【求助】关于Ras-MAPK信号通路的问题
丁香园论坛
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我想用western blot的方法，研究临床的手术切除的脑组织病理标本中Ras-MAPK信号通路的表达变化的情况。请问具体要研究哪些指标呢？在标本处理的时候需要注意哪些方面？谢谢~~
期待中~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
首先，你要保证样本蛋白不被降解；第二，要正确匀浆组织样本与蛋白定量，这样才胡保证一样的量是一致的；第三，你要选择磷酸化的抗体来研究该通路，同时还要观察总蛋白是否变化，用总蛋白来观察磷酸化水平的变化，当然同时你必须要做内参GAPDH or beta-actin来检验上样量是否一致。最好多做几个蛋白的抗体，从上游激酶到下游的底物，最好买CST的抗体。
你好，楼上说的总蛋白是否指磷酸化和非磷酸化的MAPK的总和？
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