全部

lesenhower 想到一个问题：体外切断了正常的血供，器官的营养交换取决于简单的灌流。对于血管有畸形的器官，体内会因血供不足发育异常；如果将该器官放在体外培养，由于不依赖血管了，而直接由培养基灌流提供营养，是否就不会存在“血供不足”的问题了，所以反而可能发育正常了？换个说法，对于体外培养的器官，其内部血管是否存在，正常与否还有区别吗？有没有人能给这个问题以确切的答案？谢谢！孤单走着 版主太小气，2叮当，过年啦！整个50叮当。 ...

wliangl 求助各位达人，谁能帮忙分析一下这个问题：使用mCherry质粒（红色荧光质粒）在24孔板转染血管内皮细胞。三天后使用Nikon的荧光显微镜，Texas Red滤镜系统观察：阴性对照（未进行转染，直接培养）和转染细胞同时出现红色荧光，强度相当，转染组全部细胞都出现红色荧光，对照组部分细胞出现，部分细胞较弱，目测感觉全都不像红色荧光表达。问题排除：1. 使用其他滤镜系统没有荧光（GFP，DAPI，CY5）2. 孔板其他孔和 ...

wltxj 求助：为什么转膜后会曝出GST的条带来，请高手指教! 多谢xindu19881988 是不是本身应该是融合蛋白的，但是会有GST单体存在？我也是这样，不知道为什么。xinyinhancidian 如果是这张胶上GST及其融合蛋白进行转膜，Western blot肯定会有非特异性条带，因为上样量太大了。做GSTpull down之前有必要对自己使用的GST融合蛋白的量做一个定量。纯化GST融合蛋白时，有些容易降解的蛋白质会 ...

nedvedtnt 请问各位高手，有没有构建过表达磷酸化ERK1/2的质粒？因为我所要验证的通路是对ERK1/2磷酸化的抑制作用，必须要一个能够过表达磷酸化ERK1/2的质粒进行干预，请问能否构建这样的质粒？liubingood 表达磷酸化ERK1/2的质粒倒是没听说过，但是ERK1/2的质粒应该是有的。我们曾经构建过akt的强制表达质粒。为何要表达呢？可以采用一定的刺激因子使磷酸化ERK1/2表达升高，再用你的因素处理 ...

zhuzhu007 请问在做细胞免疫荧光时，用Tween20打孔，也就是做细胞通透的时候，浓度是多少？rongjiansu 这个要靠实验去摸索，一般用0.1% 的浓度处理5－10分钟不等。做微管最多可以用到10%。关于如何优化，Nature protocol上面有一篇文章，专门讲免疫荧光实验条件的优化zhuzhu007 rongjiansu wrote:这个要靠实验去摸索，一般用0.1% 的浓度处理5－10分钟不等。做微管最多可以用到10%。关 ...

新手上路多包涵 在网上查了一些资料看，但还是不大明白，请教高手们提供点资料学习学习。另外这个东西，现在研究的热么?呵呵。谢谢rongjiansu 對話的英文為cross talk，指的是不同信號通路間的相互作用，通常是關鍵的調控分子特別是Kinase之間的相互作用，一直是細胞生物學研究的熱點問題。另外還有convergence和disperse，是信號通路三大特性。liubingood rongjiansu wrote:對話的英 ...

狼伟人坯子 由于课题需要，需要做乳腺癌方面的通路研究，思路问题想和大家探讨一下，希望大家多多指正：1. 某个细胞因子（暂且定义为A）的siRNA干扰48h后，提RNA和Pr，检测细胞膜上某个蛋白（暂且定义为B）的表达水平变化（前期实验结果表明，RNA水平下调，蛋白水平还未做）2. A siRNA 干扰48小时后 提蛋白 做PI3K/Akt，NF-kB的总蛋白和磷酸化水平的WB3. A siRNA 干扰48小时后，NF-kB与蛋白B启动子的双荧光素梅报告系统或 ...

thisiscc 目前仅知道能用GFP做成融合蛋白，并在显微镜下观察，但也不了解更多细节。有熟悉这方面的，能提供一些研究方法，和技术细节不。能告诉哪些相关Publication也行。不甚感激。thisiscc 忘了说了，主要是想看目标蛋白在细胞质与细胞核的分布情况，及其在一定条件下的变化。Thanks again.rongjiansu 免疫荧光法观察处理前后目标蛋白在细胞中的分布，不过抗体的细胞内定位一般不准，不太可靠构建GFP ...

薇安夕夕宝 请问有人了解SHH通路吗？这个通路有激动剂吗？acola SAG C28H28ClN3OS黑糊糊2000 Oxysterols, could be one but not sure can be used for all the cell lines本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

xiaoerlong 求“体内培养”定义lightningwing 能否说的详细些，是抗体这类的体内培养，还是生物医学工程相关的体内培养？xiaoerlong 生物医学工程相关的体内培养（细胞培养方面的）xiaoerlong lightningwing wrote:能否说的详细些，是抗体这类的体内培养，还是生物医学工程相关的体内培养？生物医学工程相关的体内培养xxsl_2007 还真不好回答。体内培养是在动物体内生产所需物质的方法，如 ...

beyond211 不知TGF-β 在培养液里的半衰期是多久，如果我要持续刺激72小时，请问期间是否需要换液并换上新的TGF-β ？slimmerchan 我的经验是不需要，不过到第三天可以看到一些漂浮的死细胞sesame0415 我是在48小时后换液的，在相关文献中看到的…本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

yangguili 酶标仪读数为ovrflw是什么意思Ex：494Em：521读板后显示的OVRFLW，请问是什么意思？wkclive 超过仪器的检测限ZoeYee 超过检测范围了 样品稀释过再测下就行了本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

sunnyhaipo 各位大侠好，我是个实验的初学者。有个问题想求大家的帮助。我想检测一下石蜡标本中是否存在ALK融合基因的表达。ALK基因位于2p23,好像有6000多dp，ALK基因的多个外显子之间通常会有一些其他的基因融合其中从而会产生致瘤作用的融合蛋白。目前发现的可能会与ALK基因融合的其他基因有10来种，我想问一下怎样能够检测标本中是否存在这些融合基因的表达。我查过一些文献，有用FISH的，有用特异探 ...

sunnyhaipo 各位大侠好，我是个实验的初学者。有个问题想求大家的帮助。我想检测一下石蜡标本中是否存在ALK融合基因的表达。ALK基因位于2p23,好像有6000多dp，ALK基因的多个外显子之间通常会有一些其他的基因融合其中从而会产生致瘤作用的融合蛋白。目前发现的可能会与ALK基因融合的其他基因有10来种，我想问一下怎样能够检测标本中是否存在这些融合基因的表达。我查过一些文献，有用FISH的，有用特异探 ...

云向 大家好，我在提RNA ,但在配DEPC水时，和以往有点小不同，以前DEPC都是过夜才容的，有时甚至过夜也不容，但这次我刚加进去，大概等了一个多点就融了，中间我摇晃了三四次，我放在37度恒温箱中了，我很奇怪，这次为什么容那么快，会不会有问题，对了，我是在温水中假的depc水，大家谁还遇到过这种现象，不知道影不影响RNA的提取？外源RNA酶清除剂 没问题，本来DEPC就很容易溶于水。xinyinhancidian 多半是温水的缘 ...

prince1101 非磷酸化抗体是识别总得蛋白的，比如AKT。P-AKT和AKT其实只差一些磷酸基，分子量稍大点，以前听别人讲P-AKT和AKT之间有shift，有时候WB是可以做出来的。用的是梯度胶？分子量在68KD左右。应该怎么样来配胶呢？梯度胶的浓度？谢谢！prince1101 希望高手能赐教！ourlab 某些 AKT抗体，如cell signaling, #9272, 不能识别磷酸化AKT，只能识别非磷酸化AKT。所以，最好用磷酸化 ...

fwangaust 我现在正在用NIH 3T3细胞转染质粒后，做CHIP实验。细胞裂解后超声，在验证超声效果时，超声前和超声后在600bp左右总有一很强的带，我用RNA酶处理过，这究竟是什么？是否会影响后面的实验？keaanu 我也遇到同样的问题，估计是蛋白-DNA复合物，带蛋白多的DNA电荷多，所以跑得快qyhxwxl 请问这种问题该怎么解决呢？解交联，还是提dna或者兼有之，盼复！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思 ...

aoc_chen 大家好，现在打算用BD Growth Factor Reduced Matrigel来做体外血管生成实验，请问这个胶买回来需要稀释吗？文献只说了24孔板每孔加250ul胶，然后上面再铺人脐静脉内皮细胞，我不明白这250ul是稀释后的还是原液？若是稀释后的，是多大比例稀释！不甚感激！ascorpio1 不需要稀释aoc_chen 谢谢楼上兄弟！roy2929 稀释一下省钱hlj8509_丁香 24孔做成管不太好。1、浪费matri ...

kandr20051 最近在做细胞实验，用的是WST-1检测细胞活性。在检测的前72个小时，实验都符合预期，给药组的OD值比阴性对照组的要低，但是到了96个小时以后，WST-1的结果就逆转了。给药组的OD值远远高于阴性对照组。但最奇怪的是，WST-1的检测结果与我镜下观察到的细胞形态和多少完全不同！这是阴性对照组这是给药组的为什么会出现这种结果呢？zhuzhihui 这个我也在做，能有个稳定结果确实比较难。楼主可以考虑一 ...

aalu 癌细胞与同种同类型正常组织细胞融合会出现什么现象？为什么？请标明文章的名称出处，谢谢!jiachengtang 你自己的看法呢？查过文献么？交流是相互的aalu 我没有查到文章，我不敢武断的下结论。不过我感觉应该试着从多个角度来分析。一方面，经典的癌基因、抑癌基因来看；另一方面，细胞质决定细胞命运（可能夸大了）的角度，这里包括两种甚至多种情况，我试着说两种，（1）癌细胞染色体完整（2）癌细胞染色体异常。。。本文由丁香园论坛 ...