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redsky 我想咨询一下XDJM，如果想要看某个microRNA在某个细胞系或组织中的表达水平高低，有没有这样的数据库呢？就是基于文献总结的数据库，或有什么其它方法可知道？iscience MicroRNA.org (http://www.microrna.org) is a comprehensive resource of microRNA target predictions and expression profiles.竹叶青秦 http://www.mirz. ...

kimmileecn 我现在在做有E-cadherin的课题，其中要涉及使E-cadherin不表达，请问除了RNAi，还有其他方法吗？谢谢iscience 教材上没有。本人总结的文献上的方法有：1、构建突变体 ，单点或者多点突变，使之缺失；2、使用特异性抑制剂；3、使用该蛋白的特异性单抗或者多抗，封闭该蛋白的作用；4、使用与该蛋白性质相近的分子，使之与该蛋白竞争性发挥作用；...zhyu8221 lz肯定是在动物或者细胞水平，除了干 ...

hehades 哪位朋友测过线粒体膜通道孔（MPTP）? 我想测骨骼肌细胞不知道哪种方法好,是用骨骼肌悬浮细胞还是用冰冻切片? 哪种方法可靠?十分感谢iscience 一般用活细胞吧 。参考这篇文献：African Journal of Pharmacy and Pharmacology Vol.2(2). pp. 014-021, April, 2008http://www.academicjournals.org/AJPP/PDF/pdf2008/Apr/Manash%20et ...

yy59410 请问，我现在要测线粒体膜通透性改变即JC-1的检测，想问下国产的试剂盒里凯基的好还是碧云天的好。希望高手指路啊。freecell 效果差不多。yy59410 谢谢！还有一个就是我用JC-1测MMP,是不是没必要再用罗丹明测ROS了！我做的是凋亡检测！wudonghui3516010 我现在也是在用JC-1，效果很明显，就碧云天就可以。平时-20保存，用时稀释1000倍。美可爱的土豆 请问一下楼主有没有做用碧云天的试剂盒 ...

百分之7大脑 IP10（ interferon-inducible protein-10），即CXCL10，是1985年Luster等在研究IFN-γ诱发的免疫应答时从U937细胞中克隆到的。我想问的是IFN-γ是怎么诱发产生IP10的？IFN-γ的信号传导是否只有JAK/STAT途径？是否通过这条途径诱导产生IP10？我只知道的是IFN-gama的JAK/STAT途径，到细胞核，然后就不知道了，有哪位大侠给我解惑解惑？或者提供 ...

sounderxu 请问谁有clone manager软件，发给小弟一份，实验急用，万分感激邮箱sounder001@126.comfreecell 自己为何不在丁香园搜索一下？http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2991955_0.htmlsounderxu 这个下载不了啊本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号 ...

tyw5668 请问是不是免疫组化、免疫荧光、Elisa？谢谢lianhongli 应该是酵母双杂、免疫共沉淀和共定位吧。gingivalis 不管答案是什么，千万不要以为这就是权威。方法是无限的。不怕做不到，就怕想不到。summityoung 1.酵母双杂交是初筛2.筛到得蛋白要用Co-IP、GST-Pull down进行验证bioyangyu tyw5668 wrote:请问是不是免疫组化、免疫荧光、Elisa？谢谢应该是楼上几位说的酵母 ...

yu_ting 现在,急需知道MDA-231是P53野生型的还是突变型的?多谢iscience 我用“MDA-231 p53”在google里面检索了一下，初步得知该细胞株系P53突变型（The human breast cancer cell line MDA-MB-231, which has high levels of a mutant p53...）。请参考：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16785993zhujoker The cell line is an ...

dongyunzhao 请问：http://pictar.bio.nyu.edu/网址打不开，是不是链接改了？freecell http://nematoda.bio.nyu.edu:8080/NBrowse/N-Browse.jsp?last=falsehttp://pictar.mdc-berlin.de/dongyunzhao 谢谢斑竹lya2009 这两个网址好像还不行。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的 ...

happylimi 请教：如何提取细胞中的cAMP？和普通蛋白的裂解buffer一样么？happylimi 知道和裂解普通蛋白的buffer不一样了，要用TCA将蛋白沉淀下来除去，但是后续报道有用乙醚洗然后用60度氮蒸干的，但是这个我们实验室没有条件做，还有其他的后续处理方法么？ylcui 如果实验室有进口的探头式超声破碎仪的话，直接加PBS超声破碎悬浮细胞即可。有时要加磷酸二酯酶抑制剂。贴壁细胞可以用一般的蛋白裂解B ...

vondolf 麻烦大家了！iscience 细胞内钙离子浓度很低，约为10-7mol/L,而细胞外钙离子浓度要高4个数量级，约为10-3mol/L，内外相差1000~10000倍。因此，当一种刺激能使细胞外有少量的钙离子进入细胞内时，就会使细胞质钙离子浓度大幅度增加，继而使与某些蛋白质或酶结合使其激活，引起生理反应，实现对细胞功能的调节。钙离子的细胞生物学功能在很大程度上是建立在细胞内、外钙离子的不平衡分布上，细胞质中的 ...

eeflying 目前有两种化合物，分别为Bcl-2和PARP的抑制剂，虽然这两个指标通常作为细胞凋亡的指标常用于分子生物实验，但是，如何证明这两个分子被抑制的实验却第一次碰到，请各位战友支招，我要直接检测哪个蛋白的WB 或者做什么实验合适？magichunter 用western检测bcl-2的含量变化，检测PARP活性裂解片段的含量变化以及原型态PARP的含量变化。eeflying 你和我犯的一样的错误，目前不是看PAR ...

丁一凡 近来看到关于重叠基因的资料，但是我看到很多资料有两种：1. 重叠基因都是存在于病毒等简单的生物的基因组中，而像高等的生物等复杂生物基因组中不含有重叠基因2.哺乳动物中的重叠基因(比较基因组)信息来源：生物中国人　更新时间：2004-6-20 17:26:00人的基因组有32亿左右碱基，但却只有约3万5千个编码蛋白的基因。按道理来说，每个基因应该可以“分到”比较多的长度，但是，令人不解的是，在哺乳动物基因组中存在大量的重叠基因（ ...

会跳舞的蛋糕 请问用于酵母双杂交的cDNA文库有什么特别要求？自己构建好还是公司构建好？iscience 没有什么特别要求。可以给公司做。如果说你自己做好，还是公司做好，那么只能问你自己了。有些人的文库做得比公司的好。zhj008 建议找公司做，自己做浪费时间，关键质量不好，还不会少花钱，我们以前自己做的，发现比公司做的质量差远了，成本也不低。可以找上海海科生物问下，他们做酵母文库很专业，我们实验室在那做过好几个了，都能筛选到 ...

sonny_zan 我实验的关键步骤，现在就是不知道有什么办法可以阻滞LPS刺激后PBMC分泌TNF-alpha，考虑过用p38 MAPK抑制剂SB203580，后来查到一篇文献说SB203580对LPS刺激后p38 MAPK的活性影响甚微或无。请各位大侠给点意见啦！我快急死了~~~xiongran 拿抗体把PBMC表面的TLR4封闭掉试试看！pureclear 可以考虑用TNF-a的中和抗体 可以中和细胞产生的TNF-a R&D公司有本 ...

zjhua 请问，找到一个基因，其蛋白定位在线粒体膜上。如果要进一步研究其功能，有哪些实验方法？谢谢了！iscience 线粒体是细胞进行呼吸的主要场所，在细胞代谢旺盛的需能部位比较集中，其主要功能是进行氧化磷酸化，合成ATP，为细胞生命活动提供直接能量. 催化三羧酸循环、氨基酸代谢、脂肪酸分解、电子传递、能量转换、DNA复制和RNA合成等过程所需要的一百多种酶和辅酶都分布在线粒体中. 这些酶和辅酶的主要功能是参加三羧酸循环中的 ...

paper1983_1983 哪位前辈能告诉我用液氮研磨小球藻，提取RNA的具体步骤？军人的炮 1.准备新鲜的小球藻，必须是新鲜的，否则RNA会降解；2.准备小的研钵，每次到一点液氮，快速研磨；3.每次不要等液氮完全没有，大约研磨3-5次；4.最后专用的RNA提取试剂盒按步骤提取就可以了。5.最重要是时间短，快，低温，不要污染。cffhappy 小球藻是单细胞的，不用研磨液可以吧？好好 cffhappy wrote:小球藻是单细胞的，不用研磨 ...

圈圈儿2009 请问有哪位朋友养有p53野生型白血病细胞吗？若没有，告诉我细胞种类也行，我已经查了很多资料了，白血病细胞大多数是p53缺失型的，只见到几个实体瘤是p53野生型的。课题急需对照细胞，一时找不到，若能帮忙，千恩万谢！alixtardxy No, most leukemia cells, except CLL, have WT p53.The problem is that leukemia cells generally overexpress MDM2 to promotes p ...

girl19860627 在很多教材或资料中，写到端粒的功能是都说“能补偿滞后链5'末端在消除RNA引物后造成的空缺”，那么在前导连复制中5'端也需要RNA引物，它也会被切除，不也会留下空缺嘛，那这种情况怎么解决啊？版主freecell留言:提问的时候，要在标题说清楚问题。iscience 前导连复制中5'端RNA引物切除后，在原核生物中由DNA聚合酶I来补齐。dll20088002 书上说是由端粒酶参与解决的，该酶可提供R ...

yaopeng205 DNA复制时RNA引物是怎么切除的，切除之后又是那个酶作用，将引物部分补上的iscience Discontinuous replication solves one problem but still leaves one matter unsettled: the lagging strand will be composed of individual, unjoined fragments of DNA and RNA. This is where DNA polymerase I comes into pl ...