响。两个月前找别人借的一点pERK抗体，做的结果能看到撤血清后ERK激活减明显少了，加药组比不加药组的激活明显得多。郁闷得很，不知道原因出在哪儿，有经验得兄弟姐妹们给点意见吧~~谢了！littleniu ERK的信号激活非常灵敏，本身就叫做细胞外信号调节激酶，对外界环境变化相当 ...

narcissus27 在一篇文献里看到下面这句话：当Ca离子从内质网中被释放入细胞质后会激活内质网附近的一种Ca 依赖性的半胱氨酸蛋白酶即Ca 调蛋白分解酶，此酶可以作用其底物Bax，Bid，caspase一12等而导致细胞凋亡。我没查到这是什么酶，求教各位战友。限制条件：1.可被Ca离子激活2.是半胱氨酸蛋白酶3.其底物是Bax，Bid，caspase-12shqling 符合限制条件的酶之一为Calpain，calpai ...

perfectstory 各位大虾，小弟准备做白血病或淋巴瘤细胞的凋亡方面的研究，不知道最新有关细胞凋亡方面的信号途径有没有新进展啊？呵呵，比如核因子途径，NOTCH，MAPK，FAS之类的，谢谢哦xls_2008 我也是刚刚接触凋亡信号转导的研究，还有好多东西要学习，希望以后能多交流交流，比如最新进展、试验技术等等，嘿嘿。。。xls_2008 QQ983892357 注明：同路人清清河水 同路人ljldella 有不有成骨细胞方面的啊本 ...

shelb352 我在课题中对一个转录因子的研究主要是研究转录因子及受到其调控的下游基因的功能研究，那用什么方法能发现调控这个转录因子基因表达的上游基因？是否能用酵母双杂交方法（了解不是很清楚）哪位高手能否帮忙回答一下，谢谢。shelb352 有谁能否帮忙回答一下？doge 首先声明，不是高手，仅发表个人拙见一般来说，可以找到与此转录因子同源的转录因子，看看是否在类似的信号通路上，以此来推断调控这个转录因子的上游蛋白，包 ...

食尸鬼 SHP2的分子量到底是多少啊，有的抗体说明书上是70KD，有的是64KD,我看的文献却说是68KD，到底是多少啊，不同细胞的会有差别吗，怎么这么大？另外有的资料上说理论值是70KD，理论值是啥意思weixiaozhu 食尸鬼 wrote:SHP2的分子量到底是多少啊，有的抗体说明书上是70KD，有的是64KD,我看的文献却说是68KD，到底是多少啊，不同细胞的会有差别吗，怎么这么大？另外有的资料上说理论值是70KD， ...

helsman 碧云天分装的Akt p-akt抗体怎样，效果如何，非常感谢岩冰 同样期待，结果。岩冰 示意图岩冰 不好意思，发错地了zhuangzongdxy 想知道楼主 是做什么的我做的是 PI3K-AKT 通路的前段时间 也遇到了 同样问题想买碧云天的分装的 Ly294002期待和你交流邮箱 zhuangzong@126.com本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiong ...

langtianliu 请教ERK抑制剂PD98059在大鼠的给药途径及剂量谢谢 ~如可以的话 附带一些参考文献！感激不及~！~~~~~~~shqling 腹腔注射shqling 腹腔注射langtianliu 那么请问腹腔注射的剂量范围大概多大，我看了好像有0.5-10mg/kg 都有，还有想问下PD98059在体内作用的时间或药效动力学怎样？谢谢急！！！shqling 1.视所用动物种类而定，小鼠用过10mg/kg计量，大鼠可以减量。2.细胞用过1 ...

碧峤 最近在查找有关受体酪氨酸激酶的资料，可是找不到EphB2 的激动剂和抑制剂，哪位大侠知道？littleniu EphB2本身就是激动剂，可以作用于EphB4等受体，这个系列受体亚型很多，你再查一下弄清楚要问的是哪个受体亚型。碧峤 EphB2本身是受体，ephrinB是配体，EphB需要结合ephrinB形成二聚体，发生自身酪氨酸磷酸化，并可以引起下游蛋白磷酸化。由于EphB有B1,B2,B3,B4亚型，与受体结合的配体又有 ...

zsping7411 有哪位高手知道PI3K细胞信号传导通路与HO-1的关系的，因为我发现在脑、肝、心肌器官的文献说PI3K通路激活，磷酸化PI3K增加，上调HO-1的表达，最后抑制细胞凋亡发挥保护作用，而在中性粒细胞（PMN）方面，PI3K激活促进PMN募集趋化作用，所以在胰腺炎、脓毒症等引起的ALI中应用PI3K抑制剂渥漫青霉素或LY294002则表现为抑制PMN在肺内聚集，所以减轻了ALI，似乎很矛盾，请问有谁 ...

ZHJOSHUA PI3K在不同的肿瘤细胞的表达量应该不一样的.想知道PI3K在常见肿瘤中，哪个肿瘤表达量高？哪个肿瘤表达量低？请各位大侠给点建议，请教各位了，先谢了。超级风 做定量PCR，western就可以了ZHJOSHUA 那有已经做过相关工作的报道吗？或已经发表的相关文献？想要在这个基础上做。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixi ...

秋风夜雨中的行人 有什么心得交流一下。是否在动脉内皮上只表达Nothc1及它的配体：DLL1？另外那位师兄师姐还有Notch1及DLL1的抗体，能否便宜买给我？秋风夜雨中的行人 怎么没有人回应呢?lele20070908 我也在做此信号研究交流一下,QQ: 85714585,晚上上网20点后秋风夜雨中的行人 好的,我加你秋风夜雨中的行人 怎么没有人回应抗体呢?samhusam 也许NOTCH4 和DLL4表达，且更重要yin198716 我现在做 ...

00501101 1、再做NF-kB的时候不少文章用阳性对照大部分用TNF或LPS，有些不用。弱弱问下，为什么要设立阳性对照？怎么样合理去设立阳性对照？我做的实验怀疑疾病可能与内毒素有关，是否只是设一个LPS的阳性对照就好了，还是不设也可以？2、TransAMTM 是否可以完全代替EMSA？还是他们两个是互补?我看到大部分文献还是用EMSA多。3、这个问题，不好意思，我还在查文献，就是怎么样可以查出和确定NF-kB哪个结构 ...

nydljl 最近在做高糖诱导心肌细胞凋亡，多数文献提示用其它糖对照，渗透压不是主要的凋亡诱因。那么胞外的葡萄糖是怎样通过胞膜，哪些特异的通路起作用（培养中没有胰岛素），产生oxidative stress，AGE损害等，诱导ROS，线粒体等导致凋亡？我找的很多文献基本是在下游的机制，具体讨论胞外high glucose开始是如何进入的文章较少。不知有没哪位战友做过这方面的工作，指教指教。shqling Can I ask you a quest ...

yirenzhe ERK1与ERK2到底有什么区别？除分子量不同外。doctormy ERK1 和 ERK2 的区别是个很大的研究课题，还有很多未知啊，呵呵目前研究认为，ERK1 和ERK2 的上游激活路径高度相似，而且他们目前已知的下游靶点也非常一致。但当前有关区别的研究主要还是侧重于具体的生物学功能方面：人们发现ERK2与人体发育密切相关，对于学习和记忆的功能非常重要，而ERK1则不然；有学者认为，对于一些脊椎动物而言，ERk1非生 ...

tangqj 谁有TGF-beta的信号传导图？谢谢kaige88 参见如下：kaige88 参见如下：本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

liusurong00 各位师兄师姐好：我所做的基因的mRNA的长度为5371bp,能否让公司合成引物，然后再通过PCR得到基因全长。这样能否实现？如果不能，怎样才能得到基因序列？请各位高手指教。谢谢！westernblotx 长的mRNA的确无论从RNA提取的完整性、反转录上来说都是不小的难度。建议你分段扩增，然后用“桥接”法扩增出完整的cDNA。现在有的公司推出有长程扩增的PCR试剂，但是我没有用过，不知道扩增数千b ...