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        【求助】磷酸化ERK1/2的过表达

        丁香园论坛

        5186
        请问各位高手,有没有构建过表达磷酸化ERK1/2的质粒?
        因为我所要验证的通路是对ERK1/2磷酸化的抑制作用,必须要一个能够过表达磷酸化ERK1/2的质粒进行干预,请问能否构建这样的质粒?
        表达磷酸化ERK1/2的质粒倒是没听说过,但是ERK1/2的质粒应该是有的。我们曾经构建过akt的强制表达质粒。为何要表达呢?可以采用一定的刺激因子使磷酸化ERK1/2表达升高,再用你的因素处理即可,这样不就省事了吗?
        liubingood wrote:
        表达磷酸化ERK1/2的质粒倒是没听说过,但是ERK1/2的质粒应该是有的。我们曾经构建过akt的强制表达质粒。为何要表达呢?可以采用一定的刺激因子使磷酸化ERK1/2表达升高,再用你的因素处理即可,这样不就省事了吗?

        确实是个办法,这样就不需要构建质粒了。
        可是,是否有特异性的刺激ERK1/2磷酸化的刺激因子呢?怕的就是非特异性的刺激因子对其他的干扰。
        不知道你用的细胞体系是什么样的,是否已知表达某种受体?一般来说,用大部分受体的激动剂都可以激活下游的ERK信号。或者用foskolin, PMA等蛋白激酶的激活剂也能达到这个效果。
        amygdala wrote:
        不知道你用的细胞体系是什么样的,是否已知表达某种受体?一般来说,用大部分受体的激动剂都可以激活下游的ERK信号。或者用foskolin, PMA等蛋白激酶的激活剂也能达到这个效果。
        我是想要做in vivo,构建质粒后局部注射给药的。很多激动剂是有动物毒性的,所以想要构建质粒。
        磷酸化在ERK1/2质粒不能构建,因为磷酸化蛋白在修饰,这在基因水平上是不能体现的。考虑下别在方法,通路激动剂等,不过也要考虑细胞毒性在问题。
        请问你后来构建载体了吗

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

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