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        【求助】干细胞培养:换液后之前贴壁的细胞不见了!(仍可见部分贴壁细胞)

        丁香园论坛

        3307
        一直在养骨髓间充质干细胞,年前出现了一次细胞污染,年后我改用进口血清,同时每次配完液(低糖DMEM+10%血清+双抗)后都用滤器过滤一下,最近发现细胞不肯长,甚至之前都贴壁生长的细胞换完液后2天大半都不见了,但还可见一些贴壁细胞(换液前后的培养液配置都是一样的),现在我也不知道问题出在哪里,还请各位高手多多指教!
        我想,你可以从以下几个方面考虑:

        1,是不是你的双抗浓度太高了呀

        2你的细胞是第几代了,若原代,换液时应轻柔一些,若代数较高,是不是细胞的增值速度慢了呀

        3,应考虑一下你的细胞的接种密度
        宋丽娟1016 wrote:
        我想,你可以从以下几个方面考虑:

        1,是不是你的双抗浓度太高了呀

        2你的细胞是第几代了,若原代,换液时应轻柔一些,若代数较高,是不是细胞的增值速度慢了呀

        3,应考虑一下你的细胞的接种密度
        1 我买的是GIBCO的双抗,100×的,500ml培养液加5ml。双抗浓度分别是100 U/mL penicillin , 100 ug/mL streptomycin
        2 换液时还算比较轻揉,之前也是这么做的,我是原代的细胞
        3 细胞接种密度,之前我也这么做的还好,就是最近出现这样的问题
        谢谢宋丽娟1016
        无图无真相!
        1,换液的时候是不是在清洗的时候,力度太大,细胞被冲刷掉了?最好在换液冲洗的时候,别对着培养皿的底部,可以滴管头对着侧壁,避免冲刷细胞。

        2,可以双抗减量。
        不用过滤,用DMEM/F12,血清浓度可以达到30%,最高达50%,复苏时立即去除DMSO
        这种细胞应该贴壁能力很强的,所以考虑不是操作的问题。
        因为感觉描述不是那么清晰,所以只能猜着,楼主看看有没有对的上的:
        1. DMEM买过来多久了(保质期过了没)?
        2. 年后用的新血清,开始时候细胞有比年前漂浮现象增多吗?(同一种血清?都热灭活过或者什么的?)
        3. 当然,干细胞,往往传代次数很关键,楼主是做这个的,应该注意这种细胞的代数了吧。

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

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