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        【求助】NF-KB抑制后活性检测

        丁香园论坛

        4860
        各位大虾,有个问题想请教,就是使用NF-KB抑制剂PDTC抑制NF-KB后,怎样能知道是否抑制成功?时间紧迫,希望高手们能积极赐教,谢谢!
        PDTC的作用是抑制IkB的降解(prevent NF-kB activation by a mechanism that involves inhibition of I-kB degradation followed by IKK-induced phosphorylation,一篇文献的原话)
        RNA干扰后测表达NF-kB的表达鉴定效果,我见过文献报道不少。
        在Blood的一篇文献上看过另外一个抑制剂(好像是蛋白酶体抑制剂,阻止IkB的降解)的验证,他测了核蛋白和DNA活性。但是,我不知道这个抑制剂是不是影响NDA活性,这个该不该测我最近也在思考。
        但是PDTC测抑制效果,个人认为他阻止了NF-kB解离,测定核内的NF-kB的含量(做个western或者共聚焦)是最起码的。测NF-kB表达则没有用。
        00501101 wrote:
        PDTC的作用是抑制
        IkB的降解(prevent NF-kB activation by a mechanism that involves inhibition of I-kB degradation followed by IKK-induced phosphorylation,一篇文献的原话)

        但是PDTC测抑制效果,个人认为他阻止了
        NF-kB解离,测定核内的NF-kB的含量(做个western或者共聚焦)是最起码的。测NF-kB表达则没有用。


        笔误?
        抑制了IKBα的降解,自然NF-kB就无法解离了,在胞浆内,IKBα和P65、P50二聚体结合。体内IKB起抑制NF-kB作用,IKBα无法降解,NF-kB就无法解离,所以不能激活入核发挥作用。
        少写了一句,引起大家的误会了,哈哈
        请问如何检测p65/p50或者p50/p50二聚体呢?
        western就可以检测啊
        请问western检测NF-KB活性是抽提核蛋白检测p65,还是检测磷酸化p65?

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

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