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luowen__ 各位前辈：小弟是刚开始做实验的研究生，老板要我检测组织中的BCL-2，Bax和caspase-3的表达。但是检测方法却没有具体说明。我想请教各位前辈有没有做过以上三种因子的检测，是用WB、RT-PCR检测，还是买专门的试剂盒检测，或者还有其他的方法？另外，什么方法检测比较便宜（我老板的经费不多）？小弟在这里先谢谢了！magichunter （1）经典的方法还是做WB，当然抗体比较费钱。（2）有专门测定caspa ...

summityoung 请问大家，用最普通的HEK293细胞能包装慢病毒码？谢谢freecell 从文献上看，已经有多篇文献报道了用HEK293来包装细胞。但是包装的效果可能没有其它293衍生细胞好。例如293FT来源于293细胞，293FT和293T细胞一样，都是转化了SV40大T抗原的293细胞的一个衍生物。这些细胞系具适宜的包膜和高表达反转录酶，能提高逆转录病毒的滴度。与293T细胞相比，293FT生长的更快， ...

s78293 求教各位老师：A基因被RNA干扰之后，B基因表达亦下调，说明A和B关系如何？或能提示其他什么？freecell 理论上说明B的mRNA水平直接受A调控。侠骨仁医 我个人觉得只能说明B基因可能和A基因有相关性，但是只通过简单的检测不能说明两者是直接关系还是间接关系，有可能是A基因直接作用于B基因，当然也可能A基因是通过C，D，E。。。等间接作用于B基因。lbqlxy 新手不理解二楼说的直接调控的意思是社么1 A蛋白直接 ...

coco0663 P53NM_000546.4Transcript Variant: This variant (1) is a dominant transcript and encodes isoform a.麻烦高手看下，这是野生型P53还是突变型P53？Transcript Variant是否突变型的意思，那么NM_000546.4 所转录的是否就是突变型的P53？谢谢侠骨仁医 Transcript Variant的意思是变异体的意思，应该不是突变的意思，看了一下，人类 ...

longytu NCBI上面查到了BAX的mRNA的几种序列，有αβγ三种类型。。。。为什么BAX基因序列相同，且都是人源的，mRNA为什么序列不同呢？？zjubell 大多数真核基因转录产生的mRNA前体是按一种方式剪接产生出一种mRNA，因而只产生一种蛋白质。但有些基因产生的mRNA前体可按不同的方式剪接，产生出两种或更多种mRNA，即可变剪接（alternative splicing）。人们发现，越是高等的动物，涉及mR ...

longytu 将两种荧光蛋白质粒导入细胞，观察FRET信号，怎么样给相互作用的两种蛋白定量？应该从哪个角度着手，荧光强弱，表达浓度？大家有没有更好的方法来活体细胞内定量蛋白质？版主freecell留言:自己提出解决问题的方法，然后请别人点评，这才叫“讨论”。你这个帖子纯粹就是求助，何故冠以“讨论”之名？freecell 质粒转染细胞后，可以通过流式或者WB，对蛋白进行粗略的相对定量。longytu 谢版主的回复。。。除了流式和WB ...

lily1218 请问哪位做过关于MTDH的干涉,求助能发挥干涉作用的siRNA序列,十分感谢!freecell 自己在文献里面找，或者dharmacon或者ambion的库里面找。majian0064 5
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可以交流一下你的实验吗？我的邮箱majian10@mails.jlu.edu.cn本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙 ...

xuchenmail 最近看了一篇文献，关于PIK3CA 基因突变的问题，文献说热突变位点在exon 9 (E542K,E545K) and exon 20 (H1047R)，但是我根据pubmed上的数据，H1047R已经在21号外显子了，这是怎么回事啊？是文献错了吗？还是有其他的原因？zjubell 1.这篇文献是什么时候发表的？对序列更新也是很正常的事。另外，这篇文献IF是多少？2.是否存在可变剪接，他的突变株，是否是其他的剪接体的外显子中的？3 ...

xuyq706 近年逐渐发现非编码序列突变在人类遗传病中发挥重要作用，此类序列突变如何致病？对其致病性如何研究判定？freecell 这些都是医学遗传学上的内容。建议楼主留意一下教材和中文综述。shilei5794749 In the human genome , variations of non-coding seqences including 5’UTRs，3’UTRs，promoters，introns ，long-rang cis-control elemen ...

mnidr 我想做拟南芥基因和烟草基因的NORTHERN，想选择β-actin作为内参，请问，在拟南芥和烟草中β-actin的序列是一样的吗？如果在更远的物种里呢，比如动物？？？？freecell 脊椎动物中不同物种的β-actin基因氨基酸之间的序列同源性超过98%。其它种属不清楚，你可以在NCBI里面blast一下。sherwing2009 可以在NCBI中，blast一下，相似性应该很高detector350 有一定相似度， ...

zj000718 想请问各位大虾 如果损伤致凋亡模型中，经典凋亡途径（caspase-3为代表）表达很好，还会有AIF等非caspase依赖性通路存在吗？(怎么验证他们之间是否存在交互效应呢)如果想从体内抑制caspase通路 什么方法比较可靠呢？基因敲除、局部注射siRNA、局部注射广谱caspase通路抑制剂？？？是否有比较确切的方法呢？？？请做过这方面研究的大神们指教，谢谢!!!freecell http://www.google. ...

lbqlxy 我的目的基因是 人 rab23 约2000bp请公司设计了3个siRundefined*段 位置分别在200 600 800处 本打算用来筛选出一个干涉效果好的片段在复习文献中发现 单个片段可能因为脱靶效应 影响实验准确性现在的问题是 能否用我现有的3个片段 组合成pool（三者各取三分之一的量组成一份）转染细胞？？ 有无组合的原则？？lmnsmu 一般不这样做。单个片段可能因为脱靶效应而无干扰作用，所以才设计数个片段，通过预实验检测它们哪一个干涉效果好，再用于 ...

mnidr 我现在要做一个有9个基因的基因家族的northern杂交，看一下这些基因的表达情况。需要设计cDNA的引物去P出一段500bp左右的片段来进行探针标记，但是这9个基因的同源性太高了，只能在cDNA序列的两端找到一些非保守的区域，但是实验室的一个师兄说，cDNA两端是不能设计引物的，因为RNA的两端是“可变区”在这些可变区设计引物，做PCR可能会出不来结果，就是说网上查到的RNA序列两端的几十个碱基是 ...

徐州往事 我想做大鼠的p38MAPK的试验，需要用到SB203580干预，请问在大鼠中，SB203580的给药途径和剂量，最好能提供相关文献。谢谢piaopiao5556 彼此彼此 ，我也做这个的 各个文献用量不一样，尤其关于大鼠的很少，看到一篇要用到50mg/kg。实验1小时前给药，哪来这么多钱啊？624980241 侧脑室 给药的量是 多少啊 ？ldmin 貌似从1mg/kg——10mg/kg都有人在用。。。大鼠。。。。我也在查，，我打算用1mg/kg ...

dnazyme 每个领域都有独特的研究方法，理解其方法的优缺点特别关键，大家是否对甲基化组（甲基化谱）感兴趣？列举了一些能够通过PubMed搜到的代表性论文。Profiling DNA methylomes from microarray to genome-scale sequencing.生物芯片的方法。DNA methylome of familial breast cancer identifies distinct profiles defined by mutation ...

霍一刀hxs 各位高手：对于某一特定的RNA，通过何种方法判断其所在细胞内的位置？多谢。zoeru2007 原位杂交吧。。。sbch1532 霍一刀hxs wrote:各位高手：对于某一特定的RNA，通过何种方法判断其所在细胞内的位置？多谢。原位杂交可以霍一刀hxs 多谢zoeru2007和sbch1532的帮助。呵呵hyjtb 免疫荧光能看出来么？霍一刀hxs hyjtb wrote:免疫荧光能看出来么？试试此方法，谢谢。bigbang_0_0 hy ...

lifengna 各位战友，最近在做雷帕霉素对mTOR通路的抑制试验，培养的是C2C12细胞，在分化阶段进行干预，其中一组单独添加50 um/L雷帕霉素，奇怪的是不仅没有抑制C2C12的分化，反而比空白组更好，这是怎么回事呢？排除实验操作中的问题。谢谢大侠出手相救！zhm1212 你做雷帕霉素50 um/L，这个浓度难道不高吗？有报道称全血中雷帕霉素安全有效的浓度窗为5．5～16．4 nmol／Lbubu88 你是用的哪个公司的雷帕霉素？ ...

tang1227 绿色荧光转基因小鼠的皮肤移植到普通小鼠身上N天后，肉眼看到皮肤明明还在，但是荧光显微镜下却看不到荧光，这是为什么？是不是荧光会自身淬灭？还是有其他原因？zjubell GFP小鼠荧光很强的，见附件，我这只是全身表达GFP的。在UV下照，裸露的皮肤都能看到荧光。怀疑你的皮肤已经坏死了，那不表达这个蛋白了，自然就没荧光了。bigbang_0_0 zjubell wrote:你的皮肤已经坏死了纠正一下，是你的小鼠的皮肤 ...

forevercan 想请教下园子里的各位xdjm们一个问题，那就是LY294002：PI3K/AKT阻断剂的问题，LY294002是PI3K通路的阻断剂，他到底是阻断了PI3K的蛋白表达，也就是说使PI3K的蛋白得表达下降了；还是阻断了PI3K蛋白的磷酸化，说明书只是说体外培养的细胞加入该阻断剂后，可以抑制AKT的磷酸化，但是对PI3K的蛋白及其磷酸化PI3K蛋白的改变未提及。请指教。forevercan 自己顶一 ...

lwq652 微生物中recA基因编码的是什么酶？他有什么作用，他与限制修饰系统有何联系？对他敲除有何用处？bigbang_0_0 DNA重组，敲除以后就不能重组了，质粒在里面就自由了。lwq652 bigbang_0_0 wrote:质粒在里面就自由了。质粒不会被宿主里面限制性酶酶切掉吗？bigbang_0_0 lwq652 wrote:质粒不会被宿主里面限制性酶酶切掉吗？这个跟RecA的功能没有关系，质粒要保持稳定，除了要敲除感受态细胞 ...