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幽幽草sky 有谁用流式细胞仪检测过STAT-5磷酸化程度呀，求教具体方法，结果怎么样呀？kern6549 1、制备样品细胞的单细胞悬液。2、多聚甲醛固定细胞。3、打孔剂在细胞膜上打孔。4、标记荧光素偶联的抗磷酸化STAT-5抗体。5、流式上样分析。Crucial role of interleukin-7 in T helper type 17 survival and expansion in autoimmune disease. Nature Medicine. 2010. 16(2):1 ...

tianlang126 :(:(新手最近想做细胞自噬，想知道beclin1在自噬中起个什么样的作用？是不是表达beclin1就可以认为细胞发生了自噬？它和凋亡、坏死、炎症等有什么关系？它是通过什么信号通路起作用？希望各位大虾解解惑:8):8)李一晶晶 你好，目前我也在做， 请问你做pcr没有啊，187338186，我的QQguodanni tianlang126 wrote::(:(新手最近想做细胞自噬，想知道beclin1在自噬中起个什么 ...

宝贝儿妮妮 请教各位大虾，我做的是AIF（凋亡诱导因子），激活后从胞浆释放到胞核，与DNA结合，引起DNA的片段化那我是不是必须得提取核蛋白，来证实发生了核转位？要怎么来提取效果好一点？时间紧急啊，非常感谢lily628 买抽提核蛋白的试剂盒，国内的或国外的都行．xhjggl 上海生工有 021-37772436细胞核蛋白质提取试剂盒Nucleoprotein Protein Extraction Kit产品说明：本试剂盒提供独特的组份， ...

观天 如题，查找某种组织中特异性表达的全部基因，谢谢！超级风 用表达谱芯片就可以做了观天 谢谢，估计找现成的结果不一定有。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

sfflpf 我想问一下大鼠与豚鼠的基因序列是否同源，研究某种物质的基因表达，对于这两种动物，可否共用一对引物？谢谢吴佰霖 具体基因具体分析,大鼠与豚鼠就像人与大猩猩一样zjubell sfflpf wrote:我想问一下大鼠与豚鼠的基因序列是否同源，研究某种物质的基因表达，对于这两种动物，可否共用一对引物？谢谢既有同源区，也会有不同源区。总体来说，很接近了。一般来说，维持功能的部分应该是比较保守的。因为不清楚你到底指哪个基因。 ...

恋梅时节 http://www.mirbase.org/lide658 你想问什么问题啊？是具体的使用方法吗？你要查找什么？恋梅时节 lide658 wrote:你想问什么问题啊？是具体的使用方法吗？你要查找什么？miRBase的用途，最好详细点的；如果没有，能不能给我解答下，用miRBase找靶基因的方法？nicolewendyyang 网站上写的还是比较清楚的吧，自己看说不定比在网上问更加容易哦雨水占 请问楼主miRBase怎么预测靶 ...

sunside 请教一个问题。我查关于ALU、LINE-1基因甲基化的检测方法，好像没有用MSP的，国内做这两个基因的好像挺少。请问这两个基因甲基化可以用MSP检测吗？？？freecell 建议看看这篇文章： http://nar.oxfordjournals.org/content/32/3/e38.full或者搜索：http://www.google.com/search?source=ig&hl=en&rlz=&=&q=line-1+met ...

dnazyme 全基因组瓦片芯片（whole-genome tiling array）谁用过，给大家讲讲。8D有谁了解这个技术的发展历史和特点、用途的吗？http://en.wikipedia.org/wiki/Tiling_arrayfreecell Whole genome tiling arrays (WGA) use array-based hybridyzation to scan the entire genome of an organism. This is achieved by using a s ...

lichangeric 各位老师在下打算设计一个试验大致思路是这样的：药物作用于肺癌细胞Ras-Raf-MEK-ERK信号通路调控A基因表达。在下第一次学习搞通路，参考了了一些文献，但是还有不明白。请大家帮忙分析一下 请给些中肯的建议，我这个试验设计有何不妥？步骤？还有要检测几个激酶比较好？检测哪几个？通路应该设对照组对吧？也就是检测未用药物干预的和干预后细胞通路中的激酶表达做对比？ 呵呵 在下在这方面很弱，请大家指教。为表示感谢 ...

sunside 大家好，现在刚开始查这方面的资料。有很多疑问。想问一下做过或在做这方面研究的前辈，请多多指教。1.我想做血液样本的MSP，大概100个样本的话试剂大约需要多少费用？2.请教各位前辈，一般大家单纯做MSP的话，周期多长？因为快毕业了，所以担心较难的话，可能做不完。zjubell 这个不难的，完全可以自己做。你要测几个位点的甲基化，1个跟50个位点，价格肯定是不一样的。一.先提血液基因组DNA，建议用kit吧，bl ...

springhello 我想使用流式细胞术分析lentivirus转染293T后滴度，MOI怎么检测？zhujoker 你就使用1ml的病毒上清感染10的6次方个细胞，然后按照流失的结果比值就可以确定你的病毒滴度了。springhello 谢谢你有具体的步骤吗？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

iamgarfield 如果某受体的酪氨酸磷酸化位点众多，外加某一刺激因素，检测该受体是否发生磷酸化，一定先要把所有该受体的酪氨酸磷酸化全部沉淀下来，再用该受体的抗体去做WB（或者反向做）。如果只是把与我要研究的下游信号途径相关的几个磷酸化位点挨着做WB检测，能行吗？jz2298 买抗体就可以， western blotiamgarfield 哪种做法更全面，更能说明问题呢？因为看到国外文献绝大多数都是采用的IP,不知道是出于什 ...

小猪阿姨 请教各位大侠，本人想建一些列的肿瘤细胞的文库，不知道选择噬菌体文库，还是酵母菌文库好，噬菌体文库是原核表达，酵母菌是真核表达。请分子生物学方面的大侠指教一下！小猪阿姨 请教请教啦！小猪阿姨 请教请教啦！小猪阿姨 没人指教下吗？dnazyme 你的实验目的是什么？噬菌体文库是一种展示短肽的文库，寻找体外的分子间相互作用；酵母菌双杂交文库一般用来模拟体内相互作用。原理和应用差别很大。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意 ...

秦奋 为什么HIV-gp41与原核PET28a质粒构建后，行诱导表达，SDS-PAGE无结果，而WB却有结果，这种情况怎么回事？（构建后测序同源性达95%，而且已酶切认证构建成功） 谢谢zhujoker “SDS-PAGE无结果，而WB却有结果”是什么意思，你表述清楚一点，要不人家会有疑惑的。其实这主要看你是否诱导成功。个人认为还有就是你在原核里面表达，作为包涵体存在形式，你是否将蛋白提出来了呢？woxingwosu 首先，我有点疑问 ...

lsdcfhyj 用双荧光素酶报告基因检测系统进行报告基因检测时需要共转染两种荧光素酶报告基因质粒，但是我不知道两种质粒间的比例是多少，有哪位前辈做过这方面实验的，请帮我指点一下，谢谢了xxshc 这个比例没有特别的规定。我用的pRL－TK（海蜃素荧光素酶）的荧光值要高一些，我转20ng/孔（24孔板），作为内参.pGL3（萤火虫荧光素酶）的荧光值低一些，我转0.4ug/孔（24孔板）然后0.4ug的调整质粒。这样的话，萤火虫荧 ...

bobbymm shRNA要做连接的时候发现 annealing buffer 没有了。可以用 PCR buffer代替不？zhujoker 就用普通的去离子水就可以了，没有那么复杂。不要想当然得使用PCR buffer。bobbymm 用的是TAKARA的PCR BUFFER ，连接的还不错。已经送去测序了。谢谢回复。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongco ...

刘淼清 在园中看到关于LY294002和Wortmannin区别。（建议用LY，主要原因有两个，一，Wortmannin相对来说要贵好多；二，更重要的，Wortmannin半衰期很短，如果没记错的话大概只有8－10小时，所以如果处理时间久的话，药物浓度下降很快。有篇文献研究了Wortmannin的半衰期，有兴趣可以去查查看，应该是2005年的文献。 ）这篇文献不知有哪位战友知道。第二 LY294002的半衰期是多少？？？yxj3 ...

fanghuili2007 S100A8/A9 induces autophagy and apoptosis via ROS-mediated cross-talk between mitochondria and lysosomes that involves BNIP3.Ghavami S, Eshragi M, Ande SR, Chazin WJ, Klonisch T, Halayko AJ, McNeill KD, Hashemi M, Kerkhoff C, Los M.Cell Res. 2010 Mar;20(3):314-31. Epub 2009 N ...

mccanny 如题，谢谢mccanny 再次求助kern6549 说明细胞增殖增加。ze_quan kern6549 wrote:说明细胞增殖增加。晕，要结合具体细胞生长效应吧俺的也是s期细胞增多，但是抑制增值的，只能说阻滞在S期了吧，具体原因在找找信号通路吧迷者的悟 我的也是。。。不知道怎么回事。。药物处理后细胞S期增加明显。。。G1 G2期变化不明显。。不知道是何原因。。文献该药物可将癌细胞阻滞在G2期。。。希望高手能够解释一下。。作用时间问题 ...

heroyl 本人已知某基因的部分片段，想问下高人能否不做race，直接和基因组序列对比得到其全长！吴佰霖 直接和基因组序列对比得到其全长,是种分析做到实验时候,还需扩增出来zjubell RACE是一种方法，一般是基因未知的情况下，用此方法得到基因全序列。如果你能通过部分序列进行比对获得全序列，那说明库里已经有全序列在了，那你做此有何意义呢？如果以前没人测过全序列，你知道某部分序列，那可以通过RACE的方法获得全序列，然 ...