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honestrety 各位大大，本人想做DSPP基因在细胞分化前后的DNA甲基化状态的比较，有些困惑还望指教：1.是否应该要做全基因（包括编码区和非编码区）的DNA，还是只做cDNA就可以2.用哪种方法检测为好，个人考虑用重亚硫酸盐处理后行直接测序的方法，不知是否可行？3.引物设计上有什么需要特别注意的？小弟是新人，先在此谢谢各位大大不吝赐教了slytjiaofei 1.DNA甲基化研究的是转录水平对表达的影响，当然要用 ...

pozeta 我做的是梗阻性黄疸的大鼠模型，想要测定模型的肝细胞内钙离子浓度，有什么具体方法呢？希望园子里的前辈指教！！ylhuang0502 这方面的文献，非常多，自己先看看文献，这方面的文献绝对成千上万。常用的Ca2+ indicator如fura-2, fura-4，你如果要测绝对浓度，则需要钙离子标准液，要麻烦一些。pozeta ylhuang0502 wrote:这方面的文献，非常多，自己先看看文献，这方面的文献绝对成千上万。常用的 ...

sakura042 本新手欲研究nfkb引起内皮细胞凋亡的机制：是否通过jnk通路。这是否是一个信号通路串话的问题？我们用特异性抑制剂阻断nfkb后发现jnk活性下降，是否就能说明nfkb促进内皮细胞凋亡是通过jnk通路呢？还需要再阻断或者过表达jnk通路来反证吗？这个问题困扰了我好久，请教各位高手。sakura042 自己顶一下三叶虫 请问一下你是通过什么方法检测NF-kB的活性的?sakura042 我就做western ...

edwardellen 求助！！！本人菜鸟，最近开始接触凋亡相关信号，在HepG-2中做实验，有一点很困惑，HepG-2中的p53是野生型的还是突变型的？还是两者都存在？查了一些资料，有些文章之间表达的意思模凌两可。困惑啊！哪位好心的达人能给我一个确定的答案呢？另外，是否有做p53相关的牛人能告诉我P53在哪些实验用肿瘤细胞系中是野生型的，在哪些是突变型的？谢谢！谢谢！谢谢！doctormy HepG2是p53野生型的。如果你 ...

wxhong 大家好，最近加入了一个课题，由于本人经验很浅，于是上 来向大家讨教经验。我把我们的实验流程写下了，大家帮忙看看，给写建议，谢谢大家对细胞染毒----CCK-8法测IC50-----以 IC50为最高浓度递减对细胞染毒----通过Western blot做目标蛋白的表达量变化----使用重叠PCR法将TAP基因立连上目标基因----构建pcDNA3.1/重组载体----荧光定量PCR和 Western Blot检测组合蛋白的表达-----用TAP法 ...

lyc_urology 本人研一，需要做下调肿瘤细胞系中某一miRNA,并检测下游蛋白变化。但是用什么方法能特异有效地降低某一miRNA呢？Antagomir能用于细胞系研究吗？它与inhibitor比较哪个效果较好啊？除此之外还有什么其他方法吗？下调成功后，还想做MTT,流式细胞仪检测细胞周期，细胞克隆实验等，我应该选什么方法下调目标miRNA呢？恳请前辈赐教啊！Victor001 Ambion antisense inhi ...

yehuanlr 本人是新手，所以说得不专业的地方，敬请谅解！别人建立了cDNA文库，通过对文库的分析，分析了一些新的基因，在数据库中没有发现其同源序列，他只通过RT-PCR确定了这几个新基因在某些组织中转录，就此推断了该基因具有的可能功能。这些功能正好是我所想研究的，所以想研究这些基因。但是我所研究的鱼繁殖周期很长，全人工繁殖几乎还没有实现，而且没有卵子或精子给我做。请问各位前辈，具体我该怎么研究啊！！！敬请指导，十分 ...

dldenglin 求细胞核蛋白提取的试剂配方，及步骤，最好是亲自做过的方法，万分感谢dldenglin 咋没有人理我呢johndxy117 来源不明，貌似是某文献作者传授给师兄的，自己试过几次，纯度很高，在此表示感谢~密度梯度离心法提核蛋白试剂Buffer A: 1.0mM MgCl225mM KCl10mM HEPES(pH 7.5)protease inhibitors 1:200Buffer B: 0.25mM sucrose in Buffer ABuffer N: 1.1mM su ...

手指爱上烟 在下新手，可能这个问题比较幼稚，请路过高手帮忙！中间的序列代表什么？空白和加号有何区别？多谢！！吴佰霖 空白 很明显是两个位置的氨基酸不一致星号 氨基酸不一样，但是化学性质相近手指爱上烟 谢谢楼上的解答，在别处也得到战友的相似解答——两个残基容易相互突变，因此在比对的时候认为它们相似。序列比对是需要打分矩阵的，蛋白质比对请查询常用打分矩阵如BLOSUM62等等你就明白了http://www.uky.edu/Classes/B ...

bailamo27 这个问题可能是因为我基础不好吧，所以一直没弄懂，在研究中DNA/mRNA/蛋白水平的研究有何不同？为什么有些时候用PCR，有时候用RT-PCR，有时候用Western blot？例如，对于某个信号蛋白，文献报道有突变体，即在其某个外显子上有几个氨基酸的缺失，那么要研究这个突变的蛋白的功能应该在哪个层面呢？应该用WB吧，看其下游信号通路蛋白的表达变化？那有的文献又报道下游通路的关键蛋白的mRNA的变化， ...

antonio2001 调节细胞增殖 的信号通路有哪些？ 那个最重要！！sakura042 Akt通路？ylhuang0502 PI-3K/AKT肯定可以，但问题是，谁最重要？还真是一个好问题？！期待高手回答。chuckdouble antonio2001 wrote:调节细胞增殖 的信号通路有哪些？ 那个最重要！！这个问题好比,一个光棍在找对象时问别人"好女人都有哪些,哪个最好?":D:Dylhuang0502 chuckdouble wrote:这个问题好比, ...

佳杰宝贝 各位老师，我现在做sirna转染细胞，有个问题一直很迷惑，我查资料说脂质体2000转染4-6h后可换成含血清培养基，不影响转染效率，但是换液之后的新长出来的细胞里也含有sirna吗？kikie 该转染的能转染的已经转染了，所以换液没影响。firebaby2007 新细胞里没有，换液只是调整转染后细胞的生长状态，避免对细胞的伤害。happydong 细胞版正在进行siRNA转染答疑，可以去看看：http://cell.dx ...

biophysics hsa-mir-941-4MI0005766 在miRbase上没有相应的染色体位置什么原因？LBN chromosome: 20; Location: 20q13.33 See MIR941-4 in MapViewerbiophysics 谢谢，我已经得到了位置了，hsa-mir-941-4MI0005766206255084562550935+没想到miRbase也会犯这样的错误啊，呵呵本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意 ...

fukota 如果A抑制B,B抑制C，能否证明他们在一条通路上？A通过B抑制C?这种逻辑好像很奇怪耶~fukota 怎么没人说话哩bianbenjamin 信号传导通路实际是一个异常复杂的网络，是网络，不是单线图，一个蛋白与多种蛋白有相互作用，尤其是一些关键节点蛋白，如激酶，磷酸酶等等，所以你说A抑制B，B抑制C就说它们在一条通路上，好像没有什么意义。我们目前所知道的信号传导通路都是在大量文献总结和大量实验验证下推理出来的， ...

jing1209 HR includes gene conversion of the XhoI site without an associated crossover or deletion of one GFP copy by crossover or single-strand annealing.非常感谢！！！LoftyMan HR是不包括主动交换的相关基因交换或单GFP拷贝缺失，也是不包括单链变换的相关基因交换或单GFP拷贝缺失的XhoI区域基因变换jing1209 谢谢LoftyMan， ...

zhang7513 请问各位大侠！Myd88代表什么意思？请指教！谢谢！77472087 髓样分化蛋白-88 myeloid differentiation factor 88, MyD88happylife004007 髓样分化蛋白88， 它是一种接头蛋白分子，含有TIR结构域，在天然免疫中介导信号传导。zhouasd 细胞分化因子88.含有TIR结构的接头蛋白刘芯0220 髓样分化因子(myeloiddifferentiationfactor88, ...

sissiwubing 请问哪位高手知道LA-PCR是什么？zjubell Long and accurate polymerase chain reactiontakara的目录做的比较好，有这些介绍的。不妨去看一下。另外，请不要随意用‘哪位高手知道’这种话我是菜鸟，但是会用GOOGLE，就完全可以回答这种问题了。sissiwubing 看来你是自认为高手才进来的了，菜鸟zjubell sissiwubing wrote:看来你是自认为高手才进来 ...

aidiandian 请教各位师兄，师姐，caspase-3 抗体哪家公司的既便宜又好用啊？在下不胜感激···w_dennis 各位师兄师姐，本人同问该问题，还有caspase-9抗体？nccunccu cell signallingseagate cst有sample kit，带全了，每样40微升selenium Signalway antibody提供免费试用哦，xsk_bio@163.com环佩从容 cell signaling原装最划算。本文由丁香园 ...

不要太懒哦 请教各位高手，如果在细胞的消化传代过程中，我想以EDTA替代胰酶对细胞进行消化的话，EDTA的配方？？？浓度？？多谢！！佳杰宝贝 EDTA可以代替胰酶吗？黑糊糊2000 EDTA 不能代替trypsin,EDTA是螯合剂结合钙离子的，钙离子可以抑制胰酶的作用，所以采用胰酶和EDTA一起来作用，当然EDTA 因为对螯合细胞结构之间的钙离子的作用，所以对细胞有一定程度的离散作用，一般多用的浓度是0.02% 可以用不含钙镁的平衡盐溶 ...

山百合 最近想测细胞内钙离子的变化，由于实验室条件有限，只能去外单位用别人的共聚焦显微镜看。但我的老师提出了问题，钙离子浓度是实时变化的，是否在处理之后有累积效应？我担心的则是处理后用Fluo-3 AM负载后到去外单位检测中间至少有半小时到1h，胞内钙离子会不会变化？（因为我的处理因素是磁场）这段时间是否荧光会有淬灭？我想了想，是否可以用固定剂将细胞固定上？查了些资料，貌似钙离子都是要借助通道或载体来运输的，固定好的细胞 ...