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        内切酶的热失活参数

        互联网

        17080

        热失活是终止酶切反应的一种简便易行的方法。大多数最适反应温度是37℃的酶在65℃下温育20分钟即可失活。一些在65℃下不能失活的酶如将温度升高至80℃,温育20分钟也可失活。下表注明了每种酶的失活条件。

        在50μl的反应体系中,37℃条件下,以0.5μg小牛胸腺DNA作为底物,加入5-10μl内切酶及相应缓冲液,反应60分钟,然后升温至65℃或80℃温育20分钟进行热失活。在上述混合液中加入0.5μg底物DNA(通常为λDNA),调节温度至最适反应温度,温育60分钟。若琼脂糖电泳显示底物部分或完全被消化,则表明该酶没有完全被热失活。

        Enzyme Heat Inactivation (temperature)
        Aat II Yes (65°C)
        Acc I Yes (80°C)
        Acc65 I Yes (65°C)
        Aci I Yes (65°C)
        Acl I No
        Acu I Yes (65°C)
        Afe I Yes (65°C)
        Afl II Yes (65°C)
        Afl III Yes (80°C)
        Age I Yes (65°C)
        Ahd I Yes (65°C)
        Ale I Yes (65°C)
        Alu I Yes (65°C)
        Alw I Yes (65°C)
        AlwN I Yes (65°C)
        Apa I Yes (65°C)
        ApaL I No
        ApeK I No
        Apo I Yes (80°C)
        Asc I Yes (65°C)
        Ase I Yes (65°C)
        AsiS I Yes (80°C)
        Ava I Yes (80°C)
        Ava II Yes (65°C)
        Avr II No
        Bae I Yes (65°C)
        BamH I No
        Ban I Yes (65°C)
        Ban II Yes (65°C)
        Bbs I Yes (65°C)
        Bbv I Yes (65°C)
        BbvC I Yes (80°C)
        Bcc I Yes (65°C)
        BceA I Yes (65°C)
        Bcg I Yes (65°C)
        BciV I Yes (65°C)
        Bcl I No
        Bfa I Yes (80°C)
        BfrB I Yes (80°C)
        BfuA I Yes (65°C)
        BfuC I Yes (80°C)
        Bgl I Yes (65°C)
        Bgl II No
        Blp I No
        Bme1580 I Yes (80°C)
        BmgB I Yes (65°C)
        Bmr I Yes (65°C)
        Bmt I Yes (65°C)
        Bpm I Yes (65°C)
        Bpu10 I Yes (80°C)
        BpuE I Yes (65°C)
        Bsa I Yes (65°C)
        BsaA I Yes (80°C)
        BsaB I Yes (80°C)
        BsaH I Yes (80°C)
        BsaJ I Yes (80°C)
        BsaW I Yes (80°C)
        BsaX I No
        BseR I Yes (65°C)
        BseY I Yes (65°C)
        Bsg I Yes (65°C)
        BsiE I Yes (80°C)
        BsiHKA I Yes (80°C)
        BsiW I Yes (80°C)
        Bsl I Yes (80°C)
        Bsm I Yes (80°C)
        BsmA I Yes (80°C)
        BsmB I Yes (80°C)
        BsmF I Yes (80°C)
        BsoB I No
        Bsp1286 I Yes (65°C)
        BspCN I Yes (80°C)
        BspD I Yes (65°C)
        BspE I Yes (80°C)
        BspH I Yes (65°C)
        BspM I Yes (65°C)
        Bsr I Yes (80°C)
        BsrB I Yes (80°C)
        BsrD I Yes (80°C)
        BsrF I No
        BsrG I Yes (80°C)
        BssH II Yes (80°C)
        BssK I Yes (80°C)
        BssS I Yes (80°C)
        BstAP I Yes (80°C)
        BstB I No
        BstE II No
        BstF5 I No
        BstN I No
        BstU I No
        BstX I Yes (65°C)
        BstY I Yes (80°C)
        BstZ17 I No
        Bsu36 I Yes (80°C)
        Btg I Yes (80°C)
        BtgZ I Yes (80°C)
        Bts I Yes (80°C)
        Cac8 I Yes (65°C)
        Cla I Yes (65°C)
        CviA II Yes (65°C)
        Dde I Yes (65°C)
        Dpn I Yes (80°C)
        Dpn II Yes (65°C)
        Dra I Yes (65°C)
        Dra III Yes (65°C)
        Drd I Yes (65°C)
        Eae I Yes (65°C)
        Eag I Yes (65°C)
        Ear I Yes (65°C)
        Eci I Yes (65°C)
        EcoN I Yes (65°C)
        EcoO109 I Yes (65°C)
        EcoR I Yes (65°C)
        EcoR V Yes (80°C)
        Fat I Yes (65°C)
        Fau I Yes (65°C)
        Fnu4H I Yes (65°C)
        Fok I Yes (65°C)
        Fse I Yes (65°C)
        Fsp I Yes (65°C)
        Hae II Yes (80°C)
        Hae III Yes (80°C)
        Hga I Yes (65°C)
        Hha I Yes (65°C)
        HinP1 I Yes (65°C)
        Hinc II Yes (65°C)
        Hind III Yes (65°C)
        Hinf I Yes (80°C)
        Hpa I No
        Hpa II Yes (65°C)
        Hph I Yes (65°C)
        Hpy99 I Yes (65°C)
        Hpy188 I Yes (65°C)
        Hpy188 III Yes (65°C)
        HpyCH4 III Yes (80°C)
        HpyCH4 IV Yes (65°C)
        HpyCH4 V Yes (65°C)
        I-Ceu I Yes (65°C)
        I-Sce I Yes (65°C)
        Kas I Yes (65°C)
        Kpn I No
        Mbo I Yes (65°C)
        Mbo II Yes (65°C)
        McrBC Yes (65°C)
        Mfe I Yes (65°C)
        Mlu I Yes (65°C)
        Mly I Yes (65°C)
        Mme I Yes (80°C)
        Mnl I Yes (65°C)
        Msc I Yes (65°C)
        Mse I Yes (65°C)
        Msl I Yes (65°C)
        Msp I Yes (65°C)
        MspA1 I Yes (65°C)
        Mwo I No
        Nae I Yes (65°C)
        N.Alw I Yes (80°C)
        Nar I Yes (65°C)
        N.BbvC IA Yes (80°C)
        N.BbvC IB Yes (80°C)
        N.BstNB I Yes (80°C)
        Nci I No
        Nco I Yes (65°C)
        Nde I Yes (65°C)
        NgoM IV Yes (80°C)
        Nhe I Yes (65°C)
        Nla III Yes (65°C)
        Nla IV Yes (65°C)
        Not I Yes (65°C)
        Nru I Yes (65°C)
        Nsi I Yes (65°C)
        Nsp I Yes (65°C)
        Pac I Yes (65°C)
        PaeR7 I No
        Pci I Yes (65°C)
        PflF I Yes (65°C)
        PflM I Yes (65°C)
        Pho I No
        PI-Psp I No
        Pl-Sce I Yes (65°C)
        Ple I Yes (65°C)
        Pme I Yes (65°C)
        Pml I Yes (65°C)
        PpuM I No
        PshA I Yes (65°C)
        Psi I Yes (65°C)
        PspG I No
        PspOM I Yes (65°C)
        Pst I Yes (80°C)
        Pvu I Yes (80°C)
        Pvu II No
        Rsa I Yes (65°C)
        Rsr II Yes (65°C)
        Sac I Yes (65°C)
        Sac II Yes (65°C)
        Sal I Yes (65°C)
        Sap I Yes (65°C)
        Sau96 I Yes (80°C)
        Sau3A I Yes (65°C)
        Sbf I Yes (65°C)
        Sca I Yes (80°C)
        ScrF I Yes (65°C)
        SexA I Yes (65°C)
        SfaN I Yes (65°C)
        Sfc I Yes (65°C)
        Sfi I No
        Sfo I Yes (65°C)
        SgrA I Yes (65°C)
        Sma I Yes (65°C)
        Sml I No
        SnaB I Yes (80°C)
        Spe I Yes (65°C)
        Sph I Yes (65°C)
        Ssp I Yes (65°C)
        Stu I Yes (65°C)
        Sty I Yes (65°C)
        StyD4 I Yes (65°C)
        Swa I Yes (65°C)
        Taq I Yes (80°C)
        Tfi I No
        Tli I No
        Tse I No
        Tsp45 I No
        Tsp509 I No
        TspR I No
        Tth111 I No
        Xba I Yes (65°C)
        Xcm I Yes (65°C)
        Xho I Yes (65°C)
        Xma I Yes (65°C)
        Xmn I Yes (65°C)
        Zra I Yes (80°C)

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