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liteng1117 求助:构建好了重组腺病毒进行蛋白表达，分子量是14kd，5%的浓缩胶70v，12%，或15%的分离胶110v，跑90min。湿转：100v，90min。封闭用5%的脱脂奶粉，封闭3h（因为背景深，以为封闭久会好些）。一抗1:3000，4度过夜，二抗1:5000，孵育1h，洗膜都是用TBST漂洗15min ×4次。但是显影后背景特别深，虽然可以看见目的条带，但还是有一些非特异性的条带出现，不知道是封闭出问题还是一 ...

firemoth 想请教下各位老师，在做脏器在体实验时，检测GABABR时，做总ERK检测，就可以证明ERK是被GABABR介导的，不是被其他受体介导；而检测5-HT受体时，做总ERK检测，不能证明ERK是被5-HTR介导的？在体实验怎么证明证明ERK是被5-HTR介导的？（动物已经处死，实验组织已经摘除保存了）必须要通过培养细胞来证明吗？zhanghai123 你好，看了你的帖子，有点不是很清楚。有几个问题想问一下：1 GAB ...

lingdestar 想用western检测一下刺激后的细胞外释放的蛋白，请教各位高手，怎么浓集培养基呢？liubingood 使用冷冻干燥机可以浓集培养基并且保持培养基中的蛋白活性，原理是将含培养基冷冻到冰点以下，使水转变为冰，然后在较高真空下将冰转变为蒸气而除去的干燥方法。培养基可先在冷冻装置内冷冻，再进行干燥。但也可直接在干燥室内经迅速抽成真空而冷冻。升华生成的水蒸气借冷凝器除去。这种方式的使用的前提是你们实 ...

sosjgl 求助 那位朋友做过配体和受体关系的研究啊我现在要证明一个产物是一个已知受体的的配体，需要怎么证明？我想首先证明他们之间的亲和力，就是用这个受体已知的配体来测他们的竞争关系。求高手给点建议，或指点下方向。 有做过这方面的请赐教，如果有需要的话，本人可提供著名高校代理作为感谢。hxzcf 如果做的是体内实验，先分组，第一组用配体，第二组组用受体的激动剂，第三组用配体+受体的抑制剂。观察行为学改变，如果第一组和二组得到相 ...

玛利乐乐 最近做某种抑癌基因促进肿瘤细胞凋亡，做了western检测，caspase3，8，9，fas，BID，cytc，发现fas上调，caspase8，3下调，说明fas通路活化；BID下调，caspase9下调，我觉得应该是caspase8通过BID裂解激活线粒体通路，但是测cyt c却是下调，按理应该线粒体通路激活引起cytc释放，应该增多才对啊，这样解释不通，请高手指教是哪里的问题呢？可以不考虑cyt c吗？那怎么解释 ...

hql219 HS-5细胞有谁养过，传代时大概需要消化多长时间，几天传一代？ysgoodluck 楼主，你养的HS-5是用的什么培养基啊？wjling2550 我前段时间养过，刚开始差不多三四天、四五天传一代，消化的时候也好消化，大约3分钟吧，后来就长得比较慢了，有一次是一周多才传一代wjling2550 培养基用的是H-DMEM本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙 ...

华仔123456 如题求助？在线等华仔123456 受体的表达量在哪些情况下会有改变呢？yyc5243 应该是不会变化的吧。某种受体在某一细胞或一定组织内的数量是有限的，所以即使加大配体浓度也不会增加结合值。正常情况下受体是无活性的或者不表达的，随着细胞内某些机制的改变，受体的活性增加或者说受体活化的数量增加。或者本来不表达，但是刺激后使受体表达了（受体也是一种蛋白，蛋白的表达必然要有转录和翻译）。我的理解是这样的wan ...

frankwolf 各位高手：小的新手上路，恳请各位不吝指导。小的想用带有绿色荧光蛋白的真核表达载体将一个长度在600-1000bp的cDNA和一段长度几十个bp的shRNA转染入人类的细胞中，希望目的基因能够比较稳定的表达，并且使得细胞能在激光共聚焦显微镜下显示绿色。能否恳请各位分别为推荐cDNA和shRNA各推荐一种比较常用的、可行性比较好的、不太容易发生意外情况的带有绿色荧光蛋白的真核表达载体呢？多谢各位 ...

huabinbjh 本人是新手，刚作完测序，不知道如何将测序结果的文本格式转化成seqman识别的abi格式，请求帮助。谢谢sherwing 可以用olig2或DNAman打开文件后，另存，再修改格式allen11121147 文本格式的是无法转化成峰图文件的啊，测序时同时生成两个文件：一个是文本格式的碱基序列，另一个是峰图文件。一般测序公司两个文件都会发给客户的。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯 ...

cwfred 如何找到一篇文献的Supplementary Figvshouxiao000 我也遇到和楼主同样的问题？qzyjsu 这个一般在下载文献的主页上有，一般在右侧，仔细找下即可qzyjsu vshouxiao000 wrote:我也遇到和楼主同样的问题？这个一般在下载文献的主页上有，一般在右侧，仔细找下即可本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：s ...

简繁 请教做糖尿病细胞实验3T3-L1、L6、HepG-2细胞的战友，你们用的是哪种胰岛素？我原来用sigma牛胰岛素I5500这个货号的，后来断货了，请教战友换用哪种胰岛素好，如果有相对成熟的条件请赐教，非常感谢！另外国内大细胞库一直找不到合适的胰岛细胞株，请教各位战友用的是哪种，谢谢！lzyn 同学我就是买的sigma的这个胰岛素，我想知道以前你是怎么配的？能告诉我吗？》我的QQ530549736 希望您多给指点。我是研一 ...

已寒 各位前辈，我现在做western，NF-kB的总是出现2条带，有人说有一条是非特异性着色，但我发现两条带之间关系很密切，请看图，不同处理组的两条带中，一条升高则另一条会降低，存在这种关联性，请高手指点。sunnyun 楼主两条带是在目的条带位置处吗？我最近也做p65出来两条带，但都比目的条带小，不知道是不是降解了，我用的老鼠肝脏组织，有一个多月了，保存在-80度冰箱，楼主帮忙分析看看有没有降解的可能啊？snowden0 ...

强少1988 请问细胞培养使用的Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) (Gibco)，写文章的时候需要填产品公司，产地，国家这三个信息。大鹏鸟 GIbco已经被Invitrogen收购，可以写Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, Invitrogen, CA, USA)，或者写(Gibco, Carlsbad, CA, USA). 大鹏鸟 GIbco已经被Invitrogen收购，可以写Dulbecco's M ...

202zhaozhao 我买的DNASE1上面写着15000u是什么意思啊？麻烦知道的能告诉我，谢谢大家roy2929 u=unit酶都是用活力单位表示含量 一般不用摩尔质量selleckchem01 1U代表在1min内催化1微摩的底物发生反应的酶量~superldd 您好，我想请问，15000U等于多少mg呀，因为稀释时要求1mg/ml.谢谢啦本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都 ...

yangguili 我今天赶上特殊情况，二抗没有了，请问磷酸化的一抗能孵育两个晚上吗？会不会有什么不好的影响？请各位大侠指导一下！万分感谢！selleckchem01 二抗是很便宜的东西，去别的实验室借一下就好了~毕竟一次做完结果会比较好~yangguili 谢谢楼上的同志本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

xiayuxue 请问小分量的蛋白比如14KD,用三抗是不是更好？xiayuxue 用 三抗有什么优势啊？请大家帮帮忙，wb怎么也做不出来小分子量的roy2929 三抗一般就是放大信号吧做不出来的原因很多啊 不说详细点不好讲xiayuxue 我就是想请教大家，在什么情况下才用三抗？ronaldo_zj 楼主您好！我也做过小分子量的蛋白，大概是15kD左右吧，我没有三抗，我自己的经验是：1. 电泳的时间一定不要太长，我把积层胶制的很厚，分离胶比 ...

淹没尘埃 我做的实验模型是血管性痴呆 ，需要把海马组织匀浆，然后从中提取线粒体，然后做COXII的RT-PCR,还有要用线粒体做别的三项检测，也不知道这个线粒体的量能不能足够哦，请问在这个海马组组织匀浆过程中，需要添加什么试剂吗？比如说线粒体提取剂什么的？请指点！谢谢！爱在进行时 下面给出一点参考步骤，希望有用：一、原理细胞内不同结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不相同，根据这一原理，常用不同转速的离心法，将 ...

liuzm021 如题，谢谢。xiaojianmao 都是离子，应该可以吧……建议灭完分装……看到染了直接丢掉……xiayuxue 可以呀，为什么不能？roy2929 补一点超纯水进去再灭吧，会有蒸发~liuzm021 多谢各位，我自己也觉得可以。不过最好还是少灭几次吧本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

firemoth 求助5-ht1a的下游信号通路图，如附件图片形式的，我查了好久都找不到，寻求大家帮忙，不胜感激。gongtj 不知是不是这个：http://www.genome.jp/kegg-bin/show_pathway?hsa04726lz到KEGG里好好找一下呢。firemoth gongtj wrote:不知是不是这个：http://www.genome.jp/kegg-bin/show_pathway?hsa04726lz到K ...

xiaoleishi 我现在做的是小胶质细胞，要做akt信号通路，但现在查到akt抑制剂有很多种，应该怎样选择？谢谢。pennhmp116 一般来说某个靶点抑制剂的研究也是不断进展的，随着化工技术和计算机模拟分析模拟技术进步，许多靶点上新的抑制剂都比早期的更为有效、更加具有特异性，水溶解性更好、性质更稳定等优点。除了靶点的活性外，其毒性也是决定它是否现在应用于动物体内实验，将来应用于临床成功与否的关键。如NF-kB抑制剂 ...