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郑哲 我现在在做microRNA的生物信息学预测，有一个问题想请教，通过blast比对，得到了候选的EST序列之后，做二级结构预测时是用整个EST序列进行折叠，做二级结构预测，还是截取EST序列中，含有比对上的成熟micRNA序列的部分序列进行结构预测呢，因为我发现截取一部分和用整条序列进行折叠，得到的发卡结构不一致，谢谢！！！keathy0505 当然是用成熟microRNA序列部分做预测啊！郑哲 谢谢，请问你也是做小R ...

不安分得土壤 我做的实验是抗肿瘤药对肺纤维化干预作用，研究目标是验证抗肿瘤药是通过MAPK哪些通路起作用，分组如下：A 空白 对照组B TGF刺激组C TGF+ERK阻断剂PD98059D TGF+JNK阻断剂SP600125E TGF+P38阻断剂SB283580F TGF+抗肿瘤药我的困惑是 1：前期PCR做出来检测1、3型胶原SMA居然没有差异性，考虑为药物降解原因或者TGF配制时未按照说明书用柠檬酸活化 2：做WB检测P—ERK，P--P38、 ...

子尤的翅膀 各位同学，请问一下提取组织的核蛋白 那组织必须是新鲜的吗？如果保存在-80度近1年的可以用来提取核蛋白吗？谢谢各位啦xhjggl 没有反复冻过应该可以，子尤的翅膀 谢谢这里面没有提到提取组织核蛋白的要求 如果反复冻融是不是都降解了呢？selleckchem01 如果-80度一年的话，应该可以提取出来~但是反复冻融后，蛋白当然会比较容易降解~子尤的翅膀 谢谢啦本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实 ...

sunyuzhu10 包装质粒是pMD2.G pMDLg/pRRE pRSV-Rev 过表达载体是pLVX-IRES-ZsGreen1这样的四个质粒能包装出慢病毒么？请有经验的战友帮忙看下暴君 可以的644414915 pMD2.G是VSVG吗我现在正在包病毒，别人给了我这四个质粒，别的什么都没说，我不知道该怎么包装装染谁有具体步骤转染质粒时量如何把握本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都 ...

郑哲 我要做microRNA成熟体的荧光定量，内参为U6，现在有一个问题很纠结：我在做反转录时候，因为要做特异性的反转录，请问内参和小NRA是放在一个管子里，在同一个体系里面一起反转录出来，还是要将内参和小RNA分别反转录，如果一起反转录出来，反转录体系要怎样加呢，反转录过程中会不会有竞争！谢谢，急待回答！！！！ytxy 是在同一个管子里逆转录的，这样才能保证总RNA是一致的。因为引物序列不一样，结合的模板也是不同的。另外按 ...

dali321 在Bid 诱导的caspase-8 活化中 高浓度的药物中caspase-8蛋白的表达是增多还是减少右翼天使 在Bid 诱导的caspase-8 活化中 高浓度的药物中caspase-8蛋白的表达是增多casgene 不受影响。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

向左还是向右 我是第一次做实验，想从人的外周血中（加过抗凝剂的）取血清，然后用淋巴分离液提取单个核细胞，从单个核细胞中同时提取RNA和蛋白，不知有没有前辈做过类似实验，请赐教，十分感谢向左还是向右 我用的TRIZOL同时提取的RNA和蛋白，可是蛋白怎么也溶解不了，不知有没有好办法？大胜仔 首先呢，加过抗凝剂取的是血浆，不是血清，我也查了查“Ficoll密度梯度离心法”对于单个核细胞的提取这个方法好像好点儿本文由丁香园论坛提供 ...

蓝莓之夏 各位大侠：我做的是关于microRNA mimics 转染的实验，正在做预实验。之前从基因芯片中挑选出了microRNA, 然后合成了他的类似物，也就是mimics.。 我在转染进去24h之后，还要加入TGF-β进行刺激，观察转染的作用。现在我的问题是： 我选的microRNA mimics 是对细胞有保护抗纤维化作用的，TGF-β 是诱导纤维化作用的。转染进去又加入TGF之后，为什么转染了mimics的细胞的形态都是纤维化的摸样，而没有 ...

咪咪土拨鼠 各位大侠好，我是外科学的医学生，现在在实验，提的问题很弱智，大家勿拍。我做目的蛋白的western, 发现其在处理组有明显的分子量漂移，初步推测其为磷酸化改变---因为再同时加了一种激酶的抑制剂后，这种漂移消失了。但问题是，怎么证明它确实是磷酸化呢？我查了查文献，目前常用的是放射性P实验和质谱分析什么的，但这对于我们的条件和经费来说，似乎不太可能。我的问题：1. 是否可以在用RIPA裂解液提总蛋白时，加入蛋白磷酸酶（大 ...

roy2929 小弟新手 实验等等都不怎么懂，希望高手们帮忙。做TUNEL检测凋亡，除了本身没有发生凋亡和实验操作原因，还有什么可能会没有信号？比如通过其他不能用TUNEL检测到的方式发生了凋亡？不胜感激qwer_214 TUNEL是一种很特异的检测凋亡的方式，它主要检测DNA特异性的断裂，恕我资历比较浅，我到目前还没有发现其他用TUNEL检测到的方式发生了凋亡。roy2929 qwer_214 wrote:TUNEL是一种很特 ...

cynthia_rui 求助！！！细胞转到6孔板培养后长得一直很慢，目前贴壁50%左右，能提RNA不？是不是一定要等到长到80%才能提啊？有没有什么具体的操作办法让细胞在胰酶消化时损失小一点？请各位大侠指导，感激不尽！selleckchem01 1，六孔板的细胞长到50%会有点少，不过如果很着急也是可以提取的2，楼主可以用PBS洗掉培养基后，不用胰酶消化，直接在六孔板中加入trizol裂解~zitong1983 selleckc ...

aoe3721 请问 在信号转导过程中 参与信号转导的各种蛋白与通路激活前相比有什么变化啊。其在细胞内的含量会发生改变吗。还是仅仅是发生蛋白结构上的改变。谢谢。selleckchem01 两种情况都可能发生~细胞内含量变化的例子：当Wnt蛋白于细胞表面Frizzled受体家族结合后的一系列反应，包括Dishevelled受体家族蛋白质的激活及最终细胞核内β-catenin水平的变化。 Dishevelled (DSH) 是细胞膜相关W ...

meilixue 如题。poly(rC)中的r代表什么？谢谢。terryxiaolei r代表RNA上的胞嘧啶，即核糖核酸胞嘧啶，不带r的是脱氧核糖核酸胞嘧啶呗……poly(rC)即为多聚胞嘧啶xuezhishui 我觉得poly (rC)应该就是polyribocytidylic acid的缩写，同样的poly (rI)就是polyriboinosinic acid的缩写。其中r代表ribo。不知对否？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的 ...

zhangyinghua8106 研究A药处理对经典Wnt/beta-catenin信号通路的影响，结果发现A处理以后gsk-3 beta 总蛋白量减少，磷酸化gsk-3 beta也减少，而beta-catenin总蛋白增加，磷酸化beta-catenin也增加，这该怎么解释呢？不能说明beta-catenin的增加是由于gsk-3bata的减少吧？我该怎么解释这两个分子之间的关系呢？焦急等待中！望高手指点，谢谢了！！zhangyi ...

吃鱼不吐刺 有哪位前辈制备过AGE-BSA？我制备的AGE-BSA三个月已经出现明显褐色，但是由于不知道如何透析，及怎样测定制备的AGE浓度，实验一直不能进行……哪位战友能够告知下，不胜感激johnchen416 你是如何做的？透析可选用密理博的透析袋，孔径接近但必须小于白蛋白分子量67kd就可以了。用透析袋装AGEs-BSA，封闭严实，放在PBS液中，磁力搅拌器搅拌过夜即可。如果费用可以，可以直接买管子低温超速离心。su ...

hetingcopy 大家好，我现在正在做慢病毒包装，用的是CLONTECK的包装系统，第一次感染293T细胞后，荧光很亮，48H后收集病毒上清，离心后冻于-80度，一天后感染靶细胞，什么都没有？请问大家是怎末做的？谢谢。大鹏鸟 看到荧光并不代表包装成功,它代表的只是你的质粒转进去了。做慢病毒包装时必须要搭配好几个质粒的比例。转染之后要能看到细胞形态的病变。收集上清的时候要注意尽快分装保存。有可能的话最好把细胞也裂解一下， ...

涛声依旧神游天下 你好，我想问下，对于转膜，干转，半干转，湿转，它们适应的分子量是多大的蛋白呢？比如我的目的蛋白是192KD，那么用哪种转膜方式较好呢？什么条件？依据是什么呢？谢谢cfss0925 现在一般都选择湿转的吧。selleckchem01 需要湿转3H以上，这么大的分子半干很难转过去；如果蛋白丰度有比较低的话，基本是检测不出来的~cherrycherry 湿转，90V，120min，依据不同转膜液配方，转膜时间可能有所不同 ...

86964109 请教大家，如果想检测某种miRNA的表达，而miRNA本身有5p和3P两种成熟体，那我设计引物是需要针对两种成熟体都设计么？还是任意一个都可以呢？谢谢！！行云流水19880112 现在我也有同样的困惑，不知您最后是怎么确定的？？？谢谢biohh 自己设计有点难度，很容易就把pre-miRNA检测出来了，建议你购买一些公司里设计好的引物那样比较好操作结果可信些！他们的引物是分3p和5p的。jmj_011 但是3p ...

wudan821 最近一直在研究mTOR信号通路，看了很多文献发现这个信号通路是目前抗肿瘤的热点，很多文献已经明确指出mTOR的下游分子是P70S6K和4EBP1，但是在这 两个下游分子后就很少有人去研究了，我对这个信号通路也只是了解个皮毛，想求助战友谁知道在这两个下游分子之后还能研究什么？这两个下游分子是这个信号通路的终结吗？我最近看了很多信号图谱，发现JAk-PI3K-AKT-mTOR-STAT3这一信号通路，这 ...

dangyonghui2 大侠们，我现在用的是promega公司的cAMP测定试剂盒，按照说明书上面要求做的标准曲线，可是我做了几次出来和说明书上面都不一样，是怎么回事？求解！！！现在有测cAMP的同志们一起讨论下，我的Q:1186130200bianbenjamin 我们用的是PE的盒子LANCETM cAMP 384Kit（PE公司）1.检测原理：该试剂盒是一种时间分辨的荧光共振能量转移免疫分析，该反应是一个竞争免疫反应，即 ...