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看了标题点进来的，想必是想学得师姐一招半式，好在实验中大展拳脚。不会让大家失望的，今天就谈谈分子克隆的独家经验，可以回复目录查看以往师姐传授的经验。务必做好对照一定要做好对照，各种对照，只要你能想到。做的时候千万不要偷懒。比如构建质粒，我最后转化会至少分三个平板，一个涂实验组，一个涂连接过程不加酶的对照（用于估计酶的活性和转化的阳性率），一个涂不加质粒的感受态细胞（用于确定感受态本身没有被污染，或是抗生素没有失效）。 ...

几乎每个做实验的朋友每天不知道要离心多少次，其中有一步配平，你真的会吗？现在考你一个问题，多半会答错。给你 n（n 取值为 1-24）个离心管，每个离心管内液体一样。这 n 个管都需要离心，且没有额外的配平管，有一个 24 孔离心机，请问 n 有多少种情况下不能离心？相信大家使用离心机时，都会遇到这样的问题：需要用 24 孔离心机离素数个管子。一般的做法是要再取一个离心管加水称重配平，这有些麻烦。偶数个自然，偶数个管肯定能配平，堆成放两边，所以偶数就不用考虑了。 ...

算算今年，总共有 11 个日本人获得诺贝尔物理奖。日本的物理科研这么强，对我们做生物科研有何借鉴呢？在我的研究生期间，辗转于北大，日本 KEK，和美国的 BNL。接触了三个不同地方的科研环境，相差还是非常的大。北大实验室给我打下扎实的基础，在日本 KEK 学到了努力和坚持是多么得重要，美国 BNL 给了我充分的自由和想象的空间。1. 日本科学家每天亲自做实验我在研二的时候去了日本 KEK 的国际直线对撞机部，参与超导加速器的预研。野口修一博士是我当时的导师 ...

细胞计数，看起来简单，其实暗藏玄机。今天就一起来学习下如何计数。1.原理计算细胞数目可用血球计数盘或是 Coultercounter 粒子计数器自动计数。血球计数盘一般有二个 chambers，每个 chamber 中细刻 9 个 1 mm² 大正方形，其中 4 个角落之正方形再细刻 16 个小格，深度均为 0.1 mm。当 chamber 上方盖上盖玻片后，每个大正方形之体积为 1 mm²×0.1 mm=0.0001 mL。使用时，计数每个大正方形内之细胞数目，乘以稀释倍数，再乘以 10000，即为每 mL 中之细 ...

做 MTT 实验容易走弯路。此前我们汇总过部分 MTT 实验相关细节，可点击阅读原文查看。今天继续和大家一起来谈谈MTT 实验步骤贴壁细胞相关实验操作1. 收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入 100 uL 铺板使待测细胞调密度至 1 000-10 000 孔（边缘孔用无菌 PBS 填充）。2. 5% CO2，37℃ 孵育，至细胞单层铺满孔底（96 孔平底板），加入浓度梯度的药物。原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药。一般 5-7 个梯度。每孔 100 uL ...

我做不出来克隆的时间长达半年，期间克隆实验方面许多问题都遇到过，现在总结主要的一些问题和大家交流，希望大家以后不要犯我一样的错，少走弯路。1. 感受态要验证感受态细菌本身有质粒污染，这个问题困扰了我三个月，一直到最近才找到原因，我这里犯了最大的错是没有做过感受态检测。也许大家奇怪为什么在三个月内的时间里没有怀疑到感受态，不用奇怪，因为感受态「表现的太正常了」，每次涂板都长菌斑，每板 20-30 左右，很正常。我一个同学用这样的 ...

跑电泳的时候，也许很多人会羡慕别人的电泳条带清晰好看，自己的电泳条带有时候弥散，有时候歪歪扭扭。熟能生巧，只要你掌握正确操作步骤，你也可以跑得得心应手。清洗玻璃板蘸点洗洁精轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲，再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。若不继续使用，需用无水乙醇擦拭后晾干再妥善收起来，玻璃板之间垫玻璃纸隔开。梳子应用水洗干净，临用前用无水乙醇擦拭晾干。灌胶与上样1. 玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上 ...

据统计，约有 30% 细胞系被交叉污染或错误辨识，因使用了交叉污染或错误辨识的细胞会导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗失败等。不仅浪费大量时间、精力和金钱，还可能造成不可挽回的灾难性后果。为此，很多细胞库现在都要对提交来的细胞系进行鉴定，并对细胞系之间的交叉污染进行监测。

我的课题涉及 Transwell 侵袭实验，因此在这里和大家分享 Transwell 侵袭实验。实验用品1.Transwell 小室我用的是 ECM554，用完后擦去基质胶，再用胰酶和 75% 酒精泡，可以把膜洗得很干净，用前用紫外里外都照 30 min。处理方法：用棉签轻轻擦去胶和反面细胞，清水冲洗，超声清洗，低档，30 min，清水 3×5 min，蒸馏水 3×5 min，室温凉干，用前紫外线小室正面 3 h，反面 6 h，微波，低火 10 min×2。因为我买的是铺好胶的，所以没买 Matrigel，二 ...

第一次写论文是不知从何处下手，第一次投递论文依然是不知所措。今天就手把手详解论文投稿步骤及潜规则。投稿程序1. 选择合适的 SCI 期刊，结合专业知识，根据年度影响因子表和他人经验来综合选择要投递的期刊，并进入该期刊查询系统查询近年来的文章走向。2. 下载：进入每个杂志的首页，打开 submit paper 一栏，点击 Introduction 查看或下载即可。3. 稿件及其相关材料准备：Manuscript.doc、Tables.doc、Figures. ...

出国留学是很多生物学专业的深造首选。相比国内读研读博，出国回来更给人高大上的感觉，也总让人艳羡。今天一起来聊聊出国留学那些事。出国要趁早在国外留学，一般读中学的年均费用大于大学，读大学的年均费用又大于读硕士研究生，到国外读博士，不少申请者都可以申请到奖学金而不用另外交钱了。故从支出的教育费用来看，越早到国外留学，花的钱就越多。到国外读中学，一般并不是因为国外中学的教育水平高于国内中学教育水平，而是觉得到国外读中学 ...

灭菌操作是实验标配。离心管、试管等要放到灭菌锅里灭菌，操作台要提前紫外灭菌，操作时要戴无菌手套，手要用酒精消毒等等。你觉得麻烦吗？有没有相过，要是用手一捏或用牙一咬就能咬死，那不是更方便？化学博士从专业的角度给你解释一下是否可以这样暴力灭菌。捏死细菌？「手掌用力一握」，这是一个宏观的物理描述，我们要知道宏观的力（压强）并不必然等于微观的力（压强）。只要保证接触面就足够小，手掌的力量挤破细菌完全是小菜一碟，因此宏观的受力 ...

如何发表 SCI 论文，很多人都有谈到这个话题。所以，今天将 SCI 论文发表中大家可能比较感兴趣的一些小技巧整理出来，与大家分享。SCI 论文没那么难要熟悉你的专业，实验方法。要尊重结果，实事求是面对结果。下笔之前多看看文献，尤其是国外近期文献。相信只要是正确实验得来的结果都是可以解释的，是可以发表的。对于初写者，「抄写」不可避免，妙在「抄写」技巧。同类性质的研究文章，撰写格式大同小异，所以，格式可以「照抄」。常用句型可灵活「抄」用。有些描述性 ...

有些道理，我们都懂，却做不到，因为没有经历过。当你读完博，各种滋味都品尝过，再来看这些道理，感慨良多。做更好的自己读博期间，我看到了很多比我优秀的人才，无论是智力、美貌、才华、学术能力还是背景。我一度给自己贴上平庸的标签。后来当我的科研做出一点小成绩，当众人向我投来羡慕和敬佩的眼光，我发现不平庸也没那么难。唯有你自己内心的平庸，才是毁掉你人生的平庸。做更好的自己，永远不要觉得自己做得还不错，永远在路上。不和别人对比书读 ...

小课堂又要开始啦话说label-free这个蛋白质组学方法实在是有些尴尬。这个方法有可能是进入组学研究以来方法的鼻祖，现在却面临着不大受待见的境地。不管是从pubmed上搜索关键词还是从项目结果中统计，使用label-free的项目数量远低于使用label的定量蛋白质组学研究，如现在仍很火热的iTRAQ、有后起之秀态势的TMT、或者有高实验要求的SILAC。今天我们不谈为什么label-free远没有iTR ...

一步步教你BL_420F/S 生物信号采集与分析系统驱动程序的安装方法，附图说，让你轻松理解、简易安装。

为最大程度的保证实验结果，我们推荐客户严格遵循 CST 的实验操作方法，这些实验方法经过 CST 科学家的反复验证，能够保证实验结果的精确性和可重复性。

季博心中有个结，当年在复旦工作的时候，帮一位临床医生看课题，结局是拿了两个国自然面上。这个结局很好吗？如果好，就不是季博心中的结了。因为，由于实验技术的限制，没能有 5 分以上的文章。在做科研中，有两个事情，一个是提出科学问题后，我知道怎么去做。另一个是，我怎么做到。「知道」和「做到」。其实国自然中「可行性分析」说是给专家看的，其实是给我们自己看的。如果一个课题仅仅知道怎么做，却不能「做到」，对于临床疾病的研究，又有什么用呢。季博不断 ...

话说肿瘤医院的熊主任自从看到陈博上期的《CAR-T 实体瘤靶点英雄谱：夜空中最闪亮的星》之后，鸡血满满，奋发图强要做 CAR-T 实体瘤研究！派出得力干将汪博士！选择靶标！设计载体！体外验证！体内实验！过伦理！上临床！出任院长！迎娶白富美！走上人生巅峰！然而，半年过去了，熊主任内牛满面抱着陈博大腿哭诉：「一入 CAR-T 深似海，从此节操是路人」「为啥我的实验不顺利？」「为啥 CAR-T 研究到处都是坑？」陈博也很无奈：「老熊啊，你就是太顽皮，讲座听得不认真， ...

在科技论文写作中有一种说法是为了体现科学的客观性，要用被动语态，不能用第一人称（we, I）做主语的语句。今天我们就来讨论语态的问题。虽然说科学研究要强调客观性，但是一项研究的设计，假说的提出，实验的操作，以及对实验结果的解读还是由文章的作者完成的，而且对文章的署名也表示作者对 文章内容的真实性负责。一篇论文从研究到写作总是带有一定的主观性，不会因为使用了被动语态就不存在主观性。因此现在很多期刊其实鼓励使用主动语态，包括 以 ...