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lxqsh 现在有一株稳定细胞株，这株细胞在构建质粒的时候用的是带EGFP荧光（绿色）的载体，现在打算在这个稳定细胞株的基础上包病毒，可是包装体系里的空载也是绿色荧光，因为两种空载都是带绿色荧光的，不知道如果确定包病毒的效率及如何筛选稳定细胞？希望大家多多指教~david_xmu 有更具体的信息没？比如你的细胞株名称，病毒是慢病毒还是腺病毒？你的病毒包装质粒图谱？一般都会有筛选marker的，比如G418等。lxqsh 稳定 ...

自助者wl 之前看了坛子里讨论自噬的帖子和一些文献,感觉大家比较倾向于自噬在损伤过程中起一些积极的保护作用,我想问问大家目前有无研究显示,或者大家认为损伤过程中发生的自噬能对修复起阻碍作用,尤其在神经系统损伤修复中,对内源性干细胞起不利的作用?有兴趣的请进来讨论下!wangkai0418 有些干细胞中的自噬促进其分化niocle 我认为，如果按你说的做，对于临床研究意义会很小的，不受关注。本文由丁香园论坛提供，想了解更多 ...

lanzhou3242 我想问一下，到底是Rhodamine 123黄绿色荧光强度越强，线粒体膜势能越高，还是相反？有的说Rhodamine 123进入活细胞的线粒体后显示的荧光是弱的或者是不发光的，而有的说被活细胞线粒体俘获后显示很强的荧光强度，我做药物对细胞凋亡的影响，是不是control应该很强，而随着凋亡的增加，其线粒体膜势能降低，所以黄绿色荧光强度更弱？fis1314 看得比较多的观点是正常的强，凋亡的弱zhuqu ...

timeanddoctor 凌晨6时抽取病人静脉血，EDTA抗凝，4摄氏度保存，3小时后常温离心，转速4000转5分钟，打算做流式细胞术。看看还能用么，谢谢！希望能碰到有解释一下的战友（最好从最基础的开始），谢谢了！timeanddoctor 血浆是放在多少度保存？juan850920 颠倒混匀后还是可以的，标本放在4度大概两三天还能测流式，但最好不要离心yugicheung 看上去溶血挺嚴重的～本文由丁香园论坛提供，想了解更多 ...

iternol 怎么鉴定肿瘤耐药细胞株啊？求各位给点方法。yzg831 相关报道的文献是关键1. 分子水平：WB,qpcr鉴定相关报道的耐药marker2. 表型：直接用报道的药物剂量处理细胞，看其与对照非耐药株的敏感性反应，有没有不同涛声依旧神游天下 你有肿瘤耐药株么？测IC50啊，与亲本株进行比较本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongc ...

verarzhch 因实验急用，求一点质粒，检验细胞是否发生自噬。RFP-LC3或myc-LC3。谢谢！本人在上海，可购可换。bzy0222 我有GFP-LC3。yzg831 我们实验室也有的喜龙 bzy0222 wrote:我有GFP-LC3。请问您的质粒是购自哪里的，能不能用来转染RAW264.7细胞。bzy0222 我不知道呢，来自addgene06lzj 同求rfp-lc3质粒！gregoryhjk 呃，质粒这个东西还是牵涉到知识产权的。EG ...

kfh2008 求助，请问，微量加样枪量程那里的三个数字不在同一个直线上，总是对不齐，怎么样才能调回正常。谢谢。dlzhangyu 要看你的牌子是什么，一般都附有一个小的塑料扳手用来调整。Eppendorf和Gilson的好像没有，他们的枪直接送修即可，他们有这项服务的。sakingoow 请问德国eppendorf如何送修呢，怎么找不到联系方式啊kfh2008 dlzhangyu wrote:要看你的牌子是什么，一般都附有一个小 ...

小红赛 我目前在做药物靶向治疗肿瘤的课题，想在肿瘤细胞水平上以P53—MDM2为靶点，研究阻断MDM2或阻止P53水解时的信号变化及对细胞生长的影响，但目前不知道在P53—MDM2这个靶点上，有什么好的药物或者抑制剂，能用于细胞水平研究的，谢谢selleckchem01 在这个靶点下面两个抑制剂都可以用于细胞试验~Nutlin-3Nutlin-3 is a MDM-2 antagonist with an IC50 of 90 nM. It induces the exp ...

veritassea 各位大侠大家好，我想用腺病毒载体基因体内转染小鼠的DC细胞和T细胞，但是有人说这些免疫细胞体内转染的效率非常低，具体是多少也不知道。请问究竟转染效率低于多少就不能应用于实验呢？如果这样不可行的话，还有其他的办法吗？谢谢各位指导！david_xmu 滴度整高点，大于10的12次方VP。veritassea 好的，谢谢！我会试试看。万胖宝宝 楼主好，我也在做这方面的实验，请问你现在做的怎么样了，可否交流一下！万胖 ...

lxqsh 请教大家，以下是本人跑的WB结果图。本人不明白那一团黑的是什么回事，跟右边那个条带都不是一回事儿？如果是表达太强的话，那也最起码应该是很黑很粗类似线样的条带吧，可是我跑出来的结果就是整个泳道都是黑的。用同样的蛋白重跑了一次还是这个结果，请问是不是我的细胞或者是蛋白有问题呢？或者是还可能有什么其他的原因呢？多多指教，不胜感激！dlzhangyu 是不是忘记煮蛋白了？lxqsh 没有，所有蛋白都是统一变性的。dlz ...

liteng1117 最近才开始做磷酸化的Wb，选择抗体的时候发现，不同的磷酸化位点有不同的抗体，必须要找到刺激因素与磷酸化蛋白的位点吗？这个是特异性的吗dlzhangyu 一般是从文献里找，看别人选什么磷酸化的抗体就用什么。也可以直接看抗体的说明书。liteng1117 哦，谢谢大侠，还有个小问题，那个磷酸化的Wb，提蛋白的时候都必须要加磷酸酶抑制剂吗？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实 ...

jiaoyang1978 蛋白质中有6个半胱氨酸，随机形成3个二硫键的方式有多少种？selleckchem01 这个不能用概率论来算的吧~jiaoyang1978 不是作实验什么的，是课后题，答案是30，不知道怎么算的，故求解法。dlzhangyu 就是用排列组合算的嘛，二硫键的形成需要两个半胱氨酸的残基上的硫原子，实际上类似这样，你画一个圆圈，上面有六个点，问连成三条线的方法有几种。那么你随便选一个点，连接另外一个点，有5种方 ...

冰之鱼 如题： 肿瘤原发灶肿瘤细胞和转移灶肿瘤细胞的细胞活性是否完全一样？有哪些指标可以评价？另外，体现肿瘤细胞特性的指标有哪些？比如增殖周期什么的。我对这方面了解的少，一时也不知道看什么资料， 请帮忙推荐本书看，谢谢~~冰之鱼 有没有人给回答一下啊？冰之鱼 怎么没人管，没人问啊，自己顶！！！！！！！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

zhao7253 我想在肺组织做药物抑制平滑肌细胞增殖的细胞周期检测，药物作用于微管导致细胞复制停止于G0/G1和G2/M期，怎么选择周期蛋白呢？此药物能稳定已聚合的微管和增强微管的装配，因此导致细胞复制大部分在G0/G1 和 G2/M期受到抑制，急！！！！！！！！！！！！！！谢谢zhao7253 要能做WB和PCR的，谢谢！！！！！zhao7253 谢了 我再研究下本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以 ...

dxm2005128210 求助怎样大批冻存细胞并复苏因为我的实验要一次性冻存10的8次方至9次方数量级的原代提取细胞，可是每个冻存管里细胞数要控制在10的6次方至7次方，也就是一次要冻存十几或二十管细胞。然后要同时复苏这些细胞，在复苏的过程中，细胞管数太多，全部复苏的时间也很长，以至于离心细胞悬液的时候出现大团的絮状物，考虑可能是细胞死亡，细胞内的核酸、蛋白等物质释放出来。那团絮状物吹不散，最后计数仅获得冻存前 ...

pljj2046 各位高手，小弟想根据基因来查询其所对应的microRNA,请问用什么工具啊？TargetScan用不成了吧？**赐教~~~pljj2046 大家元宵吃完了给我讲讲啊~~~pljj2046 高手们快出现啊~~~帮帮忙啊本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

konglingrufeng 之前实验设计A组 小鼠成骨前体细胞（MC3T3-E1)+阳性诱导剂+培养基B组 小鼠成骨前体细胞（MC3T3-E1)+实验诱导剂+培养基C组 小鼠成骨前体细胞（MC3T3-E1)+阳性诱导剂+实验诱导剂+培养基D组 小鼠成骨前体细胞（MC3T3-E1)+培养基诱导相同天数后在免疫荧光结合共聚焦显微镜技术下，半定量测定OPG/RANKL表达，差异有统计学意义问题1.接下来，能选择一条通路，加阻断剂，然后还是用免疫荧 ...

yanjing2001 我用药物处理细胞后，流式检测细胞周期，G1期增加，S期减少，G2基本没有什么变化问题一：这是说明药物把细胞阻滞在G1期吗？问题二：把细胞阻滞在G1期与G1/S期阻滞是相同的意思吗？问题三：想进一步通过western blot 检测cyclin确定G1期阻滞，应该检测cyclin d,还是cyclin d1呢，为什么请大家帮忙！sunzhihong490 1.这的看你的细胞组织在G1起的百分比了，随着药物浓度的增加 ...

zhuhuachao 请问各位战友， western-blot法测得的结果是你所要检测蛋白的总蛋白还是只包括游离的蛋白？或者说该目标蛋白与其他蛋白结合以后，western-blot法结果上是否有所反应？amygdala 一般来说，western blot检测到的是包括游离态和聚合态的总蛋白，目标蛋白与其他蛋白结合的情况下也能检测出来。能否检测取决于抗体的识别位点是否存在，通常情况下目标蛋白的抗体识别位点不会受其形成复合物影 ...

wzmclf 各位，谁有NF-kB参于凋亡途径这方面的图，急用。谢谢有的话能给我一份吗chenyumei_ttkj Nuclear factor kB (NF-kB) is a nuclear transcription factor that regulates expression of a large number of genes that are critical for the regulation of apoptosis, viral replication, tumorigenesis, inflammatio ...