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lily1314lk 本人需要自己构建质粒，遇到一个很头痛的问题，不知道如何利用blast对得到的shRNA进行同源性分析，有谁能指点一下，我做的基因是IKKα，有没有哪位同仁做过，可否提供shRNA靶点，谢谢freecell http://scholar.google.cn/scholar?q=IKK%CE%B1+shrna&hl=en&lr=&btnG=Searchzhaohu552211 进入到ncbi ，就可以了biowd 进入bl ...

huiguijimo 我想对培养的细胞进行RNA干扰，在干扰之前需要对细胞进行同步化吗？请各位高手指教Fasta921 干扰RNA是针对什么实验？细胞周期也许会涉及同步化吧！zhanglongfeng 只要不是研究细胞周期有影响的课题，就不需要。huiguijimo 想分别看一下干扰的那个基因对细胞周期和细胞凋亡及增殖情况的影响。需要同步化吗?Fasta921 huiguijimo wrote:想分别看一下干扰的那个基因对细胞周 ...

小老鼠tina Toll样受体的抗体是如何确定的？我查了好多文献都没有看到。只知道它的基因序列，如何证明这个蛋白是存在的呢？像在人体上MyD88等都可以借助来进行受体的分析。但这些在一些动物中还没有证实存在，下一步的工作不知该如何进行，希望通过大家的讨论给我一些新的思路。谢谢:)Fasta921 是Toll样受体的基因片段还是Toll样受体的抗体基因片段？想证明Toll样受体蛋白存在还是想证明Toll样受体的抗体蛋 ...

xfnidage 我要做拟南芥的转基因，构建了一个双35S启动子的T质粒用来转化，就是两个35S启动子串联。不知道这样做会不会产生负面影响，望各位指教！freecell 什么叫“负面影响”？Fasta921 xfnidage wrote:我要做拟南芥的转基因，构建了一个双35S启动子的T质粒用来转化，就是两个35S启动子串联。不知道这样做会不会产生负面影响，望各位指教！针对蛋白表达量而言不会产生负面影响。CaMV35S双启动子 ...

幽幽水 请问各位：如果所取肿瘤组织只有米粒大小，能同时做免疫组化和细胞培养吗？幽幽水 请各位给些建议，我现在弄开题报告，马上要开题了，很急。谢谢，十分谢谢！Fasta921 先培养细胞吧，不能断了自己的后路。呵呵免疫组化可以放在细胞培养后点做。幽幽水 呵呵，nlyydy 如果是医院取的组织建议先做细胞培养做免疫组化可以试着申请病理科取腊块或者切片，一般医院都有保存wanglinling 免疫组化一般取黄豆大点吧。一粒米要做两种有点不现实 ...

bixihi 3’侧翼区（3‘flanking region, 不是3'UTR）可能有哪些功能呢？大家讨论一下好吗？sulicon 这是个什么概念？？一般说flanking 都要对应一个site吧？？freecell 3' flanking region: A region of DNA which is not copied into the mature mRNA, but which is present adjacent to 3' end of the gene. It was originally thought that the 3' flanking DNA ...

licanming 我在sigma上看到许多Bisindolylmaleimide，有Bisindolylmaleimide I II IV V VI VII VIII acetate salt X hydrochloride XI hydrochloride I hydrochloride等10中不同的试剂，有些说是针对大鼠脑PKC的（说明书），我不知是否指组织特异性（英文理解力有限）？但I II VI我还未看出有什么区别！文献大多选用I，但I要9000多人民币，其它同等量的 ...

xthua Cell, Nature 都出版过拟南芥的甲基化图谱的文章，但是细菌的甲基化图谱未见报道，如果单从基因组的大小考虑，细菌的更加容易测序。各位以为细菌的甲基化图谱有其表观遗传学的意义么？Fasta921 xthua wrote:Cell, Nature 都出版过拟南芥的甲基化图谱的文章，但是细菌的甲基化图谱未见报道，如果单从基因组的大小考虑，细菌的更加容易测序。各位以为细菌的甲基化图谱有其表观遗传学的意义么？如果该细菌可以产生 ...

zhaohu552211 我正在做大鼠肝脏组织，现在做凋亡，请问做什么指标？我打算做DNA Ladder和AnnexV,请问用什么试剂盒比较好，价格先不考虑。我现在急求大鼠的ALR的序列，请各位多帮助，非常感谢zhaohu552211 请大家帮助:):)感谢大家Fasta921 Annexin V-FITC/PI 国产晶美的也不错！你检测的细胞没有其他荧光干扰吧，如果有GFP，不能用FITC，因为它们荧光通道相同。PS：把我血淋淋的教训告诉 ...

pophjp 请问各位大侠可以用什么方法检测IRP和IRE的结合力情况，就是铁调节蛋白和铁反应元件之间的结合力变化，什么地方可以做呢？先谢谢了~-~freecell google: binding capacity of irp with ireluoqq1985 gel-shift试验可以检测luoqq1985 很多文献都有做IRP与IRE结合试验的，你可以下一些IRP有关的文献，基本都有做本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯 ...

pophjp 请问alpha-synuclein的等电点是多少呢？不胜感激~-~Fasta921 pophjp wrote:请问alpha-synuclein的等电点是多少呢？不胜感激~-~http://expasy.org/tools/pi_tool.html输入你蛋白的氨基酸序列就知道PIpophjp 谢谢Fasta921，帮老忙了呵呵~-~本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄 ...

bacchante 本来想构建三个activated 上游kinase，但是觉得转染心肌细胞还是比较麻烦。因此求助各位，看看有没有药物激动剂什么的，直接加到细胞里面算了。谢谢bacchante 自己顶一下，高手请出面，到底P38和ERK以及JNK的药物激活剂是什么？突突突 SP600125，selleck，美国进口，JNK 抑制剂本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴 ...

dengxiaoyu1221 本人用SMART试剂盒做cDNA文库，做到λ噬菌体cDNA文库向质粒cDNA文库转化的过程，不知什么原因全部失败，不知哪位大侠能提供λ噬菌体cDNA文库向质粒cDNA文库转化的详细方法过程，在下不胜感激dengxiaoyu1221 没有人为我解答么？freecell refer to:http://scholar.ilib.cn/A-QCode~jcst200601006.htmldengxiao ...

xmu_2008 各位大虾，有个问题想请教，就是使用NF-KB抑制剂PDTC抑制NF-KB后，怎样能知道是否抑制成功？时间紧迫，希望高手们能积极赐教，谢谢！00501101 PDTC的作用是抑制IkB的降解（prevent NF-kB activation by a mechanism that involves inhibition of I-kB degradation followed by IKK-induced phosphorylation，一篇文献的原话）RNA干扰 ...

licanming 我的GF109203x（Bisindolylmaleimide I，Gö 6850）是sigma的，看说明书上是用DMSO配制母液，但未有说明稀释母液可以用哪些试剂，还是用DMSO吗？我看过一篇文献是用培养基稀释的。请问各位有无经验？一般都是用什么来配的？如果还用DMSO，那会不会DMSO过多，引起细胞损伤？licanming 可以用PBS稀释吗？licanming 通过这两天阅读文献，发现都是用培养基来配的，所 ...

dm0920 我有一篇文章修回。审稿人怀疑我结果的可靠性。其中一个结果是将细胞在缺氧的条件下培养4小时后，检测两个目的基因的转录和表达，RT-PCR以及细胞免疫化学染色都提示该目的基因发生了转录并表达。但是，审稿人认为仅仅4个小时这些基因（CD31和CD34）还不能转录和表达，因为4小时太短。一般基因得48小时以上方可表达。因此，审稿人怀疑我的结果。我想请教各位大侠，是否能帮忙查找一些文献表明很多基因的转录/表达可以 ...

licanming 我的实验是用VEGF处理细胞后测定细胞PKC激活水平，拟采用Western blot的方法，用ECL法检测，这样分析PKC激活程度结果国际上认可吗?我在Cell Signaling Technology上，查到2261 Phospho-(Ser) PKC Substrate Antibody W IP E D9371 Phospho-PKC (pan) (betaII Ser660) Antibody W IP9921 Phospho-PKC Antibody Sampler K ...

shenqi0622 最近在看蛋白质组学的文章，很多英文文章里提到了Reference compendia approach，我不知道Reference compendia 是什么意思，有哪位大侠知道啊，急！！！！！！freecell 只有参考上下文了。Fasta921 This study creates a compendium of gene expression in normal human tissues suitable as a reference for defining basic org ...

songyd06 Src激酶中,Src汉语怎么读?英语全称是什么？Fasta921 sarcoma gene 肉瘤基因。能诱导肉瘤(sarcoma)的形成，故将此基因命名为src基因。songyd06 谢谢！小弟水平低，再问一句，src读的时候直接读sarcoma还是有其他的简写读法？Fasta921 songyd06 wrote:谢谢！小弟水平低，再问一句，src读的时候直接读sarcoma还是有其他的简写读法？读sarc！:):)本文由丁香园 ...

cwqq2003 请问大家使用eNOS的抑制剂L-NAME后对eNOS的磷酸化有影响吗？freecell 以前的研究结果：http://www.actaps.com.cn/qikan/cpaper/zhaiyao.asp?bsid=599454jempoo Circulation. 2002 Mar 26;105(12):1497-502.Pretreatment with L-NAME, a nonselective NOS inhibitor, had no effect on Akt ...