【求助】干细胞培养：换液后之前贴壁的细胞不见了！（仍可见部分贴壁细胞）
丁香园论坛
3324
一直在养骨髓间充质干细胞，年前出现了一次细胞污染，年后我改用进口血清，同时每次配完液（低糖DMEM+10%血清+双抗）后都用滤器过滤一下，最近发现细胞不肯长，甚至之前都贴壁生长的细胞换完液后2天大半都不见了，但还可见一些贴壁细胞（换液前后的培养液配置都是一样的），现在我也不知道问题出在哪里，还请各位高手多多指教！
我想，你可以从以下几个方面考虑：
1，是不是你的双抗浓度太高了呀
2你的细胞是第几代了，若原代，换液时应轻柔一些，若代数较高，是不是细胞的增值速度慢了呀
3，应考虑一下你的细胞的接种密度
1，是不是你的双抗浓度太高了呀
2你的细胞是第几代了，若原代，换液时应轻柔一些，若代数较高，是不是细胞的增值速度慢了呀
3，应考虑一下你的细胞的接种密度
宋丽娟1016 wrote:
我想，你可以从以下几个方面考虑：
1，是不是你的双抗浓度太高了呀
2你的细胞是第几代了，若原代，换液时应轻柔一些，若代数较高，是不是细胞的增值速度慢了呀
3，应考虑一下你的细胞的接种密度
2 换液时还算比较轻揉，之前也是这么做的，我是原代的细胞
3 细胞接种密度，之前我也这么做的还好，就是最近出现这样的问题
谢谢宋丽娟1016
无图无真相！
1,换液的时候是不是在清洗的时候，力度太大，细胞被冲刷掉了？最好在换液冲洗的时候，别对着培养皿的底部，可以滴管头对着侧壁，避免冲刷细胞。
2，可以双抗减量。
2，可以双抗减量。
不用过滤，用DMEM/F12，血清浓度可以达到30%，最高达50%，复苏时立即去除DMSO
这种细胞应该贴壁能力很强的，所以考虑不是操作的问题。
因为感觉描述不是那么清晰，所以只能猜着，楼主看看有没有对的上的：
1. DMEM买过来多久了（保质期过了没）？
2. 年后用的新血清，开始时候细胞有比年前漂浮现象增多吗？(同一种血清？都热灭活过或者什么的？)
3. 当然，干细胞，往往传代次数很关键，楼主是做这个的，应该注意这种细胞的代数了吧。
因为感觉描述不是那么清晰，所以只能猜着，楼主看看有没有对的上的：
1. DMEM买过来多久了（保质期过了没）？
2. 年后用的新血清，开始时候细胞有比年前漂浮现象增多吗？(同一种血清？都热灭活过或者什么的？)
3. 当然，干细胞，往往传代次数很关键，楼主是做这个的，应该注意这种细胞的代数了吧。
本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴
师兄微信号：shixiongcoming
