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小扇扑流萤 最近在做泛素化，已经得到了一个蛋白证明它发生了泛素化。下面想分析一下这个蛋白的氨基酸中在哪个位点发生了泛素化。请问有没有专门预测泛素化位点的工具？我看到ExPasy中有SUMO化的预测工具，这两者有没有共同点呢？小扇扑流萤 没有人做这个吗？SOS!!wuyuhere I am studying in SUMOylation and Ubiquitylation.They all recognize Lysine residue.wuyuhere my m ...

zyk112 请问不同组织中 DNA的表观遗传状态 基因甲基化状态是否不同？Fasta921 DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。除了甲基化外还会有其他因素在控制基因表达，但基因表达或多或少都受甲基化的影响，而不同组织的基因是选择性表达的，意味不同组织基因甲基化状态是不同的。zyk112 谢谢十分感谢本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯 ...

hzdlj 各位分子生物学大佬，本人目前才开始涉足miRNA，有诸多不懂之处，向各位请教。1，目前研究微生物miRNA多集中在病毒上，为什么真菌，细菌，支原体等研究较少，难道仅仅是因为基因组大小不同吗？2，查了下miRNA库，http://microrna.sanger.ac.uk/sequences/，似乎没有发现有关于真菌和某些细菌miRNA。请问：有没有这方面的生物信息学软件，根据微生物的基因组，预测其可能产生的miR ...

wywdxfsh 在ncbi上查不到这个咚咚，只有转录因子 transcription factor 4我做的小鼠的freecell T细胞因子(TCF)/淋巴增强因子(LEF)是Wnt信号传导通路的主要信号分子。TCF/LEF家族包括LEF-1、TCF-1、 TCF-3、TCF-4。其中TCF-4是Wnt信号传导通路的一个重要的分子，并且在肿瘤的发生过程中起重要作用.SEE:http://www.nature.com/onc/journal/v2 ...

cuixueying531 首次来请教，请大家多多帮忙，谢谢Fasta921 那你为什么选择这样的基因？说出你选择的理由，也许我们大家可以给点建议。呵呵是你发现的新基因？为什么下这样结论：在正常组织及癌组织都不表达的基因？各种组织细胞类型你都检测了或者你都有文献可供参考了？呵呵PS：我也好奇，跟贴学习！落梅风 我也好奇，正常组织和癌组织都不表达，怎么研究？sleepyabby LZ为什么要研究这个基因呢?从哪里得到它的?zfv2 ...

shuijingcrystyl 快答辩了，不知道E2F 的英文全称，因为所做指标与其有密切关系，求助转录因子 E2F 英文全称？freecell http://en.wikipedia.org/wiki/E2Fshuijingcrystyl 谢谢版主，授之以渔:I本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

sulicon 我想题目没说清楚。。。是这样的，我们做了一个方法，现在要检测这个方法的好坏，需要知道特定的miRNA的上调或者下调。我们希望能找到一些比较经典对某个miRNA调控的例子。经典的意思是：1. 这个调控比较可靠，大家公认。比如某个TF会激活某个miRNA的表达。2. 这个调控涉及的分子比较重要。比如上面例子里面的TF是P53。因为做的比较偏方法，要找具体的例子还一下子没有谱了，麻烦大家给点建议。谢谢！吴佰霖 鉴定调控mi ...

mugua519 dominant negative技术和siRNA技术都是可以特异性抑制细胞内某种蛋白的功能，而达到实验研究的目的，这两种技术之间的比较上有什么优劣呢？siRNA技术相对已比较成熟，既然dominant negative技术存在，那肯定应该有它独到的地方，那它有什么特点呢？什么样的蛋白可以用这个技术呢？谢谢指教！zfv2007 dominant negative有一种意思是“显性失活”，当你研究一个蛋白质的功能 ...

aspirin713 各位好，拜托大家给点建议我最近在做FCM，主要是测药物对黑色素肿瘤细胞的生长周期的影响，用的方法是FCM PI染色的方法。但是70%的乙醇固定之后，离心后可以看到有大量的细胞贴壁，把上清吸出去以后，可以看到沉淀留在底部，但是加入了PBS吹打均匀以后再离心。不管怎么样延长时间，或加大转速，就是没有细胞离到壁上，请问大家，这是怎么回事。应该如何避免上面这样的问题出现呢？！干细胞之星 固定的时候出问题了细胞估 ...

doczou 我的实验中要检测ATF4,ATF6的表达情况是上调还是下调，是应用western blot方法检测，还是应用实时定量PCR来检测合适，哪个更加有说服力，我想节约时间和试剂。谢谢各位大侠指点迷津！！ecust小熊 realtime PCRzhuqueleee 1，western blot,实时定量PCR都是比较好的实验方法，只是一个从蛋白一个从核酸水平验证，可以同时做。实时定量PCR如果要买全进口的然后用荧光探针的话比较贵 ...

umay 我在做一个基因敲除之后细胞内主要信号通路的变化，需要最磷酸化蛋白，我血清饥饿过夜，为了使和对照组的细胞出去同一个水平，但不知道大概需要加血清释放多长时间，在线急等，谢谢啦！ecust小熊 做预实验去smallstone80 一般24小时本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

verycool 请问大家,用带GFP的逆转录病毒感染细胞后,如何检测GFP插入到细胞染色体的具体位置.我想知道的是如何确定其前或后的基因是什么?谢谢!小薇宝宝 这可是比较麻烦了，检测拷贝数可以用SOUTHERN BLOTING检测位置需要用图位克隆，用MARKER逐渐逼近然后确定位置lmnsmu 我认为检测其在染色体的具体位置，需要用原位杂交，常用的是FISH，但是大可不必检测其的染色体定位，检测GFP知道它在细胞内有无 ...

伽利略 假设PCR后6倍，能代表初始量mRNA就是6倍么？有人说能，有人说不能，谁能来解释一下呢？我一直都想不清楚，但是国外文献确实有直接说就是几倍几倍的如果RT PCR不能，那么REAL TIME的能么zhao22840718 在引物设计非常好的情况下，指数扩增时能代表，如果循环数过多，后期就不是指数扩增了，自然就不能代表了。灰度扫描能不能代表真实的倍数，我就不清楚了。real time分析的是指数扩增期，应该能代表。个人看法。伽 ...

伽利略 检RT PCR测到a mRNA上调6倍，其蛋白上调15倍即蛋白比mRNA上调幅度大得多这说明了什么？a受到转录后调控还是怎么的？小薇宝宝 这很正常，起码趋势是一致的，其中有一些实验误差，也有翻译水平的调控存在伽利略 谢谢啊，如果不考虑实验误差问题，那蛋白比mRNA上调幅度大很多代表了什么，比如蛋白上调了100倍，mRNA只上调10倍。Fasta921 伽利略 wrote:检RT PCR测到a mRNA上调6倍，其蛋白上调15倍即蛋白比m ...

bbg966 请问Trizol 和β-actin的中文是什么呀？英文缩写呢？谢谢吴兴 Trizol是mRNA提取时的试剂名字，另一个我在查better8392 Trizol是一种提取总RNA的试剂名称。一般的生物公司都有卖，不过属invitrogen公司的产品用户较广，但是价格也较高。国内的也有，价格较低。也可以自己配制，配方是公开的。actin是肌动蛋白的意思，所以β-actin是一种肌动蛋白。因为β-actin基因是看家基因 ...

yan0495 R&D公司的recombinant human EGF Receptor来源于DNA编码的人类EGFR的胞外区，而酪氨酸激酶活性区在胞内，我现在需要做酪氨酸激酶抑制剂的筛选，不知道能不能用这个蛋白？筛选原理：以多聚酪氨酸多肽为底物，用EGFR催化酪氨酸的磷酸化，用酶标记的单克隆抗体检测酪氨酸磷酸化程度，以OPD做为辣根过氧化物酶底物显色，从而筛选EGFR抑制剂。附上EGFR说明书和图。请各位指点啊！yan04 ...

urbest 请教各位战友一个比较低级的问题：Janus激酶细胞信号转导及转录活化因子，即Janus kinase - signal transd ucer and activator of transcription,JAKs-STATs，该通路是当前细胞因子研究领域的热点 ，许多细胞因子和多数造血生长因子均通过此途径完成细胞信号传递过程，它还是多种炎症 介质的重要信号交汇(cross-talk)和调控系统之一。我就想问一下：JAKs-STAT3这两个单 ...

xupingcs 我的实验有部分和wnt/ca2+通路相关,可不知道有无wnt/ca2+通路的抑制剂.查了很多资料,也没见这方面的报道.另: 我只想抑制ca2+通路,不抑制wnt经典通路和JNK通路.期待答疑,谢谢!xupingcs 怎么没人解惑呀?期待中......doctormy XeC blocks IP3-induced Ca2+ release (IC50 = 358 nM) without interacting with the IP3-binding site, suggesting a ...

chacha2118 各位大侠：我想问一个问题，我做的课题的一个基因，用到它的其中一个外显子的序列，参考外国文献都说这个外显子是第四外显子，外国文献都是参考的Gene Bank的同一个登录号的序列，可是我去Gene Bank查这个序列却发现老外们说的第四外显子的序列前面标记的却是number5,这是怎么回事？谁能帮我解答一下。谢谢lalala_2004 查到的能确定是同一个基因吗。给个登录号看看。chacha2118 是NM-0 ...

syo820924 急需,谢谢共享!liuxin20040601 从文献上下的图片liuxin20040601 还有一张。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming